HPLC法考察馬蹄甲中阿維菌素的殘留

劉麗+李正剛

【中圖分類(lèi)號(hào)】R657 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-6851（2017）12--02

馬蹄甲（Equus caballus orientalis Noack）為馬科動(dòng)物馬Equus caballus（L.）的蹄甲入藥，屬于奇蹄目馬科馬屬。其來(lái)源馬在夏天多雨的季節(jié)，都會(huì)感染皮膚病。螨蟲(chóng)病時(shí)有發(fā)生，，發(fā)病馬匹多在眼瞼周?chē)?、額部、鼻部、嘴唇、頸下部、肘部和四肢遠(yuǎn)端出現(xiàn)脫毛、禿斑，治療通常采取肌肉注射或者口服阿維菌素，驅(qū)除體內(nèi)、外寄生蟲(chóng)，療效好，給藥方便。

近年來(lái)，隨著人們對(duì)動(dòng)物源產(chǎn)品由需求型向質(zhì)量型的轉(zhuǎn)變，動(dòng)物藥中的獸藥殘留已逐漸成為全世界關(guān)注的一個(gè)焦點(diǎn)。食品添加劑和污染物聯(lián)合專(zhuān)家委員會(huì)從20世紀(jì)60年代起開(kāi)始評(píng)價(jià)有關(guān)獸藥殘留的毒性，為人們認(rèn)識(shí)獸藥殘留的危害及其控制提供了科學(xué)依據(jù)。因此，本文對(duì)動(dòng)物藥馬蹄甲來(lái)源馬常用藥阿維菌素進(jìn)行藥物殘留檢測(cè)，為馬蹄甲的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)使用提供安全保障。

1 試劑和材料

1.1 試劑 ：丙酮（C3H6O）：色譜純；甲醇（CH4O）：色譜純。

1.4 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品：CA10001000，Lot：114223，含量96.4%，來(lái)源：Dr.Ehrenstorfer GmbH。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

1.3.1 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱(chēng)取0.1 g（準(zhǔn)確至0.0002 g） 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度配制成濃度為1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

1.3.2 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)工作液：根據(jù)需要移取適量的阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)工作液需每周配制一次。

2 儀器和設(shè)備

高效液相色譜儀型號(hào)：Agilent1260，配有二極管陣列檢測(cè)器； BP211D型分析天平；組織搗碎機(jī)；HY-2型調(diào)速多用振蕩器；EV311型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器； 固相萃取柱：SPE C18。

3 高效液相色譜參考條件

色譜柱：WondaCract ODS- 2.5μm，4.6×250mm，C/N 8520-3993；流動(dòng)相：甲醇：水=（90+10，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：245 nm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：20 μL。

4 分析步驟

4.1 提取

稱(chēng)取試樣約20 g（精確至0.1 g）于100 mL具塞錐形瓶中，加入50 mL丙酮，于振蕩器上振蕩0.5 h用布氏漏斗抽濾，用20 mL×2丙酮洗滌錐形瓶及殘?jiān)?。合并丙酮提取液，?0 ℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約2 mL。

4.2 凈化。將上述的濃縮提取液完全轉(zhuǎn)入SPE C18柱，再用5 mL水淋洗，去掉淋洗液。最后用5 mL甲醇洗脫，收集洗脫液，用氮?dú)獯抵两?。?zhǔn)確加入1.0 mL甲醇溶解殘?jiān)?，?.45 μm濾膜過(guò)濾，濾液供液相色譜測(cè)定。外標(biāo)法定量。

5 系統(tǒng)適應(yīng)性考察

5.1 空白試驗(yàn)。取空白試料采用完全相同的測(cè)定步驟進(jìn)行平行操作，無(wú)干擾峰出現(xiàn)。見(jiàn)圖1。

5.2 線性：準(zhǔn)確量取適量阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用水配制成阿維菌素濃度為0.2μg/mL，0.4μg/mL，1.0μg/mL，5μg/mL，10μg/mL，20μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液，依次進(jìn)行測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)回歸計(jì)算，得到回歸方程：Y=3.40X+0.148，r=0.999，結(jié)果表明線性關(guān)系良好。見(jiàn)圖2。

5.3 精密度試驗(yàn)。稱(chēng)取試樣6份，每份20.0g ，分別加入9.734μg/mL的阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液100μl，按照4.1、4.2操作進(jìn)行提取和凈化，對(duì)照品采用線性對(duì)照品（濃度：0.973g/mL），按液相色譜法測(cè)定，RSD為1.0%，結(jié)果表明精密度良好。

5.4 回收率試驗(yàn)

稱(chēng)取試樣9份，每份20.0g，每三份分別加入阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（0.195μg/mL、0.973μg/mL、9.734μg/mL）各1.0ml，按樣品同法制備，對(duì)照品采用線性對(duì)照品（濃度：0.973g/mL），按液相色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，平均回收率分別為90.5%，91.4%，96.1%。

5.5 樣品測(cè)定

取樣品3批，按4.1、4.2操作進(jìn)行提取和凈化，按液相色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量，3批樣品阿維菌素均未檢出。見(jiàn)圖3。

5 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了馬蹄甲中阿維菌素藥物殘留的高效液相色譜法，其前處理簡(jiǎn)單，靈敏度高，準(zhǔn)確度高，精密度和各項(xiàng)技術(shù)符合殘留檢測(cè)的相關(guān)要求，可用于馬蹄甲中阿維菌素藥物殘留的檢測(cè)。

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