檢測(cè)PD—L1和PD—1在胃癌組織中的表達(dá)情況及與患者臨床病理和預(yù)后生存的關(guān)系

劉宇晴+曹艷

【摘要】目的：分析胃癌組織中PD-L1和PD-1的表達(dá)情況，并探討其與患者臨床病理、預(yù)后生存之間的關(guān)系。方法：選取我院2011年6月到2012年6月間收治的胃癌患者100例作為研究對(duì)象，通過(guò)免疫組化法對(duì)術(shù)區(qū)病理組織標(biāo)本、癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行染色分析，計(jì)算PD-L1、PD-1的表達(dá)陽(yáng)性率，并分析PD-L1、PD-1陽(yáng)性結(jié)果與患者的病理特征、5年生存率之間的關(guān)系。結(jié)果：觀察組和對(duì)照組標(biāo)本中的PD-L1陽(yáng)性率，PD-1陽(yáng)性率，二者的表達(dá)結(jié)果之間無(wú)相關(guān)性。隨著pTNM分期的升高，累及范圍的增大，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生，PD-L1的陽(yáng)性率不斷升高，且不同亞組的比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.05；但PD-1的陽(yáng)性率在各亞組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。PD-L1、PD-1陽(yáng)性患者的生存率均顯著低于陰性患者，比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：通過(guò)胃癌組織中PD-L1、PD-1表達(dá)情況的分析，可以對(duì)患者的臨床病理特征、預(yù)后情況進(jìn)行預(yù)測(cè)。

【關(guān)鍵詞】PD-L1；PD-1；胃癌組織；病理；預(yù)后生存

【中圖分類(lèi)號(hào)】R735 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2095-6851（2017）12-00-01

本文就我院2011年6月到2012年6月間收治的胃癌患者100例作為研究對(duì)象，分析胃癌組織中PD-L1和PD-1的表達(dá)情況，并探討其與患者臨床病理、預(yù)后生存之間的關(guān)系。具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2011年6月到2012年6月間收治的胃癌患者100例作為研究對(duì)象，患者均接受胃癌根治手術(shù)治療，術(shù)前未放化療治療史，且不合并遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的情況?；颊咴谛g(shù)后經(jīng)病理檢查確診。所有臨床病歷資料完整有效。

患者中，男57例，女43例；患者的年齡在23到72歲之間，平均年齡為（52.1±4.2）歲。按照AJCC胃癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)對(duì)患者進(jìn)行分型，則Ⅰ-Ⅱ期的患者59例、Ⅲ-Ⅳ期的患者41例；患者的浸潤(rùn)情況分布為：累及黏膜及黏膜下層的患者22例，累及肌層的患者25例，累及漿膜層的患者43例；其中，合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者45例。

1.2 方法

將患者的手術(shù)區(qū)病理組織標(biāo)本作為觀察組，與腫瘤組織距離超過(guò)5cm的癌旁組織標(biāo)本作為對(duì)照組，采用免疫組織化學(xué)二步法分別對(duì)兩組的標(biāo)本進(jìn)行處理，先對(duì)標(biāo)本石蠟塊進(jìn)行連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟和水化處理后，室溫條件下以3%的過(guò)氧化氫溶液作用十分鐘并使用PBS 緩沖液沖洗三遍，再于檸檬酸鹽緩沖液中微波加熱20min，實(shí)現(xiàn)抗原修復(fù)，加熱接受后自然冷卻，以PBS 緩沖液沖洗三遍后滴加兔抗人PD-L1 以及鼠抗人PD-1 多克隆抗體，以1：200的比例稀釋?zhuān)⒃?℃的條件下孵育過(guò)夜，PBS 緩沖液沖洗三遍后，在切片中滴加北京中杉金橋生物科技有限公司生產(chǎn)的PV-6000 二抗，室溫下孵育二十分鐘后再以PBS 緩沖液沖洗三遍，最后通過(guò)DAB顯色劑進(jìn)行顯色處理，室溫下避光顯色。通過(guò)光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察，控制顯色時(shí)間在3-5min，結(jié)束后蒸餾水沖洗終止顯色。以蘇木精復(fù)染、自來(lái)水沖洗返藍(lán)、梯度酒精脫水、二甲苯透明后，以中性樹(shù)膠封片，在鏡下進(jìn)行觀察。

