仔豬黃痢的病原菌分離及藥敏試驗的研究

文│吳建勛 滕海濤 閆衛(wèi)紅（吉林省白城市動物疫病預(yù)防控制中心）韓璐璐（吉林省白城市畜牧獸醫(yī)技術(shù)指導(dǎo)中心）

隨著養(yǎng)豬業(yè)不斷健康持續(xù)向著規(guī)模化、集約化趨勢的發(fā)展，由于疫病控制過程中抗生素類藥物非規(guī)范化的使用，致使細菌、病毒抗菌譜日益廣泛的問題凸顯，治療難度大，也間接影響了養(yǎng)豬業(yè)的經(jīng)濟效益。在豬場的疫病控制過程中，發(fā)病率較高仔豬黃痢，具有流行性廣、發(fā)病率高的特點。該致病菌為大腸桿菌，常見于哺乳期的仔豬，致病菌對仔豬的消化系統(tǒng)（胃腸）造成損傷，影響機體的正常的消化、代謝及哺乳期主要營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，由于哺乳期仔豬機體抵抗力較弱，因而致死率較高。

臨床上主要以糞便的感官及生物學(xué)細菌特征為辨別依據(jù)。該病患豬個體體征現(xiàn)象不明顯，容易被忽視。也可以從病仔豬飼喂及采食量作對比，大體判斷仔豬是否患病。該致病菌屬于革蘭氏陰性短桿菌群的一種，生物學(xué)大小為0.5×（1～3）微米，有鞭毛，能進行生物學(xué)運動，無芽孢。該菌屬的種類較多（約16種），因而在治療過程中需要進行生物學(xué)鑒定菌種，根據(jù)菌體抗原的不同進行特異性的治療。

畜牧相關(guān)統(tǒng)計部門大量數(shù)據(jù)采集分析表明，該病使仔豬機體對飼料的能量轉(zhuǎn)化效果降低，阻礙仔豬的正常生長，并且致死率較高，給畜牧養(yǎng)豬業(yè)造成較大經(jīng)濟損失，也間接限制中國畜牧養(yǎng)豬業(yè)健康、持續(xù)、規(guī)范化的發(fā)展。

一、試驗方法

1.病原分離。病原分離步驟見圖1。

2.生化試驗。取備用待檢測樣品進行生物學(xué)單糖及多糖發(fā)酵實驗，進行菌種的分離和鑒定實驗。

3.藥敏試驗。按照美國臨床實驗室標準委員會CLSI推薦的Kirby－Bauer法對其中20株分離菌進行紙片法藥敏試驗。

二、結(jié)果與分析

1.細菌純化、培養(yǎng)特性及形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果。將12份病料分別于M.C培養(yǎng)基和普通培養(yǎng)基中培養(yǎng)，鑒定結(jié)果如下。

（1）M.C培養(yǎng)基。大小適中，表面濕潤呈紅色，菌體呈圓形隆起，光滑，邊緣整齊。

（2）普通瓊脂培養(yǎng)基?；野咨瑘A形，稍隆起，光滑，濕潤，邊緣整齊的中等大小菌落。

◎圖1 仔豬黃痢病原菌分離步驟

表1 分離菌株的糖酵解試驗結(jié)果

表2 分離菌株生化試驗鑒定結(jié)果

將上述鑒定完畢的菌落，進行涂片，革蘭氏染色、鏡檢（圖2）。其結(jié)果為陰性、中等大小。最后初步斷定其為大腸桿菌。

2.生化試驗鑒定結(jié)果。對分離出的5株菌株進行生化鑒定，結(jié)果分離表明能發(fā)酵葡萄糖、半乳糖、麥芽糖、乳糖、甘露醇、鼠李糖，不能對蔗糖進行利用（除菌A以外）（表1）；吲哚試驗陽性，MR試驗陽性；H2S、VP、尿素、枸櫞酸鹽試驗陰性（表2）。根據(jù)生化實驗及生物學(xué)特征綜合分析，最終確定該致病菌為大腸桿菌。

3.藥敏試驗結(jié)果。對上述的10種藥物進行藥敏試驗，根據(jù)測定藥敏紙片產(chǎn)生的抑菌圈直徑的大?。▓D3），參考標準值后表明，氟苯尼考、頭孢噻肟鈉、新霉素和諾氟沙星4種抗生素藥物為高敏；頭孢氨噻肟、磺胺異惡唑、四環(huán)素3種抗生素藥物為中敏；鏈霉素、青霉素、慶大霉素3種抗生素藥物為耐藥（表3）。

三、結(jié)論

隨著畜牧業(yè)相關(guān)部門對該疾病的重視日益增強，相關(guān)科研成果及疫病應(yīng)對措施方面取得了較大進展。但由于該致病菌菌屬的抗藥性較強，而且大腸桿菌血清型極具多樣性，這些疫苗具有較強的特異性致使在治療同菌屬的非特異性菌種效果一般。并且，由于中國大部分豬場非規(guī)范化分散管理的局限（主要建立在城、鄉(xiāng)、鎮(zhèn)偏遠地區(qū)），管理條件較差，特定的生物學(xué)檢測條件有限，致使豬場對于該病的治療效果一般。J.Osek報道，1.91%致病性菌株含K88、K99、F17、F41纖毛菌株，57.3% 的致病菌能產(chǎn)生LT1、ST1、Sst2E毒素，可見疫苗治療的局限性。

表3 20株仔豬黃痢病原菌對10種抗菌藥物的敏感判定

◎圖2 分離菌株革蘭氏染色、鏡檢

◎圖3 藥敏試驗

筆者建議，商品苗研制應(yīng)考慮毒素、優(yōu)勢血清型等綜合制病因素。藥物治療方面，應(yīng)該減少抗生素的濫用。在豬場的日常管理過程中，應(yīng)該注意豬舍的環(huán)境衛(wèi)生情況，發(fā)現(xiàn)病豬應(yīng)及時隔離治療觀察。做好治療記錄，根據(jù)仔豬的病態(tài)體征及相關(guān)的生物學(xué)實驗，鑒定出該豬場該疾病大腸桿菌菌種，準備好治療該大腸桿菌的特異性血清，減少不明致病菌感染后盲目治療造成大量金錢及時間的浪費，間接提高豬場的經(jīng)濟效益，從而推動畜牧養(yǎng)豬業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。