柱前衍生GC-MS-SIM法分析煙草中西柏三烯醇

李小蘭，黃善松，賈海江，楊 俊，錢曉波，徐雪芹*

(1.廣西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司， 廣西 南寧 530001；2. 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)煙草與健康研究中心，安徽 合肥 230051)

柱前衍生GC-MS-SIM法分析煙草中西柏三烯醇

李小蘭1，黃善松1，賈海江1，楊 俊2，錢曉波2，徐雪芹1*

(1.廣西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司， 廣西 南寧 530001；2. 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)煙草與健康研究中心，安徽 合肥 230051)

【目的】研究煙葉中西柏三烯醇的分析測(cè)定方法，為研究煙葉中西柏三烯醇與煙葉品質(zhì)的關(guān)系提供參考?！痉椒ā拷⒁环N雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)衍生化GC-MS-SIM測(cè)定煙草中2種西柏三烯二醇的方法，通過(guò)對(duì)提取試劑，試劑體積，提取方式和提取時(shí)間四個(gè)因素進(jìn)行探討?！窘Y(jié)果】煙葉樣品中西柏三烯二醇的最佳提取溶劑為二氯甲烷，采用超聲方式，超聲時(shí)間為10 min；衍生化最佳條件為20 ℃下加入體積比為3∶2的吡啶：三氟乙酰胺(BSTFA)溶液，反應(yīng)時(shí)間100 min。采用該方法，對(duì)不同產(chǎn)地?zé)熑~進(jìn)行樣品中的西柏三烯醇類物質(zhì)定量檢測(cè)，結(jié)果表明不同產(chǎn)區(qū)煙葉中西柏三烯醇含量差異較大?！窘Y(jié)論】該方法重復(fù)性、精密度良好，且操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)少，可有效對(duì)不同產(chǎn)地的煙葉樣品中的西柏三烯醇類物質(zhì)進(jìn)行定量檢測(cè)。

西柏三烯醇；衍生化；GC-MS SIM；煙草

【研究意義】西柏三烯醇類物質(zhì)是植物生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)劑以及煙草香氣物質(zhì)的前體物，它最初是以無(wú)味物質(zhì)存在于新鮮煙葉中。西柏三烯二醇在煙草調(diào)制、陳化及燃燒過(guò)程中易發(fā)生氧化和降解反應(yīng)，產(chǎn)生多種降解產(chǎn)物，如茄酮、茄醇和降茄二酮等，而這些降解產(chǎn)物是非常重要的煙草香味成分。研究表明添加有西柏三烯二醇的卷煙與對(duì)照樣相比具有可可香味，余味干凈，吃味豐滿，較高含量的添加可產(chǎn)生輕微的花香韻，較低含量的添加則產(chǎn)生淡雅的粉香韻[1]，對(duì)研究煙葉的香型特征和烤煙品質(zhì)具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】目前，已有研究表明煙草腺毛的主要物質(zhì)是類西柏烷和類賴百當(dāng)二萜、表面蠟、糖脂和部分微量元素[2-4]，煙葉腺毛分泌物主要成分為類西柏烷類物質(zhì)[5-6]。相關(guān)研究報(bào)道顯示鮮煙葉中西柏烷二萜醇含量占葉面總脂類物質(zhì)的50 %，其占鮮葉重的0.7 %[7-8]。西柏三烯類物質(zhì)中含有一個(gè)不同氧化程度的十四元“西柏烷”大環(huán)[9]。其中，煙葉中的西柏三烯類物質(zhì)主要是(1S, 2E, 4R, 6R, 7E, 11E) 西柏-2, 7, 11-三烯-4, 6-二醇 (α-CBD)和 (1S, 2E, 4S, 6R, 7E, 11E) 西柏-2, 7, 11-三烯-4, 6-二醇 (β-CBD) (二者分子式均為C20H34O2)。Yilmaz等采用GC-MS對(duì)轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因鮮煙葉中的西柏三烯醇類物質(zhì)進(jìn)行了半定量分析[10]?？坠廨x等采用氣質(zhì)聯(lián)用方法，研究品種烤煙為K326的上中下不同部位成熟葉片中腺毛分泌物的變化情況[11]。吳云平等按照烤煙的品種不同，采用芳樟醇為內(nèi)標(biāo)，對(duì)腺毛分泌物進(jìn)行了分析檢測(cè)[12]。錢曉波等采用加速溶劑萃取(ASE)氣質(zhì)聯(lián)用法對(duì)萃取液中的目標(biāo)物進(jìn)行定性、定量檢測(cè)[13]。目前，煙草中西柏三烯醇的檢測(cè)方法主要有三種：高效液相色譜法、氣相色譜法、和氣質(zhì)聯(lián)用法[14]。其中氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)是開(kāi)發(fā)最早，儀器最完善、應(yīng)用最廣泛的一種[15]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】從優(yōu)化進(jìn)樣方式著手，擬采用柱前衍生化的方法，提高煙草中西柏三烯醇的測(cè)定精度?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】建立一種雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)衍生化GC-MS-SIM測(cè)定煙草中兩種西柏三烯二醇的方法，應(yīng)用所建方法對(duì)不同產(chǎn)地?zé)熑~中的西柏三烯醇類物質(zhì)進(jìn)行了定量分析，為進(jìn)一步研究西柏三烯醇與煙葉品質(zhì)的關(guān)系提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

