以水楊苷和CCP為參照的蜂膠中楊樹膠檢測方法分析

□ 馬 巍 長春市食品藥品檢驗中心

蜂膠有潤膚生肌、消炎止痛的功效，可治療胃潰瘍、口腔潰瘍、燒燙傷、皮膚裂痛及防輻射等病癥[1]。在我國，楊樹和其雜交屬的芽苞分泌物是蜂膠的主要植物來源。楊樹膠與楊樹型蜂膠提取物在感官和理化指標上非常相似，而楊樹膠的價格卻只是蜂膠的1/3。在利益驅(qū)使下，蜂膠市場上以楊樹膠冒充蜂膠或在蜂膠中摻雜楊樹膠（楊樹芽提取物）的現(xiàn)象肆意橫行。目前，我國尚無嚴格鑒別蜂膠與楊樹膠的行業(yè)或產(chǎn)品標準，使得質(zhì)量監(jiān)管部門及蜂產(chǎn)品企業(yè)無法通過有效監(jiān)管及控制來確保蜂膠的生產(chǎn)與流通。因此，目前我國蜂膠業(yè)最急迫的任務(wù)就是高效、準確鑒別蜂膠質(zhì)量及真?zhèn)巍?/p>

1 方法原理

在采集并加工蜂膠時，蜂蜜中的腺體分泌物可能導致某些原始樹脂中的成分發(fā)生改變，致使蜂膠與植物源分泌的樹脂的成分有所不同[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，蜂膠中含有β-葡萄糖苷酶活力，且蜜蜂在采集蜂膠、蜂巢內(nèi)傳遞蜂膠時能夠水解酚苷[3]。酚苷的基本結(jié)構(gòu)單元是更高級的水楊酸鹽類衍生物的主要降解產(chǎn)物之一的水楊苷[4]。水楊苷穩(wěn)定存在于楊樹膠中，因此可作為蜂膠與楊樹膠的鑒別指標。此外，CCP作為特征性成分僅存在于楊樹膠中而蜂膠中不含有。因此，蜂膠中楊樹膠的確定可通過是否含有水楊苷或CCP來進行判定。

2 分析條件的優(yōu)化

2.1 優(yōu)化提取條件

通過正交實驗來優(yōu)化楊樹芽中水楊苷提取條件，優(yōu)化程度包括乙醇濃度、超聲提取時間、料液比、提取次數(shù)等4個因素。正交實驗下超聲提取2g楊樹芽，合并、蒸干濾液，與甲醇混合至50mL溶液，過0.45 μm濾膜，進行HPLC分析。

2.2 樣本制備

因蜂膠中內(nèi)含50%左右樹脂，也就是說，蜂膠中提取的樹脂部分就相當于楊樹膠。按照2.1的優(yōu)化條件，反復3次用75%乙醇超聲將2g楊樹芽、2g楊樹葉、2g蜂膠按照15∶1進行30min提取。揮去多余乙醇至溶液達50mL，過0.45 μm濾膜，進行HPLC分析。

2.3 色譜條件的可行性

2.3.1 考察線性范圍

以10mg水楊苷作對照，與甲醇混合成10mL溶液后，再用甲醇稀釋6個不同濃度的溶液作為對照，采取線性回歸，縱坐標為峰面積，橫坐標為對照品質(zhì)量濃度（mg/mL）。

2.3.2 檢測限（LOD）和定量限（LOQ）

連續(xù)稀釋制備好的水楊苷標準溶液至所需濃度后，進行HPLC分析，記錄峰面積，計算檢測限（LOD）和定量限（LOQ），確定LOD為1.3 μg/mL，LOQ為5.4 μg/mL。LOD、LOQ值都不高，說明本方法可定性、定量檢測水楊苷。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗

在0、3、6、9、12、24h時，對同一楊樹芽樣品溶液進樣后，測得水楊苷色譜峰的相對保留時間的RSD為0.97%，確定樣品24h相對穩(wěn)定。在1、2、3d內(nèi)，重復測定同一份楊樹芽樣品溶液，測得水楊苷色譜峰的相對保留時間的RSD為2.94%，說明樣品日間相對穩(wěn)定。

2.3.4 回收率試驗

選取9份楊樹芽樣品，精準測取容量，按高、中、低濃度水平3份為一組，加入水楊苷對照溶液，吹干，提取，測定，計算出回收率大于90%。

2.3.5 重復性試驗

以同一批楊樹芽為對象，選取其中5份，稱量后，通過優(yōu)化條件制備及測量樣品后，得出水楊苷的峰面積為 684.76±10.498，RSD=1.531；保 留 時 間（12.608±0.008）min，RSD=0.070%，說明本方法重復性好。

3 驗證結(jié)果

第一，不同樹種、不同組織部位的楊樹中的水楊苷含量存在差異；同一種楊樹芽中水楊苷含量顯著高于葉子中的含量。第二，楊樹膠樣本中均可檢測到水楊苷，但樣本件水楊苷含量差異較大。第三，不同地點、不同時間采集的蜂膠樣本中均未檢測到水楊苷。

4 結(jié)果判定

本檢測的水楊苷、CCP是楊樹膠中含有而蜂膠中不含有的物質(zhì)。所以，若待測樣品未測到水楊苷、CCP色譜峰，該樣品則不為楊樹膠樣品。按照我國情況，定性依據(jù)為水楊苷定量限，若待測樣品中水楊苷檢測濃度在0.25mg/g以下，則表明未檢出楊樹膠。若待測樣品中未檢測到水楊苷而檢測到CCP，經(jīng)質(zhì)譜法驗證后確定為CCP的則為楊樹膠樣品。