大興安嶺地區(qū)2種珍稀菌類母種菌絲培養(yǎng)溫度的篩選

龐啟亮+胡海冰+梁秀鳳+李宏濤+許延敏++劉柱+劉昕哲

摘要 松杉靈芝和荷葉離褶傘是大興安嶺地區(qū)的2種野生珍稀菌類。本試驗(yàn)以野生靈芝和荷葉離褶傘分離得到的母種為材料，以PDA為培養(yǎng)基，研究其在不同培養(yǎng)溫度條件下的菌絲生長(zhǎng)狀況，旨在篩選出其最適生長(zhǎng)溫度，為以后的培養(yǎng)及優(yōu)化提供必要的數(shù)據(jù)依據(jù)。結(jié)果表明，在20 ℃條件下，松杉靈芝和荷葉離褶傘的菌絲長(zhǎng)勢(shì)濃密、潔白、整齊。因此，其最適生長(zhǎng)溫度均為20 ℃左右。

關(guān)鍵詞 松杉靈芝；荷葉離褶傘；最適生長(zhǎng)溫度；大興安嶺地區(qū)

中圖分類號(hào) S646.1；S646.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2017）22-0052-01

松杉靈芝（Ganoderma tsugae Murr.），又名鐵杉靈芝、赤芝、木靈芝、靈芝草，為擔(dān)子菌綱、多孔菌目、靈芝科、靈芝屬，是一種珍貴的食、藥兼用真菌，其有效藥用成分是普通靈芝的數(shù)倍[1-2]。野生松杉靈芝主要分布在寒溫帶地區(qū)，如我國(guó)的黑龍江、吉林、遼寧、內(nèi)蒙古等地區(qū)[3]。多數(shù)生長(zhǎng)在海拔700～1 400 m的針闊混交林、針葉混交林內(nèi)。目前，在大興安嶺地區(qū)，已開始研究松杉靈芝的人工栽培技術(shù)，但由于母種存活率低，在一定程度上造成了產(chǎn)品質(zhì)量差，經(jīng)濟(jì)收益低。離褶傘真菌（Lyophyllum Karst）屬于擔(dān)子菌門（Basidomycota）傘菌綱（Agariomycetes）傘菌目（Agaricales）離褶傘科（Lyoph-yllaceae）[4]。離褶傘真菌不僅美味可口，也是一種珍貴的藥用真菌，具有抗衰老、抗腫瘤、提高免疫功能等作用。目前，世界記錄離褶傘真菌有200余種[5]，其中我國(guó)報(bào)道的有19種，主要分布在黑龍江、吉林、遼寧、內(nèi)蒙古、云南等地區(qū)[6]。

松杉靈芝和荷葉離褶傘是大興安嶺地區(qū)的2種野生珍稀菌類，具有很高的應(yīng)用前景和開發(fā)價(jià)值，在其人工栽培技術(shù)的研究過程中，母種培養(yǎng)是最為關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。本試驗(yàn)以PDA為培養(yǎng)基，在不同的溫度條件下，培養(yǎng)松杉靈芝和荷葉離褶傘的母種，觀察其菌絲的生長(zhǎng)狀況，篩選出其最適生長(zhǎng)溫度，為進(jìn)一步開發(fā)研究其人工栽培技術(shù)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試食用菌母種。松杉靈芝菌種：加區(qū)主栽靈芝6號(hào)和2013年圖強(qiáng)野生菌種分離提純得到的母種；毛尖蘑：野生荷葉離褶傘分離提純得到的母種。

1.1.2 供試基本培養(yǎng)基及儀器。PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、加水至1 000 mL，pH值自然。儀器：超凈工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱、平板、接種鉤、尺子、記號(hào)筆。

1.2 試驗(yàn)方法

在超凈工作臺(tái)里，將不同的供試菌種接種到PDA平板上培養(yǎng)，每個(gè)品種分別在3個(gè)溫度下（20、25、30 ℃）各接種3個(gè)平板，進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。然后將平板放到相應(yīng)的不同溫度的恒溫培養(yǎng)箱里倒置培養(yǎng)。除溫度不同外，其他培養(yǎng)條件均相同。

在培養(yǎng)期間，從第4天開始，每種供試品種選2個(gè)平板進(jìn)行測(cè)量菌落的直徑，定時(shí)記錄松杉靈芝和荷葉離褶傘菌絲的生長(zhǎng)速度、生長(zhǎng)勢(shì)、顏色、邊緣特征等。最后，根據(jù)供試菌種的生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)勢(shì)，分析出相應(yīng)的最適生長(zhǎng)溫度。具體試驗(yàn)設(shè)計(jì)如表1所示。