二氯甲烷為色譜純(天津賽孚瑞科技有限公司)。吡啶、N，N-二甲基甲酰胺、四氫呋喃均為分析純(上海德諾化工有限公司)。衍生化試劑雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)(內(nèi)含1 %三甲基氯硅烷TMCS)、三甲基硅烷咪唑(TMSI)、以及N-甲基-N-(三甲基硅烷)三氟乙酰胺(MSTFA)(日本東京化成工業(yè)株式會(huì)社公司)。

標(biāo)準(zhǔn)品：α-西柏三烯二醇(10 mg)、β-西柏三烯二醇(10 mg)(美國(guó)LKT Laboratories公司，純度均為98 %)。內(nèi)標(biāo)物正十九烷(美國(guó)A Johnson Matthey公司，純度為99 %)。

烤煙樣品由廣西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司提供，取自2012-2014年度廣西、云南、貴州3地的不同產(chǎn)區(qū)，品種為紅花大金元。煙葉用被研磨至60目，混合均勻后置于冷暗處儲(chǔ)藏，用于分析檢測(cè)。

1.2 試驗(yàn)儀器

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀Thermo ISQ GC/MS (ThermoFisher)，DB-5MS毛細(xì)管柱(60 m×0.25 mm×0.25 μm) (美國(guó)Agilent公司)，CQX25-12超聲儀(上海必能信超聲有限公司，80W)；EL204型電子分析天平：感量0.0001 g(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市友聯(lián)儀器研究所)；旋風(fēng)精密粉碎機(jī)：1095 Cyclotec(XF-98B)型(美國(guó))；KDM-1000型可調(diào)式電熱套(北京科偉永興儀器有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配置 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置：用二氯甲烷分別溶解α-西柏三烯二醇和β-西柏三烯二醇，然后轉(zhuǎn)移到10 mL的量瓶中，用二氯甲烷稀釋至刻度，此溶液即為α-西柏三烯二醇和β-西柏三烯二醇的標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度均為1.0 mg/mL)。

內(nèi)標(biāo)溶液的配制：準(zhǔn)確稱取正十九烷250 mg，放置于50 mL的容量瓶中，用CH2Cl2稀釋至刻度，即為內(nèi)標(biāo)溶液。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別移取1，50，100，150，200 和270 μl的α-西柏三烯二醇標(biāo)準(zhǔn)溶液至2 mL的色譜瓶中，再分別加入200 μl的內(nèi)標(biāo)液。分別移取1，30，50，80，120和160 μl的β-西柏三烯二醇標(biāo)準(zhǔn)溶液至2 mL的色譜瓶中，再分別加入200 μl的內(nèi)標(biāo)液。蒸干溶劑后，往色譜瓶中加入1 mL的衍生化試劑溶液。

對(duì)以上2組標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行衍生化反應(yīng)，然后用上述GC-MS方法進(jìn)行測(cè)定，并以濃度為橫坐標(biāo)，目標(biāo)分析物峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比(A/AIS)為縱坐標(biāo)分別繪制α-西柏三烯二醇和β-西柏三烯二醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3 樣品前處理及衍生化條件 準(zhǔn)確稱取0.5 g 煙末(精確至0.001 g)，置于100 mL錐形瓶中，加入50 mL提取溶液(二氯甲烷)，超聲振蕩10 min后，用10 mL的移液管移取10 mL上清液置于濾管中，通過(guò)濾膜(有機(jī)系，13 mm×0.45 μm)注入樣品瓶中，加入200 μl內(nèi)標(biāo)液，在70 ℃的條件下水浴蒸發(fā)去除溶劑。加入吡啶：BSTFA的體積比為3∶2的溶液 1000 μl，洗滌樣品瓶器壁，將溶液分多次轉(zhuǎn)入色譜瓶。在75 ℃水浴中進(jìn)行衍生化反應(yīng)100 min，得到GC-MS分析溶液。

