外周血EOS、總IgE、IL—10及誘導(dǎo)痰EOS在反復(fù)喘息嬰幼兒喘息評估中的臨床意義

馬前進(jìn) 武怡 陳韜

[摘要]目的 探討外周血嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）、總IgE、白細(xì)胞介素10（IL-10）及誘導(dǎo)痰EOS在反復(fù)喘息嬰幼兒喘息評估中的臨床意義。方法 隨機(jī)選取2016年2月～2017年12月邳州市人民醫(yī)院收治的40例反復(fù)喘息嬰幼兒作為研究對象，根據(jù)哮喘預(yù)測指數(shù)（API）將其分為API陽性組（n=20）和API陰性組（n=20）。同期隨機(jī)選取于邳州市人民醫(yī)院健康體檢的20例嬰幼兒作為對照組（n=20）。采用電化學(xué)發(fā)光法檢測血清總IgE水平，采用化學(xué)發(fā)光法檢測血清IL-10水平，采用HE染色法進(jìn)行外周血EOS計數(shù)，并檢測誘導(dǎo)痰EOS比例。結(jié)果 API陽性組患兒的外周血EOS計數(shù)、T-IgE水平及誘導(dǎo)痰EOS比例均高于API陰性組和對照組，血清IL-10水平均低于API陰性組和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。API陰性組患兒的血清IL-10水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。API陰性組患兒的外周血EOS計數(shù)、T-IgE水平及誘導(dǎo)痰EOS比例與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。血清IL-10與總IgE、誘導(dǎo)痰EOS成負(fù)相關(guān)（r=-0.394，P<0.05；r=-0.659，P<0.05）；總IgE與誘導(dǎo)痰EOS成正相關(guān)（r=0.492，P<0.05）；外周血EOS與IL-10成負(fù)相關(guān)，與總IgE、誘導(dǎo)痰EOS均成正相關(guān)（r=-0.668，P<0.05；r=0.445，P<0.05；r=0.521，P<0.05）。結(jié)論 API陽性反復(fù)喘息嬰幼兒的外周血EOS計數(shù)、T-IgE水平及誘導(dǎo)痰EOS比例升高以及IL-10水平降低，外周血EOS、T-IgE、誘導(dǎo)痰EOS以及IL-10的水平檢測與API存在關(guān)聯(lián)，在預(yù)測哮喘危險性中有較好的參考意義。

[關(guān)鍵詞]嬰幼兒；反復(fù)喘息；白細(xì)胞介素10；免疫球蛋白E；嗜酸性粒細(xì)胞；誘導(dǎo)痰；哮喘預(yù)測指數(shù)

[中圖分類號] R725.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）10（a）-0129-04

[Abstract] Objective To investigate the clinical significance of peripheral blood eosinophils （EOS）， total IgE， interleukin-10 （IL-10） and induced sputum EOS in wheezing assessment of recurrent wheezing infants. Methods A total of 40 cases of recurrent wheezing infants treated in people′s hospital in Pizhou city from February 2016 to December 2017 were randomly selected as objects and divided into API positive group （n=20） and API negative group （n=20） according to the asthma prediction index （API）. In the same period， altogether 20 healthy infants with the health checkup in people′s hospital in Pizhou city were randomly selected as control group （n=20）. Serum total IgE levels were measured by electrochemiluminescence method. Serum IL-10 levels were detected by chemiluminescence method. Peripheral blood EOS counts and the proportion of induced sputum EOS were detected by HE staining. Results The peripheral blood EOS counts， T-IgE levels and the proportion of induced sputum EOS in the API positive group were higher than those in the API negative group and the control group， the level of serum IL-10 was lower than that in the API negative group and the control group， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The level of serum IL-10 in the API negative group was higher than that in the control group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. There were no significant differences in the peripheral blood EOS counts， T-IgE levels and the proportion of induced sputum EOS between the API negative group and the control group （P>0.05）. Serum IL-10 was negatively correlated with total IgE and induced sputum EOS （r=-0.394， P<0.05； r=-0.659， P<0.05）. Total IgE was positively correlated with induced sputum EOS （r=0.492， P<0.05）. Peripheral blood EOS was negatively correlated with IL-10， and positively correlated with total IgE and induced sputum EOS （r=-0.668， P<0.05； r=0.445， P<0.05； r=0.521， P<0.05）. Conclusion The peripheral blood EOS counts， T-IgE levels and the proportion of induced sputum EOS increase， and IL-10 levels decreas in infants with API positive recurrent wheezing. There is a correlation between the peripheral blood EOS， T-IgE， induced sputum EOS and IL-10 levels and API， which has a good reference value in predicting the risk of asthma.

