冷凝集標本對血細胞分析結果的影響及處理方法

蘭小英 蘇秋妮 洪國粦

科學技術日新月異，現(xiàn)在先進的全血細胞分析儀技術幾乎完全替代了傳統(tǒng)的手工分析，全血細胞分析是各個醫(yī)院中運用最多的一種血液檢驗方法[1]，其檢測過程具有簡便、高效、快捷、準確等特點，新的檢測技術的高速發(fā)展在帶來方便的同時，也會讓操作人員忽略一點：檢測結果容易受到儀器和標本自身因素、環(huán)境因素等的影響[2-3]。血細胞分析結果的準確性直接影響臨床醫(yī)生對疾病的診斷和治療，檢驗結果的準確性和分析前、中、后的質量控制密切相關，在這其中，很重要的一個就是標本本身存在一些干擾因素：比如冷凝集、脂血、溶血等，筆者就冷凝集素對血細胞分析儀檢測參數(shù)的影響及處理方法進行探討。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

選取本院2015年1月—2017年8月門診和住院患者，篩選出有RBC冷凝集的標本40例，其中男性26例，女性14例，年齡1～56歲，其中10例肺癌患者，13例肝硬化患者，4例上呼吸道感染患者，1例為先天性乳頭內陷患者，12例溶血性貧血患者。選取的冷凝集的血常規(guī)標本，搖勻的過程中均可以觀察到管壁上有細沙樣的顆粒，同時Hb和RBC的比例嚴重失調，一般認為兩者的比例在正常成人中是30∶1[4]；血液標本剛制的血片上有許多細小顆粒；儀器直方圖、散點圖異常，另外，冷凝集試驗均為陽性。

1.2 儀器與試劑

SYSMEX XN-2000全血細胞分析儀配套試劑和質控品，儀器每年2次校準，質控每天均在控。

1.3 方法

分別采集EDTA-K2抗凝靜脈全血2ml，立即顛倒混勻4～5次后在30分鐘內，用SysmexXN-2000全血細胞分析儀對該40例標本常溫下進行全血細胞分析，記錄檢測結果并分析細胞散點圖及儀器報警信息。然后將該40例標本置于37℃恒溫水浴箱水浴30分鐘，在此期間，把儀器的手動模式調好，時間一到迅速取出標本并充分混勻后立即上機檢測。

1.4 處理有效的判斷

處理后異常增高的 MCH、MCHC恢復正常，RBC和Hb的比值趨于合理，散點圖正常，儀器報警信息消失，試管壁上未見細沙樣顆粒，顯微鏡鏡下血涂片未見紅細胞聚集現(xiàn)象 。

1.5 數(shù)據處理

結果用統(tǒng)計軟件SPSS 17.0進行處理，采用配對t 檢驗對結果進行比較分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

40例冷凝集標本的血常規(guī)檢測結果中WBC，Hb和PLT的數(shù)值在水浴前后沒有明顯的變化，對比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；RBC，HCT，MCV，MCH，MCHC的數(shù)值水浴前后對比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），冷凝集標本在水浴前后的檢測結果見表1。

3 討論

冷凝集現(xiàn)象是由自身抗體（冷凝集素）引起的，冷凝集素是一種針對RBC膜抗原的IgM 型自身抗體，在寒冷環(huán)境下可以和自身的RBC，“O”型 RBC 或其同型 RBC發(fā)生凝集反應。健康人體內有低效價的IgM型冷凝集素，一般不會引起RBC凝集，但當冷凝集素滴度增高時，則可引起比較嚴重的RBC凝集，這時就要及時判斷血常規(guī)結果的準確性。血液溫度較低達到特定溫度時，紅細胞抗原會結合自身抗體，從而引起自身凝集。特定溫度又叫冷凝集閾值溫度，通常范圍在4～25℃，大部分＜25℃，少數(shù)可超過30℃，患者通常無特異性臨床表現(xiàn)[5-6]。從表1可以清楚地看到：血常規(guī)檢測結果中RBC、HCT、MCV、MCH、MCHC的數(shù)值水浴前后有明顯的變化，對比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。有冷凝集現(xiàn)象的血液標本對血常規(guī)檢測結果的影響是顯而易見的，水浴前血常規(guī)RBC的計數(shù)結果明顯降低，MCV假性增高。這是因為SysmexXN-2000檢測RBC的原理是鞘流直流電阻抗法，稀釋后的血液樣本從噴頭的前端噴出，被鞘液包著的血細胞從小孔中央，沿著一定的軌道一個一個通過，而冷凝集的血液樣本，多個紅細胞聚集后形成的紅細胞團一起通過計數(shù)孔，引起RBC計數(shù)降低，同時聚集的細胞團也引起脈沖增大，導致MCV假性升高[7-8]，但二者又以 RBC計數(shù)減少為主，由此引起HCT也降低，從而造成由RBC、MCV、HCT計算得出的MCH、MCHC結果異常增高。水浴后，冷凝集現(xiàn)象消失，RBC正常計數(shù)，儀器散點圖正常，報警信息消失。