1.3.4 GC/MS分析條件 GC條件：進(jìn)樣口溫度設(shè)為250 ℃，進(jìn)樣量為1 μl；載氣為He，流速為1.2 mL/min；進(jìn)樣方式為不分流進(jìn)樣。柱溫箱的升溫程序：起始溫度160 ℃，保持2 min，后以10 ℃/min升到210 ℃，保持35 min，再以10 ℃/min升到250 ℃，保持15 min。MS條件：傳輸線溫度250 ℃；離子源溫度280 ℃；電離源為EI，電離能70 eV，溶劑延遲7 min。質(zhì)譜的掃描模式有2種：采用全掃模式對(duì)目標(biāo)成分進(jìn)行定性檢測(cè)，掃描范圍為40～600 amu；目標(biāo)成分的定量檢測(cè)采用SIM模式，每種目標(biāo)物選擇1個(gè)定量離子、3個(gè)定性離子。衍生化后的α-西柏三烯二醇、β-西柏三烯二醇以及內(nèi)標(biāo)物的特征掃描離子詳見(jiàn)表1。

表1 3種物質(zhì)的保留時(shí)間、定性離子及定量離子

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

質(zhì)譜圖通過(guò)NIST 08 (National Institute of Standards and Technology, Gaithersburg, MD)標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫(kù)的檢索定性。數(shù)據(jù)用Xcalibur 1.1 軟件 (Thermo Quest)記錄并處理。

2 結(jié)果與分析

圖1 提取溶劑Fig.1 Extraction solvent

圖2 試劑體積Fig.2 Reagent volume

2.1 提取條件選擇

本研究對(duì)提取煙草樣品西柏三烯二醇的萃取劑、溶劑體積、提取方法和提取時(shí)間等4個(gè)條件進(jìn)行探討和優(yōu)化。從二氯甲烷、三氯甲烷和乙腈3種提取溶劑提取效率比較(圖1)可以看出，二氯甲烷的提取效果要好于其他2種溶劑。因此，最佳提取溶劑為二氯甲烷。從圖2可以看出，隨著提取溶劑增加，提取出的目標(biāo)物量逐漸增加。提取溶劑超過(guò)50 mL時(shí)達(dá)到穩(wěn)定，因此提取溶劑體積確定為50 mL。從機(jī)械振蕩和超聲振蕩兩種提取方式的提取效率比較(圖3)可見(jiàn)，采用超聲振蕩的提取效果明顯高于所采用的的機(jī)械振蕩。因此，提取方式為超聲振蕩。從圖4可看出，對(duì)大部分目標(biāo)物而言，提取時(shí)間對(duì)目標(biāo)物的萃取效率影響不顯著，綜合考慮各目標(biāo)物的提取效率，本研究選擇的最佳提取時(shí)間為10 min。

圖3 提取方式Fig.3 Extraction method

圖4 靜態(tài)提取時(shí)間Fig.4 Static time

2.2 衍生化條件

2.2.1 衍生化前后對(duì)比 直接將所配置的西柏三烯二醇標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行GC-MS分析(質(zhì)譜掃描方式為全掃模式)，圖5～6分別為α-西柏三烯二醇和β-西柏三烯二醇標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000 μg/mL)的色譜圖。對(duì)圖5～6色譜圖的每一個(gè)峰進(jìn)行質(zhì)譜檢索，在圖5中，檢測(cè)到36.03，36.40，39.43 min所對(duì)應(yīng)的色譜峰的物質(zhì)為西柏三烯二醇(匹配度為40 %左右)。在圖6中，檢測(cè)到36.01 min所對(duì)應(yīng)的色譜峰的物質(zhì)為西柏三烯二醇(匹配度為39.66 %)。其余色譜峰均視為雜質(zhì)峰(檢索出物質(zhì)的匹配度都在20 %以下)。這可能是由于西柏三烯二醇沸點(diǎn)高(431.8 ℃)，而在色譜圖上出現(xiàn)了多時(shí)間保留。根據(jù)文獻(xiàn)[10,15]，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行衍生化反應(yīng)，然后將衍生化后的溶液進(jìn)行GC-MS分析(質(zhì)譜掃描方式為全掃模式)，得出衍生化后α-西柏三烯二醇和β-西柏三烯二醇的色譜圖(圖7)。