1.3 觀察指標(biāo)

由兩名高年資、經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師對(duì)免疫組化切片結(jié)果進(jìn)行雙盲評(píng)價(jià)。當(dāng)標(biāo)本的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜上觀察到黃至棕褐色顆粒時(shí)的情況記為陽(yáng)性顯色。然后結(jié)合陽(yáng)性細(xì)胞百分比及其染色強(qiáng)度對(duì)病例陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行判斷。當(dāng)PD-L1、PD-1陽(yáng)性細(xì)胞顯示淡黃色的情況計(jì)1分，顯示棕黃色的情況計(jì)2分，顯示棕褐色的情況計(jì)3分。隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野，按視野中陽(yáng)性細(xì)胞的平均百分比進(jìn)行分級(jí)，10%以下計(jì)1分，10%-50%之間計(jì)2分，50%以上計(jì)3分。染色強(qiáng)度得分與陽(yáng)性細(xì)胞百分比得分的乘積超過(guò)3分的情況記為陽(yáng)性，3分以下的情況記為陰性[1]。

比較觀察組和對(duì)照組標(biāo)本中PD-L1、PD-1的陽(yáng)性率。分析PD-L1、PD-1表達(dá)結(jié)果與患者病理特征（pTNM 分期、浸潤(rùn)情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等）、預(yù)后生存（5年生存率）之間的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用卡方檢驗(yàn)對(duì)計(jì)數(shù)資料進(jìn)行分析，當(dāng)結(jié)果顯示P<0.05時(shí)認(rèn)為結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

觀察組標(biāo)本中的PD-L1陽(yáng)性率為61.0%（61/100），PD-1陽(yáng)性率為34.0%（34/100），PD-L1陽(yáng)性率明顯更高。對(duì)照組標(biāo)本中的PD-L1、PD-1陽(yáng)性率均為0，且二者的表達(dá)結(jié)果之間無(wú)相關(guān)性。

在pTNM分期為Ⅰ-Ⅱ期、Ⅲ-Ⅳ期的患者中，PD-L1表達(dá)陽(yáng)性率分別為52.5%（31/59）、73.2%（30/41），PD-1表達(dá)陽(yáng)性率分別為35.6%（21/59）、31.7%（13/41）；在累及黏膜及黏膜下層、累及漿膜層、累及肌層的患者中，PD-L1表達(dá)陽(yáng)性率分別為36.4%（8/22）、68.0%（17/25）、83.7%（36/43），PD-1表達(dá)陽(yáng)性率分別為36.4%（8/22）、40.0%（10/25）、37.2%（16/43）；在合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及不合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，PD-L1表達(dá)陽(yáng)性率分別為68.9%（31/45）、54.5%（30/55），PD-1表達(dá)陽(yáng)性率分別為35.6%（16/45）、32.7%（18/55）。隨著pTNM分期的升高，累及范圍的增大，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生，PD-L1的陽(yáng)性率不斷升高，且不同亞組的比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.05；但PD-1的陽(yáng)性率在各亞組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。見(jiàn)表1和表2、表3.