[Key words] Infants and young children； Recurrent wheezing； Interleukin 10； Immunoglobulin E； Eosinophils； Induced sputum； Asthma predictive index

反復(fù)喘息在嬰幼兒呼吸系統(tǒng)癥狀中比較常見，部分患兒日后有可能發(fā)展成支氣管哮喘，但喘息的次數(shù)并不是診斷哮喘的必要條件。有學(xué)者認(rèn)為，要想?yún)^(qū)分嬰幼兒第1次或僅有的1次喘息和之后多次喘息中的第1次幾乎是不可能的[1]。目前尚無確切的方法預(yù)測哪些反復(fù)喘息的患兒有可能會發(fā)展成哮喘。哮喘預(yù)測指數(shù)（API）能有效地預(yù)測3歲以內(nèi)反復(fù)喘息患兒發(fā)展成哮喘的危險性[2]，目前建議API陽性的嬰幼兒按哮喘規(guī)范治療[3]。有研究表明IL-10與哮喘發(fā)病密切相關(guān)，IgE和嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）在哮喘的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。本研究通過檢測反復(fù)喘息嬰幼兒的外周血EOS計數(shù)、總IgE、IL-10及誘導(dǎo)痰EOS比例與哮喘的關(guān)系，探討嬰幼兒反復(fù)喘息的發(fā)病機(jī)制，從而為早期診斷哮喘并進(jìn)行干預(yù)提供一定的理論依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

隨機(jī)選取2016年2月～2017年12月邳州市人民醫(yī)院收治的40例反復(fù)喘息嬰幼兒作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡6個月～3歲；②患兒臨床表現(xiàn)為咳嗽、喘息，肺部可聞及呼吸相哮鳴音；③患兒在過去12個月內(nèi)至少有3次喘息發(fā)作[4]。排除標(biāo)準(zhǔn)：氣道異物、胃食管反流、支氣管淋巴結(jié)核、先天性血管環(huán)畸形及先天性氣道疾病等引起的喘息者。API陽性指喘息嬰幼兒在過去1年內(nèi)喘息≥4次，具有1項主要危險因素或2項次要危險因素。主要危險因素包括：①父母有哮喘病史；②經(jīng)醫(yī)師診斷特應(yīng)性皮炎；③有吸入變應(yīng)原致敏的依據(jù)。次要危險因素包括：①有食物變應(yīng)原致敏的依據(jù)；②外周血EOS≥4%；③排除上呼吸道感染引起的喘息[5]。根據(jù)API將其分為API陽性組（n=20）和API陰性組（n=20）。其中，男22例，女18例；年齡6個月～3歲，平均（1.8±0.6）歲。同期隨機(jī)選取于邳州市人民醫(yī)院健康體檢的20例嬰幼兒作為對照組（n=20）。三組嬰幼兒均為足月兒，三組的一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)，所有嬰幼兒家屬均知曉本研究情況并簽署知情同意書。

