TSC1在胃癌組織中的表達(dá)及其意義*

李 慧 宮為大

(1.皖南醫(yī)學(xué)院機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)中心,安徽 蕪湖 241001; 2.蕪湖市第一人民醫(yī)院康復(fù)科,安徽 蕪湖 241000)

TSC1在胃癌組織中的表達(dá)及其意義*

李 慧1宮為大2

(1.皖南醫(yī)學(xué)院機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)中心,安徽 蕪湖 241001; 2.蕪湖市第一人民醫(yī)院康復(fù)科,安徽 蕪湖 241000)

目的 研究抑癌基因TSC1蛋白在胃癌組織及正常胃組織中的表達(dá)水平。方法 選取蕪湖市第一人民醫(yī)院于2014年7月—2016年12月收治的50例胃癌患者作為研究對象，應(yīng)用Western-Blot法檢測所有患者胃癌組織及癌旁正常胃組織中TSC1蛋白及β-actin蛋白的含量，通過比較兩種組織中TSC1帶與β-actin帶的黑度值比值(A)來了解TSC1蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 胃癌組織中A值較正常胃組織中A值低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 抑癌基因TSC1基因表達(dá)產(chǎn)物在胃癌組織中的表達(dá)水平較正常胃組織低，有可能在胃癌的早期診斷及預(yù)防方面發(fā)揮作用。

抑癌基因；TSC1蛋白；胃癌；Western-Blot

胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，居我國消化道惡性腫瘤的第二位，男性的發(fā)病率高于女性。早期診斷、早期治療是保證患者預(yù)后良好的重要措施。目前腫瘤標(biāo)志物如CEA、CA125等被認(rèn)為可以作為判斷胃癌預(yù)后及治療效果的依據(jù)，尚不能作為診斷胃癌的指標(biāo)。而結(jié)節(jié)性硬化綜合癥(TSC)的致病基因包括TSC1及TSC2均被認(rèn)為是重要的抑癌基因，這兩種基因所編碼的蛋白可以通過互相結(jié)合從而抑制細(xì)胞的異常增殖[1-2]。因此，本實(shí)驗(yàn)研究TSC1基因表達(dá)產(chǎn)物，即TSC1蛋白在胃癌組織中的表達(dá)及其意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取蕪湖市第一人民醫(yī)院于2014年7月—2016年12月收治的50例胃癌患者作為研究對象，保留患者手術(shù)標(biāo)本，并分別取胃癌組織及癌旁正常胃組織。患者中男性33例，女性17例；年齡為35～64歲，平均年齡為(56.31±4.86)歲；其中腺癌(腸型和彌漫型)38例，乳頭狀腺癌2例，管狀腺癌3例，鱗狀細(xì)胞癌3例，腺鱗癌2例，未分化癌1例，小細(xì)胞癌1例。所有患者均經(jīng)病理學(xué)檢查確診為胃癌，并排除患有其他種類惡性腫瘤的患者及有嚴(yán)重器質(zhì)性病變的患者。

1.2檢測方法 依次進(jìn)行以下步驟：制備蛋白樣品，SDS-PAGE電泳(制膠、上樣、電泳)，轉(zhuǎn)膜，免疫反應(yīng)，顯色(結(jié)果檢測)，分析圖像。通過圖像分析系統(tǒng)的掃描，來測定相應(yīng)的黑度值。并且根據(jù)圖像中條帶的深淺及大小來觀察TSC1基因表達(dá)產(chǎn)物的含量。分別選擇上海信裕生物科技有限公司生產(chǎn)的Hamartin/TSC1 Antibody、碧云天公司生產(chǎn)的辣根過氧化物酶標(biāo)記的IgG單抗作為一抗和二抗的試劑。

1.3觀察指標(biāo) 由于β-actin蛋白的表達(dá)水平在不同組織中的表達(dá)差異性比較小，可以分別測定胃癌組織及正常胃組織中TSC1帶與β-actin帶的黑度的比值(A)，用A值來反應(yīng)不同組織中TSC1蛋白的表達(dá)水平。A值越高，代表該蛋白的表達(dá)水平越高。

2 結(jié) 果

正常胃組織中TSC1帶與β-actin帶的黑度值比值(A)為0.17±0.11，明顯高于胃癌組織中的黑度值比值(0.11±0.10)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.32，P<0.05)。