從上述色譜圖中可以看出，衍生過(guò)后，色譜圖比較純凈，僅保留所要檢測(cè)的3種物質(zhì)，解決了衍生前出現(xiàn)的多時(shí)間保留問(wèn)題。衍生化反應(yīng)后標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖出峰單一，且衍生后的α-西柏三烯二醇和β-西柏三烯二醇彼此間分離較好，因此，本研究采用樣品進(jìn)柱前進(jìn)行衍生化處理。

康師傅控股有限公司執(zhí)行長(zhǎng)韋俊賢在采訪中誠(chéng)摯地說(shuō)：“康師傅本身就是改革開(kāi)放的成果，也是改革開(kāi)放的見(jiàn)證者、親歷者和受益者。沒(méi)有改革開(kāi)放，就沒(méi)有康師傅?！?/p>

圖5 衍生化前α-西柏三烯二醇標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖Fig.5 Before derivatization α-Cembranoids

圖6 衍生化前β-西柏三烯二醇標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖Fig.6 Before derivatizationβ-Cembranoids standard chromatogramtandard chromatogram

2.2.2 衍生化條件優(yōu)化 衍生化反應(yīng)主要受衍生化試劑、衍生化溶劑、衍生化溫度、衍生化試劑與溶劑的比例、衍生化時(shí)間等因素的影響[16]。本研究對(duì)以上各因素分別進(jìn)行探討。從采用的BSTFA、MSTFA和TMSI3種衍生化試劑的效果看(圖8)，從中可以看出，3種衍生化試劑對(duì)西柏三烯二醇的衍生化效果差異不大，從經(jīng)濟(jì)角度出發(fā)，考慮使用BSTFA或者TMSI，但目前商品化的N，O-雙( 三甲硅基) 三氟乙酰胺( BSTFA )(其中加入了1 %的催化劑TMCS)的使用最廣泛[20]，因此，選用BSTFA作為衍生化試劑。

衍生化介質(zhì)是衍生化反應(yīng)的外部環(huán)境，衍生化介質(zhì)的選擇至關(guān)重要，結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道[17-19]，本研究選用二甲基甲酰胺DMF，吡啶，四氫呋喃THF，二氯甲烷作為介質(zhì)進(jìn)行探討，從圖9中可以看出，不同的衍生化介質(zhì)對(duì)衍生化效果影響較大。根據(jù)4種介質(zhì)的極性，選用吡啶作為衍生化應(yīng)介質(zhì)。

衍生化試劑與衍生化介質(zhì)比例可以提高衍生化反應(yīng)的效率，本研究固定衍生化介質(zhì)與衍生化試劑的總體積為1000 μl，改變兩者的量得到不同衍生化介質(zhì)與衍生化試劑的比例?？疾炝?∶1，3∶2，1∶1，2∶3和1∶3(v/v)對(duì)衍生化反應(yīng)的影響，從圖10可知，當(dāng)衍生化介質(zhì)與衍生化試劑的比例為3∶2時(shí)，衍生化效果最好。因此，選擇衍生化介質(zhì)與衍生化試劑比例為3∶2。

圖7 衍生化后西柏三烯二醇標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖Fig.7 After derivatization Cembranoid standard chromatogram

圖8 衍生化試劑Fig.8 Derivatization reagent

圖9 衍生化介質(zhì)Fig.9 Derivatization media

圖10 衍生化試劑與介質(zhì)比例Fig.10 Ratios of derivatization medium to derivatization reagent

本研究分別選10、20、30、45、60和75 ℃衍生化溫度進(jìn)行分析，從圖11可看出，溫度的影響不明顯，綜合考慮兩種目標(biāo)物的衍生化效果，本研究選擇的最佳衍生化溫度為20 ℃。溫度高低對(duì)該衍生化反應(yīng)的影響并不是非常明顯，這可能與所用的衍生化試劑里加了1 %的催化劑三甲基氯硅烷有關(guān)。

一般情況下，衍生化時(shí)間越長(zhǎng)衍生化進(jìn)行越完全，衍生化效果也就越好。本研究選擇20、40、60、80、100和120 min對(duì)衍生化反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行探討，從圖12可看出，當(dāng)衍生化反應(yīng)時(shí)間為100 min時(shí)，衍生化反應(yīng)基本完成，故選擇的衍生化反應(yīng)時(shí)間為100 min。

