一種復方抗菌噴劑抑菌效果的試驗觀察

黃慧穎 高靜賢

一種復方抗菌噴劑抑菌效果的試驗觀察

黃慧穎 高靜賢

目的 觀察復方抗菌噴劑的抑菌效果。方法 分別參考GB15979－2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》附錄C4抑菌性能試驗和《消毒技術規(guī)范（2002年版）》抑菌環(huán)試驗方法，對該復方抗菌噴劑的抑菌效果進行評價。結果 該復方抗菌噴劑對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌率均＞99.9%，該復方抗菌噴劑對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌環(huán)直徑平均值分別為9.01 mm、12.12 mm。結論 該復方抗菌噴劑對革蘭氏陰性菌及革蘭氏陽性菌均具有較強的抑菌效果。

復方抗菌噴劑；殼聚糖季銨鹽；有機硅季銨鹽；抑菌效果

復方抗菌噴劑是以殼聚糖季銨鹽和有機硅季銨鹽作為主要成分的外用液體噴劑。該產品具有促進創(chuàng)面愈合，抑菌預防創(chuàng)面感染的功效，為了解該產品的抑菌作用，文章采用兩種不同的檢測方法對該產品進行了抑菌效果的檢測。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗樣品 試驗用復方抗菌噴劑主要成分為殼聚糖季銨鹽和有機硅季銨鹽，產品性狀為液體。

1.1.2 試驗菌株 大腸桿菌（8099），金黃色葡萄球菌（ATCC6538）。

1.1.3 培養(yǎng)基及試劑 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、0.03 mol/L 磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）、定性濾紙片（將濾紙片制成直徑為5 mm的圓片，經壓力蒸汽滅菌處理后，烘干備用）。

1.1.4 主要儀器 生物安全柜、培養(yǎng)箱、游標卡尺。

1.2 試驗方法

抑菌性能試驗與抑菌環(huán)試驗分別參考GB15979－2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》[1]附錄C4和《消毒技術規(guī)范（2002年版）》[2]2.1.8.2的方法進行。

1.2.1 菌液制備 取大腸桿菌（8099）、金黃色葡萄球菌（ATCC6538）的新鮮培養(yǎng)物，用5 ml 0.03 mol/L 磷酸鹽緩沖液（以下簡稱PBS） 洗下菌苔，使菌懸浮均勻后用PBS稀釋配制試驗濃度菌懸液，備用。

1.2.2 抑菌性能試驗 取上述菌懸液，分別在4管被試樣液（5 ml）和4管對照樣液（與被試樣品同質材料，同等大小，但不含抗菌材料，且經滅菌處理）內滴加100 μl上述菌懸液（回收菌數(shù)為1×104cfu/ ml～9×104cfu/ ml），混勻，作用時間分別為2 min、5 min、10 min、20 min。作用至規(guī)定時間后，分別將被試樣液（0.5 ml）及對照樣液（0.5 ml）投入到含有PBS的試管內，充分混勻，作適當稀釋，然后取其中2～3個稀釋度，分別吸取0.5 ml，置于兩個平皿，用涼至40～45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15 ml作傾注，轉動平皿使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉平板。35℃培養(yǎng)48 h，作活菌菌落計數(shù)。試驗重復3次，按公式計算抑菌率（計算公式：X = （A－B）/ A × 100%，X：抑菌率（%），A：對照樣品平均菌落數(shù)，B：被試樣品平均菌落數(shù)。）如抑菌率≥50%～90%，則產品有抑菌作用，如抑菌率≥90%，則產品有較強抑菌作用。