1.2方法

三組患兒均于早晨空腹抽取靜脈血約5 ml，37℃水浴，半小時后，以3000 r/min的轉(zhuǎn)速離心15 min，分離血清，置于-70℃冰箱里保存。采用電化學(xué)發(fā)光法檢測血清總IgE水平，試劑為羅氏原裝試劑，儀器為羅氏E602，正常參考值為0～15 KIU/L。采用化學(xué)發(fā)光法檢測血清IL-10水平，試劑為西門子原裝試劑，按照試劑盒說明書執(zhí)行操作。采集患兒的無名指末端血，采用HE染色法進(jìn)行外周血EOS計數(shù)，并檢測誘導(dǎo)痰EOS比例。痰液誘導(dǎo)按照歐洲呼吸協(xié)會誘導(dǎo)痰液指導(dǎo)小組的指南并加以改進(jìn)[6]?；純合冗M(jìn)行清潔口鼻，然后再吸入200 μg的沙丁胺醇，氧驅(qū)動霧化，流量約4 L/min，吸入3%高滲鹽水，誘導(dǎo)20～30 min，由護(hù)士嚴(yán)格按正規(guī)操作規(guī)范吸痰，醫(yī)師在場，嚴(yán)密觀察患兒的面色、口唇、呼吸頻率等情況，并收集痰液于無菌、干凈的帶刻度容器中。如果吸入30 min后還沒有痰液導(dǎo)出則停止操作。收集的痰液均在1 h內(nèi)處理，在處理前先置入4℃冰箱中保存。痰液處理：①先挑取含有黏液的痰栓，合格痰液是在顯微鏡下觀察到鱗狀上皮細(xì)胞數(shù)少于5%并見到肺巨噬細(xì)胞；②痰液先稱重，加入大約4倍痰量的0.1%二硫蘇糖醇，并在旋渦式混合器上進(jìn)行混勻；③在37℃恒溫水育箱里孵育15 min；④加入大約4倍痰量的磷酸鹽緩沖液后繼續(xù)水浴5 min；⑤將稀化的痰液先經(jīng)過48 μm尼龍膜進(jìn)行過濾，然后離心機(jī)以2000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，并收集上清液放入-70℃冰箱中冷凍保存；細(xì)胞成分重懸于磷酸鹽緩沖液中，涂片2張，并進(jìn)行編號。痰液染色：將涂片先自然干燥，然后放入二甲苯內(nèi)2 min，再移到裝有無水酒精的器皿內(nèi)2 min，取出排液后放入90%酒精1 min，再移到蘇木素染液內(nèi)靜置半小時，然后放入沖洗盆內(nèi)沖洗10 min，使粉紅色變成藍(lán)色。在鹽酸酒精內(nèi)浸漬涂片，并搖動數(shù)秒，再次沖洗使涂片變成藍(lán)色。隨后將涂片移至0.1%伊紅液內(nèi)2 min，對比染色，再次沖洗涂片3 min，分化伊紅。取出排液，并移至90%酒精內(nèi)搖振15 s，再移到無水酒精Ⅰ內(nèi)搖振15 s，再移到無水酒精Ⅱ內(nèi)搖振30 s。再將涂片移至二甲苯Ⅰ內(nèi)15 s，再移至二甲苯Ⅱ內(nèi)15 s，取出后封固。最后痰液分類計數(shù)由檢驗科醫(yī)師在高倍顯微鏡下觀察約400個有核細(xì)胞，其中包括淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，然后計算出EOS比例（%）。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，方差不齊時兩組間比較采用Dunnett-t檢驗，各個指標(biāo)之間的相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三組患兒外周血EOS、IL-10、T-IgE及誘導(dǎo)痰EOS的比較

API陽性組患兒的外周血EOS計數(shù)、T-IgE水平及誘導(dǎo)痰EOS比例均高于API陰性組和對照組，血清IL-10水平均低于API陰性組和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。API陰性組患兒的血清IL-10水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。API陰性組患兒的外周血EOS計數(shù)、T-IgE水平及誘導(dǎo)痰EOS比例與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.2相關(guān)性分析

血清IL-10與總IgE、誘導(dǎo)痰EOS成負(fù)相關(guān)（r=-0.394，P<0.05；r=-0.659，P<0.05）；總IgE與誘導(dǎo)痰EOS成正相關(guān)（r=0.492，P<0.05）；外周血EOS與IL-10成負(fù)相關(guān)（r=-0.668，P<0.05），與總IgE、誘導(dǎo)痰EOS均成正相關(guān)（r=0.445，P<0.05；r=0.521，P<0.05）。

3討論

支氣管哮喘是兒童期最常見的慢性疾病，我國流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)80%以上的哮喘起始于3歲前。因此從反復(fù)喘息的嬰幼兒中把可能發(fā)展為持續(xù)性哮喘的患兒識別出來并進(jìn)行有效的早期干預(yù)非常必要[7]。但目前為止尚無特異的檢測指標(biāo)和方法用于診斷嬰幼兒哮喘。美國學(xué)者根據(jù)圖森的研究表明，3歲內(nèi)API陽性的喘息患兒，到6～13歲時仍有喘息的陽性預(yù)測值可高達(dá)77%。目前我國尚缺乏嬰幼兒的相關(guān)資料，因此，有必要盡快在我國開展兒童喘息性疾病相關(guān)的前瞻性隊列研究，并建立更適合于中國兒童的API，以指導(dǎo)臨床實踐[8]。