100例患者的5年生存率為83.0%，其中PD-L1陽(yáng)性患者的生存率（73.8%（45/61））顯著低于陰性患者生存率（97.4%（38/39）），PD-1陽(yáng)性患者的生存率（55.9%（19/34））顯著低于陰性患者生存率（97.0%（64/66）），比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），PD-L1、PD-1的表達(dá)與患者的生存率呈負(fù)相關(guān)。見(jiàn)endprint

3 討論

胃癌是十分常見(jiàn)的一種消化內(nèi)科惡性腫瘤?，F(xiàn)代人生化壓力大、飲食不規(guī)律，加上環(huán)境污染等問(wèn)題的愈發(fā)嚴(yán)重，胃癌的發(fā)生率呈現(xiàn)出不斷上升的趨勢(shì)[2]。盡管在現(xiàn)代外科醫(yī)療技術(shù)及放化療等輔助治療手段不斷發(fā)展的情況下，胃癌的治療效果得到極大的提升，但對(duì)于部分晚期、發(fā)生大面積轉(zhuǎn)移的患者而言，其治療效果并不十分理想，調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，其五年生存率尚不及25%。因而，對(duì)胃癌患者的臨床病理特征及預(yù)后生存的相關(guān)分析預(yù)測(cè)指標(biāo)進(jìn)行研究十分必要。程序性死亡因子-1（PD- 1）和程序性死亡1- 配體（PD-L1）可以參與腫瘤抗原特異性細(xì)胞逃逸、細(xì)胞凋亡反應(yīng)的過(guò)程，二者結(jié)合之后協(xié)同調(diào)節(jié)系統(tǒng)幫助腫瘤細(xì)胞逃避免疫殺傷[3-4]。

本文對(duì)PD-L1、PD-1在術(shù)區(qū)腫瘤組織、癌旁組織中的表達(dá)結(jié)果進(jìn)行了比較，可見(jiàn)其在癌旁組織中的表達(dá)陽(yáng)性率均為0，而在術(shù)區(qū)腫瘤組織中，PD-L1表達(dá)率為61.0%，且隨pTNM分期的升高，累及范圍的增大，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生呈現(xiàn)出不斷升高的趨勢(shì)，PD-L1陽(yáng)性的情況下，生存率相對(duì)更低。其作為一種含蛋白磷酸化活化位點(diǎn)、疏水結(jié)構(gòu)的氨基酸跨膜蛋白，在多種惡性腫瘤中都有過(guò)表達(dá)情況[4]，通過(guò)對(duì)其表達(dá)水平的測(cè)定，可以預(yù)測(cè)評(píng)價(jià)胃癌患者的病理變化及預(yù)后生存情況。而PD-1在胃癌組織中的陽(yáng)性率為34.0%，相對(duì)PD-L1略低，其與患者的臨床陽(yáng)性特征之間無(wú)明顯關(guān)系，但與患者的生存率呈負(fù)相關(guān)，作為一種負(fù)性共刺激信號(hào)分子，在腫瘤組織、淋巴細(xì)胞中多見(jiàn)，其可對(duì)患者的預(yù)后情況進(jìn)行預(yù)測(cè)[5-6]

綜上所述，通過(guò)胃癌組織中PD-L1、PD-1表達(dá)情況的分析，可以對(duì)患者的臨床病理特征、預(yù)后情況進(jìn)行預(yù)測(cè)。

參考文獻(xiàn)

吳圣，邵婧怡，王芳，等.PD-L1和PD-1在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，50（6）：821-823.

劉欣，陳龍.PD-L1和PD-1在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].今日健康，2016，15（2）：3-5.

Zhou，Z.-G.，Liu，F(xiàn).，Jiao，L.-C. et al.Object information based interactive segmentation for fatty tissue extraction[J].Computers in Biology and Medicine，2013，43（10）：1462-1470.

李明彪，徐嵩，范海洋，等.PD-1和PD-L1 在肺類(lèi)癌中的表達(dá)情況和其臨床意義[J].中國(guó)肺癌雜志，2016，19（12）：847-849.

呂學(xué)文，徐瓊，陳煥偉，等.PD-1、PD-L1 蛋白在外周T 細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系[J].腫瘤藥學(xué)，2016，6（1）：44-46.

Hui XL，Han Y，Liang SH et al.Specific targeting of the vasculature of gastric cancer by a new tumor-homingPeptide CGNSNPKSC[J].Journal of Controlled Release： Official Journal of the Controlled Release Society，2008，131（2）：86-93.endprint