從表1可以看出：冷凝集標本水浴前后WBC、Hb、PLT這三個數(shù)值沒有明顯的變化，對比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。這是因為SYSMEX-XN2000全血細胞分析儀檢測WBC和RBC計數(shù)不在一個通道，冷凝集影響的是RBC計數(shù)通道，對WBC幾乎無影響。Hb檢測采用的是SLS-Hb衍生物法，利用溶血劑裂解紅細胞釋放出Hb，后者與溶血劑中的SLS結合形成SLS-Hb衍生物，儀器是采用波長為555 nm的激光照射，通過測定它的吸光度變化而換算出Hb的含量。本研究中Hb未受冷凝集影響，表明凝集的紅細胞已全部被溶血劑破壞。PLT雖然和RBC在一個通道檢測，但是因為體積和RBC相差比較大且數(shù)量較多，比較不容易受紅細胞包裹的影響，所以計數(shù)未受明顯影響[9]。

血細胞分析是各個醫(yī)院中最基本、最常規(guī)的一種血液檢驗方法。血液分析儀檢測結果的準確性對臨床有非常重要的影響，有時會直接影響到醫(yī)生對患者病情的評估和治療方案的制定。檢驗結果的質量保證是實驗室永恒的主題，為臨床提供準確可靠的檢驗結果是檢驗科工作的目標和責任。檢驗結果的準確，除了檢驗前標本的正確采集，檢驗中儀器的正確檢測，還包括檢驗后檢驗者對檢測結果的評估。重視和堅持做好分析后的質量控制工作也是獲得準確實驗結果的重要環(huán)節(jié)。在報告審核過程中也可以發(fā)現(xiàn)標本的異常情況。比如本文中提到的有冷凝集現(xiàn)象出現(xiàn)的血常規(guī)結果：RBC和Hb的比例嚴重失調，MCH和MCHC結果異常升高，對于肉眼難于識別的輕微冷凝集情況，可以從檢測結果和儀器的報警信息中得到提示：如出現(xiàn)“RBCAgglut？（紅細胞凝集？）”和“T urb/H b？（混濁/血紅蛋白干擾？）” 等報警信息，以及嗜堿通道的右側出現(xiàn)長長的拖尾現(xiàn)象，一旦發(fā)現(xiàn)此種提示，要高度懷疑冷凝集現(xiàn)象的發(fā)生。對于一般的冷凝集標本，首選37℃水浴30分鐘，標本水浴過程中，將儀器切換到手動模式，編好號，時間一到，立即上機檢測，如果儀器離水浴箱比較遠，則可以將標本放置在溫水的容器中運送至儀器邊上，以防止再次凝集的發(fā)生。對于環(huán)境溫度比較低的城市，建議采用開放暖氣的方式讓實驗室的溫度控制在25℃左右，以減少冷凝集現(xiàn)象的發(fā)生[10]。

表1 冷凝集標本水浴前后結果比較 （ ±s）

表1 冷凝集標本水浴前后結果比較 （ ±s）

處理 RBC（×1012/L） HCT MCV （fl） MCH（pg ） MCHC（g / L） PLT（×109/L） WBC（×109/L）Hb（g / L）水浴前 0.79±0.11 0.115±0.10 115.00±6.23 125.00±29.10 800.00±102.00 248.00±103.00 6.46±2.86 125.00±22.35水浴后 3.51±0.92 0.39±0.07 93.00±6.77 30.00±2.32 321.00±13.00 250.00±102.00 7.00±3.10 124.00±21.88 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05

[1] 彭勇. 冷凝集對血細胞分析結果的影響及消除方法探討[J]. 中國臨床新醫(yī)學，2016，9（7）：644-646.

[2] 溫曉燕，陳淑紅，楊秀蓮，等. 血常規(guī)及凝血常規(guī)分析前影響因素的研究[J].寧夏醫(yī)學雜志，2013，35（4）：323-324.

[3] 鐘雪群. 影響血常規(guī)檢測結果的因素調查分析[J]. 當代醫(yī)學，2013，19（5）：26-27.

[4] 陳為. 不同處理方法對冷凝集標本血細胞分析的影響[J]. 當代醫(yī)學，2016，22（16）：15-17.

[5] 方春富，何智. IgM抗-M在37℃出現(xiàn)溶血反應合并自身冷抗體1例[J]. 中國輸血雜志，2013，26（11）：1145-1146.

[6] 渠效飛，張璐琪，王君. 紅細胞冷凝集素對血細胞分析計數(shù)的干擾一例[J]. 中國美容醫(yī)學，2012，21（9）：314-315.

[7] 張俊峰，王彥春，魏殿軍. 特殊冷凝集標本對血細胞分析儀的影響及篩選方法[J]. 實用檢驗醫(yī)師雜志，2015，7（2）：127-130.

[8] 孫燕敏. 紅細胞冷凝集對全自動血細胞分析儀檢驗結果的影響[J].中國醫(yī)藥指南，2013，11（34）：158-159.

[9] 范紅平，忽勝和. 紅細胞冷凝集對全血細胞計數(shù)影響分析[J]. 實驗與檢驗醫(yī)學，2015，33（6）：737-739.

[10] 駱婷婷，駱小寧，王成剛，等. 冷凝集素對血細胞分析儀檢測參數(shù)的影響及消除方法探討[J]. 中國鄉(xiāng)村醫(yī)藥，2017，24（3）：61-62.