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    注射用重組人干擾素αb溶解后活性穩(wěn)定性的分析

    2018-01-15 22:57:38馬鴻杰劉傳靈黃秋茹毛新
    中國實用醫(yī)藥 2017年35期
    關鍵詞:穩(wěn)定性

    馬鴻杰 劉傳靈 黃秋茹 毛新

    【摘要】 目的 研究分析注射用重組人干擾素α1 b(賽若金)溶解后生物學活性的穩(wěn)定性。方法 按

    照《中國藥典》2015年版干擾素活性檢測第一法, 采用細胞病變抑制法(CPE)檢測溶解后的賽若金分別在4℃及25℃條件下放置不同時段的生物活性, 與標準品比較, 評估其溶解后的穩(wěn)定性。結果 4批次不同規(guī)格的賽若金經4℃存放12、24、36、48 h后生物學活性相當于0 h活性的93.93%~100.31%, 生物活性無明顯的下降, 相對穩(wěn)定。4批次不同規(guī)格的賽若金經25℃存放12、24、36、48 h后生物學活性相當于0 h活性的81.90%~100.46%, 生物活性有所波動, 依舊在合格范圍內。結論 賽若金溶解后性質穩(wěn)定, 使用本品除了現(xiàn)配現(xiàn)用, 還可以提前溶解配制, 適當條件下保存使用。

    【關鍵詞】 注射用重組人干擾素;生物學活性;細胞病變抑制法;穩(wěn)定性

    DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.35.113

    【Abstract】 Objective To study and analyze the activity stability of recombinant human interferon α1b for injection(Sinogen) after dissolution. Methods According to the first edition of Chinese Pharmacopoeia (2015 Edition) Interferon Activity Test, cytopathogenic effect (CPE) was used to detect the biological activity of Sinogen in different periods after being dissolved at 4 ℃ and 25 ℃ respectively, and they were compared with the standard, so as to assess its stability after dissolution. Results 4 batches of different specifications of Sinogen at 4 ℃ for 12, 24, 36, 48 h had biological activity equivalent to 93.93% ~ 100.31% at 0 h, no significant decrease in biological activity, and it is relatively stable. 4 batches of different specifications of Sinogen at 25 ℃ for 12, 24, 36, 48 h had biological activity equivalent to 81.90%~100.46% at 0 h, the biological activity fluctuates, but still in the qualified range. Conclusion After dissolution, Sinogen has stable properties, in addition to current use of this product, it can also be dissolved in advance, and stored under proper conditions.

    【Key words】 Recombinant human interferon; Biological activity; Cytopathogenic effect; Stability

    干擾素具有廣譜的抗病毒、抗腫瘤及免疫調節(jié)等多種生物學活性, 賽若金是中國第一個采用中國人基因克隆和表達的干擾素[1-3]。α1b型基因工程干擾素廣泛應用于治療病毒性感染的疾病以及腫瘤的生物治療, 該藥已被廣大的醫(yī)患人員所熟知[4, 5]。賽若金是深圳正中醫(yī)藥集團深圳科興生物工程有限公司主要產品, 現(xiàn)有6種規(guī)格, 目前是全國規(guī)格最齊全的干擾素產品。本文就其溶解后在4℃ 和25℃存放不同時間后的活性加以檢測并對其穩(wěn)定性分析討論, 為醫(yī)護人臨床使用提供實驗依據(jù)?,F(xiàn)報告如下。

    1 材料與方法

    1. 1 材料 干擾素:賽若金, 批號及規(guī)格(μg/支, 10 μg相當于10萬 IU):201703010(10 μg)、201703005(20 μg)、201703007(30 μg)、