2.2.3 方法評(píng)估 ①方法的線性范圍、檢出限(LOD)和定量限(LOQ)。定量分析時(shí)所用的質(zhì)譜掃描模式為SIM模式，圖7為標(biāo)品的色譜圖，其中15.83，30.62，35.08 min所對(duì)應(yīng)的色譜峰的物質(zhì)分別為內(nèi)標(biāo)正十九烷，衍生后的α-西柏三烯二醇和衍生后的β-西柏三烯二醇。對(duì)色譜圖上的目標(biāo)峰進(jìn)行積分，以目標(biāo)分析物峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比(A/AIS)與被測(cè)目標(biāo)物濃度(C)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，以S/N分別等于3和10時(shí)計(jì)算檢出限(LOD)和定量限(LOQ)，結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可以看出，目標(biāo)成分α-西柏三烯二醇和β-西柏三烯二醇的線性關(guān)系良好，線性范圍分別為1.0～270.0和1～160 μg/mL，相關(guān)系數(shù)(R)分別為0.9991和0.9996(相關(guān)性好，可用于準(zhǔn)確定量分析)。目標(biāo)物的LOD和LOQ分別為0.25和0.2 μg/mL以及0.825和 0.66 μg/mL。②方法的準(zhǔn)確性和精密度。由于煙草樣品基質(zhì)的復(fù)雜性，為了驗(yàn)證本精密度，分別對(duì)烤煙、香料煙、白肋煙樣品做了3個(gè)濃度的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)測(cè)定3次。精密度測(cè)定每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)測(cè)定5次。結(jié)果如表3所示，2種目標(biāo)分析物的回收率分別在95.10 %～99.80 % 和92.50 %～98.60 %之間。RSD(n=5)則分別為2.19 %～4.96 %和2.75 %～4.09 %。以上結(jié)果表明本方法準(zhǔn)確性好，精密度高，滿足復(fù)雜煙草基質(zhì)中西柏三烯醇類物質(zhì)的準(zhǔn)確定量檢測(cè)要求?？捎糜跓煵輼悠分形靼厝┒己康臏y(cè)定。

圖11 衍生化溫度Fig.11 Derivatization temperatures

圖12 衍生化時(shí)間Fig.12 Derivatization time

表2 方法的線性范圍和檢測(cè)限

表3 方法的回收率和精密度

表4 煙草樣品中西柏三烯二醇含量測(cè)試結(jié)果

2.2.4 樣品測(cè)定 采用本研究所建立的方法對(duì)煙草樣品中兩種西柏三烯二醇含量進(jìn)行測(cè)定，從實(shí)際測(cè)量中煙草樣品的色譜圖(圖13)可以看出，其中 15.83，30.62，35.08 min所對(duì)應(yīng)的色譜峰的物質(zhì)分別為內(nèi)標(biāo)正十九烷，衍生后的α-西柏三烯二醇和衍生后的β-西柏三烯二醇。通過(guò)計(jì)算目標(biāo)物峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，算出各煙草樣品中α-西柏三烯二醇和β-西柏三烯二醇的含量，從表4中可見(jiàn)，不同產(chǎn)地?zé)熑~中2種西柏三烯二醇的含量差異較大。

3 討 論

氣相色譜中應(yīng)用化學(xué)衍生反應(yīng)是為了增加樣品的揮發(fā)度或提高檢測(cè)靈敏度。進(jìn)行化學(xué)衍生反應(yīng)應(yīng)該滿足如下要求：對(duì)反應(yīng)條件要求不苛刻，且能迅速、定量地進(jìn)行；對(duì)樣品中的某個(gè)組份只生成一種衍生物，反應(yīng)副產(chǎn)物及過(guò)量的衍生試劑不干擾被測(cè)樣品的分離和檢測(cè)；化學(xué)衍生試劑方便易得，通用性好[18]。

圖13 煙草樣品西柏三烯醇色譜圖Fig.13 Chromatogram of Cembranoids in tobacco samples

針對(duì)目標(biāo)物質(zhì)，本研究所選擇的4種介質(zhì)，二甲基甲酰胺和吡啶的衍生化效果要明顯好于二氯甲烷和四氫呋喃，但從四種溶劑的極性DMF6.4、吡啶5.3、THF4.2和二氯甲烷3.4可以看出，二甲基甲酰胺的極性大，由于本研究采用的毛細(xì)管柱為DB-5 MS柱為弱極性柱，從防止柱流失角度選擇吡啶為衍生化介質(zhì)。