2 結(jié)果與分析

2.1 松杉靈芝母種菌絲在不同溫度下的生長(zhǎng)情況

2.1.1 加區(qū)主栽靈芝6號(hào)在不同溫度下菌絲的生長(zhǎng)情況。從表2可以看出，在20 ℃和25 ℃下，加區(qū)主栽靈芝6號(hào)的日均生長(zhǎng)速度基本差不多，都接近于0.60 cm/d，在30 ℃下，其菌絲基本不長(zhǎng)。從表3可以看出，在20 ℃下，培養(yǎng)15 d菌絲長(zhǎng)滿平板，菌絲粗壯稠密且分布均勻，菌絲長(zhǎng)滿平板后尚未分泌色素；在25 ℃下，培養(yǎng)17 d后菌絲長(zhǎng)滿平板，菌絲稀疏，分布不均勻，菌絲長(zhǎng)滿平板后，分泌出少量的色素，菌絲有老化的現(xiàn)象。

2.1.2 圖強(qiáng)野生松杉靈芝在不同溫度下菌絲的生長(zhǎng)情況。從表4可以看出，圖強(qiáng)野生靈芝母種菌絲體在20 ℃下的日均生長(zhǎng)速度為0.67 cm/d，較25 ℃的快，30 ℃下菌絲基本不生長(zhǎng)。在20 ℃下，培養(yǎng)15 d菌絲長(zhǎng)滿平板，菌絲潔白，粗壯稠密，分布均勻，菌絲長(zhǎng)滿平板后，接種點(diǎn)的一側(cè)2 cm處分泌了少量色素；25 ℃下，培養(yǎng)17 d后菌絲長(zhǎng)滿平板，菌絲潔白濃密，分布不太均勻，菌絲長(zhǎng)滿平板后，接種點(diǎn)附近分泌了大量色素，菌絲老化嚴(yán)重。

2.2 荷葉離褶傘母種菌絲在不同溫度下的生長(zhǎng)情況

從表5可以看出，荷葉離褶傘在20 ℃下的生長(zhǎng)速度為0.387 cm/d，明顯高于其他處理，菌絲潔白，粗壯稠密且分布均勻，故其最適生長(zhǎng)速度為20 ℃左右。30 ℃時(shí)，菌絲死亡。

3 結(jié)論與討論

加區(qū)主栽靈芝6號(hào)和圖強(qiáng)野生松杉靈芝是大興安嶺地區(qū)特有的2種野生松杉靈芝，通過試驗(yàn)證明，在20 ℃條件下，其母種菌絲生長(zhǎng)速度較快，菌絲粗壯茂密，菌絲均勻整齊分布，而且基本不會(huì)出現(xiàn)老化現(xiàn)象；在25 ℃的條件下生長(zhǎng)勢(shì)相對(duì)較弱，菌絲均出現(xiàn)老化；30 ℃時(shí)菌絲死亡。因此，松杉靈芝母種菌絲的最適生長(zhǎng)溫度應(yīng)在20 ℃左右。

荷葉離褶傘經(jīng)過在20、25、30 ℃的條件下培養(yǎng)處理，結(jié)果表明，在20 ℃的條件下，其母種菌絲生長(zhǎng)最快，日均生長(zhǎng)速度可達(dá)到0.387 cm/d，明顯高于其他溫度處理，菌絲潔白，粗壯稠密且分布均勻。因此，其最適生長(zhǎng)溫度應(yīng)該在20 ℃左右。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 吳興亮.中國(guó)藥用真菌[M].北京：科學(xué)出版社，2013：12.

[2] 孫巍巍，包海鷹.松杉靈芝提取物體外抗氧化活性的研究[J].中國(guó)食用菌，2010，29（6）：39-41.

[3] 吳興亮，戴玉成，林龍河.中國(guó)靈芝科資源及其地理分布[J].貴州科學(xué)，2004（2）：27-33.

[4] KIRK PM，CANNON PF，MINTER DW，et al.Dictionary of the fungi 10th edition[M].Trombridge：Cromwell Press，2008.

[5] 李永紅，柴紅梅，李樹紅，等.離褶傘研究進(jìn)展[J].中國(guó)食用菌，2008，27（2）：10-12.

[6] 李曉，李玉.中國(guó)離褶傘屬真菌研究進(jìn)展[J].食用菌學(xué)報(bào)，2009，16（3）：75-79.endprint