    201703006(40 μg), 抽取量:8支/批(采用4批次不同規(guī)格的賽若金, 深圳科興生物工程有限公司)。

    標準參考品:IFNα1b生物學活性測定標準品(購自中國食品藥品檢定研究院), 批號為97/01。病毒株和細胞株:水泡性口炎病毒(VSV)(由中國食品藥品檢定研究院提供)。細胞:人羊膜細胞(WISH)(購自上海細胞研究所)。血清:胎牛血清(購自IMMUNO PROBE)。培養(yǎng)基:RPMI Medium l640培養(yǎng)基(購自GIBCO)。染色液:自配。細胞消化液:自配。脫色液:自配。穩(wěn)定性試驗設備:2~8℃冰箱 ,(25±1)℃、CO2恒溫培養(yǎng)箱, 酶標儀[6]。

    1. 2 方法 本方法按照《中華人民共和國藥典》(2015版)三部3523干擾素生物活性測定法第一法:細胞病變抑制法測定(CPE)。

    1. 2. 1 供試品溶液的制備 將批號為201703010(10 μg)、201703005(20 μg)、201703007(30 μg)、201703006(40 μg)4批樣品(8支/批)的供試品按照標示量用無菌注射用水溶解, 用測定培養(yǎng)液稀釋成105 IU/ml。在96孔細胞培養(yǎng)板中, 每個稀釋度做2孔。在無菌條件下操作[7]。endprint

    將批號為201703010(10 μg)、201703005(20 μg)、201703007

    (30 μg)、201703006(40 μg)4批樣品(8支/批)無菌注射用水溶解, 混勻后分裝至小離心管, 分別在4℃ 條件下存放0、12、24、36、48 h;25℃條件下存放0、12、24、36、48 h。各取以上不同條件存放樣品一支, 用同樣的方法測定其生物活性。

    1. 2. 2 生物活性檢測 根據(jù)干擾素可以保護人羊膜細胞免受水泡性口炎病毒破壞的作用, 賽若金采用CPE法分別測定, 用結晶紫對活細胞WISH細胞染色, 脫色后在波長570 mm處測定其吸光度, 得到干擾素對WISH細胞的保護曲線[8, 9]。然后根據(jù)待測樣品不同稀釋度的保護能力, 計算干擾素活性。

    主要步驟為:培養(yǎng)細胞-細胞傳代-鋪板(96孔細胞培養(yǎng)板)-加樣-攻擊病毒-染色-脫色-比色-結果計算[10]。

    2 結果

    4批次不同規(guī)格的賽若金經4℃存放12、24、36、48 h后生物學活性相當于0 h活性的93.93%~100.31%, 生物活性無明顯的下降, 相對穩(wěn)定。見表1。

    4批次不同規(guī)格的賽若金經25℃存放12、24、36、48 h后生物學活性相當于0 h活性的81.90%~100.46%, 生物活性有所波動, 依舊在合格范圍內。見表2。

    3 小結

    將結果與溶解0 h(4℃和25℃)的比較, 對結果進行分析。4批次不同規(guī)格的樣品經4℃存放12、24、36、48 h后生物學活性相當于0 h活性的93.93%~100.31%, 生物活性無明顯的下降, 相對穩(wěn)定。4批次不同規(guī)格的樣品經25℃存放12、24、36、48 h后生物學活性相當于0 h活性的81.90%~100.46%, 生物活性有所波動, 依舊在合格范圍內。

    綜上所述, 4批次不同規(guī)格的樣品溶解后, 在同一存放條件下活性穩(wěn)定性基本相同。故初步認為賽若金按照說明書用注射用水溶解后, 在4℃或者25℃保存≤48 h可放心使用。

    參考文獻

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    [8] 倪曉燕, 王榮海, 宋禮華, 等. 重組人干擾素α2b注射液穩(wěn)定性研究. 安徽醫(yī)藥, 2014, 18(3):433-436.

    [9] 陳維金. 重組人干擾素α2b噴霧劑組方、穩(wěn)定性和安全性的研究. 吉林大學, 2006.

    [10] 于建春, 谷峰, 孫彥. 重組人干擾素α-2b水針、粉針的穩(wěn)定性及與干擾素標準品的比較研究. 天津師范大學學報(自然版), 2003, 23(1):43-45.

    [收稿日期:2017-08-30]endprint

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