三甲基硅烷是GC分析最常用的通用硅烷化基團(tuán)。引入此基團(tuán)可改善色譜分離，并使得特殊檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用成為可能。因此，通過(guò)試驗(yàn)選用雙( 三甲硅基) 三氟乙酰胺( BSTFA )為衍生化試劑，引入硅烷化基團(tuán)，可實(shí)現(xiàn)衍生化，提高目標(biāo)物的檢測(cè)精度。

衍生化溫度是影響衍生化反應(yīng)的一個(gè)重要因素。衍生化溫度過(guò)低，衍生化反應(yīng)速率太慢，反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。衍生化溫度過(guò)高，可能會(huì)引起衍生化試劑或被衍生化物質(zhì)的分解。本研究通過(guò)實(shí)驗(yàn)，確定了最佳衍生化溫度。

本研究通過(guò)對(duì)衍生前后西柏三烯二醇色譜圖的對(duì)比，強(qiáng)調(diào)了用GC-MS檢測(cè)西柏三烯二醇時(shí)進(jìn)行柱前衍生化反應(yīng)的必要性。分別對(duì)衍生化試劑、衍生化溶劑、衍生化溫度、衍生化試劑與溶劑的比例、衍生化時(shí)間這幾個(gè)條件進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果確定衍生化條件為：20 ℃下加入吡啶：BSTFA體積比為3∶2(v/v)，反應(yīng)時(shí)間為100 min最佳。

4 結(jié) 論

本研究采用柱前衍生化的方法測(cè)定煙草及煙草制品中西柏三烯二醇，該方法所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)性好，檢出限遠(yuǎn)低于樣品的最低濃度，方法的重復(fù)性和精密度均良好，且操作簡(jiǎn)單，耗時(shí)少，可應(yīng)用于煙草樣品的分析檢測(cè)。

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AnalysisofCembranoidsinTobaccobyGC-MS-SIMwithPre-columnDerivatization

LI Xiao-lan1，HUANG Shan-song1，JIA Hai-jiang1，YANG Jun2，QIAN Xiao-bo2，XU Xue-qin1*

(1.China Tobacco Guangxi Industrial Co.,Ltd, Guangxi Nanning 530001, China;2.Research Center of Tobacco and Health, University of Science and Technology of China,Anhui Hefei 230051, China)

【Objective】To provide a reference for the study of relationship between cembranoids in tobacco and the quality of tobacco, the determination method of analysis of cembranoids in tobacco had been studied.【Method】This study established a GC-MS-SIM method for the determination of two kinds of tobacco cembranoids by derivatization with a double (3-methyl silicon alkyl) 3-fluoroacetamide (BSTFA).The relationship between the quality of tobacco and the oil quality of tobacco was studied. The extraction solvent, its volume and extraction time as well as the derivatization conditions were investigated.【Result】The best extraction could be achieved with dichloromethane as solvent, through 10 mins ultrasonic treatment. The optimum derivatization conditions would be 100 minutes reaction with the mixed solution of pyridine and 3-fluoroacetamide (BSTFA) in the volume ratio 3∶2 under the temperature of 20 centigrade. Using the method, the content of cembranoids in different origin of tobacco was analyzed, the results showed that the content had significant difference in different tobacco aroma.【Conclusion】Cembranoids quantitative analysis were then carried out for samples from different areas with different oil content, and the relevance between the content of tobacco leaf oil and cembranoids were also studied, revealing an obvious positive correlation. The method is reproducible, the precision is good, and the operation is simple and time consuming；At the same time, the method was used to quantitatively detect the cembranoids in different tobacco leaves.

Cembranoids；Derivative process；GC-MS SIM；Tobacco

1001-4829(2017)12-2698-07

10.16213/j.cnki.scjas.2017.12.014

2017-06-07

廣西壯族自治區(qū)工信委科技攻關(guān)項(xiàng)目(201731616141 7)

李小蘭(1971-)，女，廣西桂平人，高級(jí)工程師，主要從事產(chǎn)品質(zhì)量分析及研究工作，E-mail:173337153@qq.com；*為通訊作者：徐雪芹，E-mail:xueqin.hg@163.com。

S572

A

(責(zé)任編輯溫國(guó)泉)