IL-10是近年發(fā)現(xiàn)的一種同型二聚體細(xì)胞因子，并有著廣泛的免疫學(xué)效應(yīng)，可由T淋巴細(xì)胞（Th0、Th1、Th2、CD4+、CD8+）、B細(xì)胞、肥大細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等產(chǎn)生，屬長鏈細(xì)胞因子家族[9]。有研究表明，IL-10能夠抑制EOS的浸潤及Th2細(xì)胞因子的產(chǎn)生從而抑制哮喘的發(fā)作，或在哮喘發(fā)病中起免疫抑制作用[10]。國內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)，哮喘發(fā)作期IL-10可為高或低表達(dá)[11]。當(dāng)病原微生物襲擊機(jī)體時，一方面產(chǎn)生IL-6、TNF-α等炎性因子來清除病原體，從而促進(jìn)組織的修復(fù)；另一方面機(jī)體又通過釋放IL-10等抑炎因子來下調(diào)或平衡炎性反應(yīng)[12]。近年來提出的調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子IL-10在支氣管哮喘的發(fā)病中起重要作用[13]。本研究結(jié)果提示，API陽性組患兒的血清IL-10水平均低于API陰性組和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），與哮喘發(fā)作期一致，進(jìn)一步證實了反復(fù)喘息與血清IL-10密切相關(guān)?？梢酝茢郔L-10的缺乏可能是導(dǎo)致喘息發(fā)作的重要因素之一。

EOS是引起氣道高反應(yīng)和氣道炎癥的主要細(xì)胞，在哮喘發(fā)病中發(fā)揮著重要的作用[14]，EOS能夠釋放多種毒性蛋白和炎性介質(zhì)，從而在嬰幼兒喘息的形成和發(fā)展中起重要作用。本研究將3歲以下喘息患兒分為API陽性組與API陰性組，研究結(jié)果提示，API陽性組患兒的外周血EOS計數(shù)均明顯高于API陰性組和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），提示API陽性組在免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制上，與哮喘相似或相同，有可能就是哮喘的早期表現(xiàn)。而API陰性組患兒的外周血EOS計數(shù)與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），推測API陰性組可能與病毒感染相關(guān)。由于EOS在某些血液疾病或傳染性疾病中也會異常升高，而且還存在晝夜變化，因此僅靠EOS計數(shù)升高不能診斷哮喘[15]。另外本研究結(jié)果提示，API陽性組的外周血EOS計數(shù)與IL-10成負(fù)相關(guān)，提示兩者可能存在一定關(guān)系，但具體通過什么途徑互相影響尚需要探討。

IgE在呼吸道變應(yīng)性炎癥的觸發(fā)因素中，起著關(guān)鍵作用。有研究表明，哮喘是在IgE介導(dǎo)下的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，IgE水平的升高和哮喘的嚴(yán)重程度有著密切關(guān)系[16]。在氣道炎癥的病理變化中，IgE起到了介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)的作用[17]。本研究結(jié)果提示，API陽性組患兒的血清IgE水平均高于API陰性組和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），與哮喘在免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制上很相似。另外病毒感染也是引起患兒反復(fù)喘息的常見原因之一，目前尚不清楚是病毒感染后氣道功能受到損傷導(dǎo)致哮喘易感，還是免疫反應(yīng)和氣道發(fā)育等特點(diǎn)使嬰幼兒易發(fā)生反復(fù)喘息和哮喘[18-19]。本研究結(jié)果提示，API陰性組患兒的T-IgE水平與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），推測其喘息發(fā)作可能與呼吸道病毒感染有關(guān)。

誘導(dǎo)痰檢測是近年來研究呼吸道疾病的無創(chuàng)診斷手段之一，其能夠較好地反映支氣管、氣管的病理改變，可以和支氣管鏡檢查相媲美。本研究檢查了API陽性組患兒、API陰性組患兒及健康嬰幼兒的誘導(dǎo)痰EOS分類，結(jié)果提示，API陽性組患兒誘導(dǎo)痰EOS比例均高于API陰性組和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），與哮喘是以慢性氣道炎癥為主要特征的常見病、多發(fā)病，有多種細(xì)胞參與其炎癥過程，而其中EOS被認(rèn)為是導(dǎo)致支氣管黏膜損傷和功能障礙的重要炎癥細(xì)胞[20-23]相符。另外本研究結(jié)果提示，總IgE與誘導(dǎo)痰EOS成正相關(guān)，從而間接提示個體特異質(zhì)與喘息發(fā)病的相互關(guān)系。

綜上所述，API陽性喘息的嬰幼兒的總IgE、誘導(dǎo)痰EOS比例及外周血EOS計數(shù)均高于API陰性組和對照組，血清IL-10水平低于API陰性組和對照組，外周血EOS與總IgE成正相關(guān)，故其發(fā)病機(jī)制和支氣管哮喘相似，傾向機(jī)體過敏因素，從而對于該部分患兒，應(yīng)該按照哮喘進(jìn)行干預(yù)治療。

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（收稿日期：2018-07-18 本文編輯：任秀蘭）