影響PRF臨床療效的相關(guān)因素

辛酉鳳，趙 金*

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010000；2.內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院，內(nèi)蒙古 包頭 014000）

1 PRF的基本制備方法

選擇健康人群對其進(jìn)行血液的采集，其中參加研究的女性均不在月經(jīng)期，采集血液的量為10 ml，將抽取的靜脈血放置在試管內(nèi)，且保證試管內(nèi)不含抗凝劑，立即以一定轉(zhuǎn)速離心。經(jīng)過；離心處理后液體分為三層，其中最上層為不含細(xì)胞的血漿，最底層為紅細(xì)胞層，中間層即為PRF。大約97%的血小板和＞50%的白細(xì)胞以一種特定的三維分布在PRF的纖維蛋白結(jié)構(gòu)中[1]。血小板中含有30多種生長因子，如血小板衍生生長因子（platelet-derived growth factor，PDGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）等[2]。這些生長因子還有其內(nèi)的白細(xì)胞釋放白細(xì)胞介素（IL-1、IL-4）、腫瘤壞死生長因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）和血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）等，各因子之間發(fā)揮著協(xié)同作用，并對組織細(xì)胞有著調(diào)控作用，主要表現(xiàn)為對其增殖分化有影響，對炎癥因子有介導(dǎo)作用，能夠幫助創(chuàng)口快速愈合。盡管血小板生長因子在PRF中發(fā)揮重要作用，白細(xì)胞含量和纖維蛋白結(jié)構(gòu)也是兩個關(guān)鍵參數(shù)[1]。

2 影響PRF臨床療效的相關(guān)因素

2.1 主要因素：相對離心力和離心時間

在制備PRF的時候最為重要的是選擇好離心處理的方法，離心方法受到相對離心力（relative centrifugal force，RCF）和離心時間的影響。PRF的纖維蛋白三維結(jié)構(gòu)與其內(nèi)的細(xì)胞分布取決于離心力[1]。血液中的細(xì)胞若是遭到了破壞，可能使離心力較高，且離心處理的時間較長。RCF受到離心轉(zhuǎn)速和離心半徑的影響，RCF=1.118×10-6×R×W2（其中R表示離心半徑，所用單位為cm，W表示離心轉(zhuǎn)速，所用單位為r/min）[2]。因此在RCF一定的情況下，由于不同品牌的離心機(jī)離心半徑不同，制備PRF的轉(zhuǎn)速應(yīng)有所不同。（1）最早提出的PRF制備方案是Choukroun等在2001年提出。由于其內(nèi)含有大量的白細(xì)胞，又被命名為L-PRF（leukocyte-PRF，L-PRF）。當(dāng)時用于制備PRF的離心機(jī)是法國Nice公司的PC-02臺式離心機(jī)[3]。（2）Shahram Ghanaati等在2014年使用同樣的離心機(jī)制備了標(biāo)準(zhǔn)PRF（standard PRF，S-PRF）：采集全血，采集量為9ml，將其放在不含有抗凝劑的塑料管中，且塑料管有無菌玻璃涂層，進(jìn)行離心處理，轉(zhuǎn)速為2700 r/min，離心時間為12 min；改良型富血小板纖維蛋白（advance platelet-rich fibrin，A-PRF）：采集全血，采集量為10 ml，將其放在無菌純玻璃管中，且其中不含有抗凝劑，進(jìn)行離心處理，轉(zhuǎn)速為1500 r/min，離心時間為14 min。得出：與S-PRF相比，A-PRF的纖維蛋白三維結(jié)構(gòu)更為松散，其內(nèi)的細(xì)胞數(shù)量更多，分布更為均勻。A-PRF似乎是自體細(xì)胞（特別是中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞）的理想供給者[4]。（3）2017年，Xuzhu Wang等制備i-PRF（injectable-platelet-rich fibrin， i-PRF）的方法如下：采集全血，采集量為10 ml，將其放在不含抗凝劑的試管內(nèi)，立即以700r/min（相對離心力大約60×g）離心3 min，上層的1 ml液體被稱為i-PRF（一種液體血小板濃縮物）。得出的結(jié)果為i-PRF對于更多的細(xì)胞有顯著的動員作用，能夠使得細(xì)胞進(jìn)行遷移，產(chǎn)生更多的生長因子及纖維連接蛋白[5]。有實驗證明：A-PRF+（low-speed+time）將血液以1300r/min的速度離心8 min，與L-PRF相比，其內(nèi)的生長因子含量較高，其生物相容及成纖維細(xì)胞遷移和增殖水平較高[6]。

2.2 其他因素

（1）試管材質(zhì)：李龍等證明用玻璃管制備的PRF比用塑料管制備的釋放VEGF含量高[7]。Mustafa等用鈦試管制備T-PRF（titanium-prepared，platelet-rich fibrin）。其血小板聚集與PRF在玻璃管內(nèi)制備的情況有相似之處，其生物相容性更好。試管類型（干玻璃或玻璃涂層塑料管），似乎沒有影響這種自體生物材料的結(jié)構(gòu)。（2）除水方式：對PRF凝膠進(jìn)行脫水處理，按照速度的快慢分為緩慢脫水和快速脫水，在釋放生長因子的含量上差異不顯著[8]。（3）儲存方法：李龍等的實驗證明4℃比37℃培養(yǎng)條件下PRF釋放的VEGF含量更高。

3 小 結(jié)

雖然國內(nèi)關(guān)于PRF生長因子含量的測定實驗有很多，但是其制備沒有一個標(biāo)準(zhǔn)的流程，導(dǎo)致生長因子含量不穩(wěn)定，從而影響了其臨床療效。因此， 將離心轉(zhuǎn)速換算成相對離心力，能夠大幅度減小實驗誤差，為臨床工作提供更可靠的制備方法。