3 討 論

研究[3-4]表明TSC1和TSC2基因均為重要的抑癌基因，其中TSC1基因由23個(gè)外顯子構(gòu)成，可以編碼TSC1蛋白，也就是錯(cuò)構(gòu)瘤蛋白,而TSC2基因則可以通過轉(zhuǎn)錄和翻譯而編碼馬鈴薯球蛋白，這兩種蛋白可以通過互相結(jié)合而構(gòu)成復(fù)合體，參與細(xì)胞增殖等過程。當(dāng)TSC基因發(fā)生突變或者損傷時(shí)，mTOR信號通路則會被激活，細(xì)胞的增殖分化受到影響，從而促使腫瘤的發(fā)生。

胃癌的發(fā)病率和病死率在世界范圍內(nèi)都處于前列，尤其是在我國的西北和沿海地區(qū)。目前對于胃癌的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，認(rèn)為其可能與幽門螺桿菌(HP)的感染、飲食因素、地理環(huán)境、慢性疾患和癌前病變有關(guān)。分子生物學(xué)方面的研究[5]表明，胃癌的發(fā)生是一個(gè)多階段、多因素的發(fā)展進(jìn)程，其中可以涉及到各種基因，如c-met、K-ras等癌基因的過表達(dá)，Rb、P53等抑癌基因的基因突變等。目前，已經(jīng)有TSC1基因與胰腺癌等惡性腫瘤間關(guān)系的研究，而TSC1基因與胃癌的研究尚不多見，因此本研究檢測胃癌組織中TSC1蛋白的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TSC1蛋白在胃癌組織中的表達(dá)水平低于正常胃組織，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示TSC1基因可能在胃癌的發(fā)生過程中發(fā)揮了作用。我們認(rèn)為，這可能與TSC1蛋白可以在細(xì)胞從G0期—G1期的進(jìn)展過程中發(fā)揮其調(diào)控作用，控制細(xì)胞的增殖有關(guān)，因此當(dāng)該蛋白的表達(dá)水平降低時(shí)，會加快細(xì)胞從靜止期進(jìn)入分裂期的過程，而引起大量細(xì)胞的增殖[6]。同時(shí)，TSC1蛋白在胰島素-PI3K-Akt-mTOR-S6K信號傳導(dǎo)通路中可以發(fā)揮重要的作用，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長分化及記憶能力。而上述信號傳導(dǎo)通路可以在腫瘤細(xì)胞的分化、生存及血管生成等方面發(fā)揮作用。這些都說明了TSC1蛋白可以通過影響細(xì)胞的分化進(jìn)而影響胃癌的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，TSC1基因表達(dá)產(chǎn)物，即TSC1蛋白在胃癌組織中的表達(dá)水平低于正常胃組織。該蛋白的檢測有可能在胃癌的早期診斷及預(yù)防方面發(fā)揮作用，但其在胃癌中的具體作用機(jī)制還有待更進(jìn)一步的研究。

[1] 王玉國,林穎,羅春玉，等.應(yīng)用Ion Torrent半導(dǎo)體測序技術(shù)檢測結(jié)節(jié)性硬化癥患者的致病突變[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志,2016,33(2):169-172.

[2] 孫丹,劉智勝,胡家勝，等.結(jié)節(jié)性硬化癥患兒TSC1/TSC2突變基因型與表型的相關(guān)性分析[J].中華實(shí)用兒科臨床雜志,2015,30(6):461-466.

[3] 黃昌艷.結(jié)節(jié)性硬化癥TSC1/TSC2基因突變的高通量測序快速診斷[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2016,32(1):92-95.

[4] 李花,胡湘蜀,費(fèi)凌霞，等.結(jié)節(jié)性硬化癥患者基因突變與臨床表型的關(guān)系[J].中華神經(jīng)科雜志,2016,49(5):369-374.

[5] 左婷婷,鄭榮壽,曾紅梅，等.中國胃癌流行病學(xué)現(xiàn)狀[J].中國腫瘤臨床,2017,44(1):52-58.

[6] Niida Y,Wakisaka A,Tsuji T，et al.Mutational analysis of TSC1 and TSC2 in Japanese patients with tuberous sclerosis complex revealed higher incidence of TSC1 patients than previously reported[J].Journal of Human Genetics,2013,58(4):216-225.

皖南醫(yī)學(xué)院中青年科研項(xiàng)目(WK201414)。

李慧(1983—)，安徽蕪湖人，研究生，實(shí)驗(yàn)師，研究方向：分子生物學(xué)。

R735.2

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1004-7115(2018)01-0059-02

10.3969/j.issn.1004-7115.2018.01.019

2017-10-17)