1.2.3 抑菌環(huán)試驗 （1）抑菌片的制備：取無菌并干燥的濾紙片。每片滴加20 μl樣液，然后將濾紙片平放于清潔的無菌平皿內，開蓋置培養(yǎng)箱（37℃） 中烤干，或置室溫下自然干燥后備用。（2）陰性對照樣片的制備：取無菌干燥濾紙片，每片滴加無菌蒸餾水20 μl，干燥后備用。（3）試驗菌的接種：用無菌棉拭子蘸取濃度為 5×105cfu/ml～5×106cfu/ml試驗菌懸液，在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板表面均勻涂抹3次。每涂抹1次，平板應轉動 60°，最后將棉拭子繞平板邊緣涂抹一周。蓋好平皿，置室溫干燥 5min。（4）抑菌劑樣片貼放：每次試驗貼放1個染菌平板，每個染菌平板貼放4片試驗樣片，1片陰性對照樣片，共5片。用無菌鑷子取樣片貼放于平板表面。各樣片中心之間相距25 mm以上，與平板的周緣相距15 mm以上。貼放好后，用無菌鑷子輕壓樣片，使其緊貼于平板表面。蓋好平皿，放置于37℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)16～18 h觀察結果。用游標卡尺測量抑菌環(huán)的直徑 （包括貼片） 并記錄。試驗重復3次。（5）抑菌作用的判斷：抑菌環(huán)直徑大于7 mm者，判為有抑菌作用。

表1 復方抗菌噴劑對大腸桿菌的抑菌率

表2 復方抗菌噴劑對金黃色葡萄球菌的抑菌率

表3 復方抗菌噴劑對大腸桿菌的抑菌環(huán)直徑

表4 復方抗菌噴劑對金黃色葡萄球菌的抑菌環(huán)直徑

2 結果

2.1 抑菌性能試驗結果

試驗結果表明，復方抗菌噴劑原液分別作用2 min、5 min、10 min、20 min，對大腸桿菌及金黃色葡萄球菌抑菌率均＞99.9%（表1、表2），該產品對大腸桿菌及金黃色葡萄球菌具有較強的抑菌作用。

2.2 抑菌環(huán)試驗結果

經測量，復方抗菌噴劑對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌環(huán)直徑均大于7 mm（表3、表4），抑菌環(huán)直徑平均值分別為9.01 mm，12.12 mm。結果表明，該復方抗菌噴劑對大腸桿菌及金黃色葡萄球菌具有良好的抑菌作用。

3 討論

近年來，殼聚糖季銨鹽及有機硅季銨鹽已被越來越廣泛的應用到醫(yī)療領域[3-4]，本文研究的復方抗菌噴劑中主要的抗菌成分即為殼聚糖季銨鹽和有機硅季銨鹽。殼聚糖是甲殼素的脫乙?；a物，是一種白色無定型、半透明、略有珍珠光澤的固體。殼聚糖由于原材料不同和制備方法的差異，導致相對分子質量也從數(shù)十萬到數(shù)百萬不等。殼聚糖只能溶解于一些稀的無機酸和大多數(shù)有機酸中，不能直接溶于水中[5]，這在很大程度上限制了殼聚糖的應用。殼聚糖可經過季銨化修飾成為殼聚糖季銨鹽[6]。殼聚糖季銨鹽是聚陽離子化合物，具有良好的水溶性、絮凝性、生物相溶性、吸濕保濕性和抗菌性等特點[7]。有機硅季銨鹽是一類新型陽離子表面活性劑，被廣泛應用于日化及紡織品整理中，表現(xiàn)出很好的抑菌作用[8]。以殼聚糖季銨鹽及有機硅季銨鹽作為主要抗菌成分的復方抗菌噴劑經GB15979－2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》中抑菌性能試驗方法和《消毒技術規(guī)范（2002 年版）》中抑菌環(huán)試驗方法檢測，試驗結果均顯示出該產品對以大腸桿菌為代表的革蘭氏陰性菌和以金黃色葡萄球菌為代表的革蘭氏陽性菌均具有很好的抑菌性能。

[1]中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局. GB15979－2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準[S]. 2002.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部. 消毒技術規(guī)范[S]. 2002.

[3]馮小強，李小芳，楊聲. 殼聚糖季銨鹽的抗菌抑菌活性及其在醫(yī)藥領域的應用[J]. 中國食品工業(yè)，2011（6）：40-42.

[4]王楠，廉云敏，高嵐，等. 有機硅季銨鹽浸泡純鈦對白假絲酵母菌生長的抑制作用[J].國際口腔醫(yī)學雜志，2017，44（2）：175-178.

[5]蔣挺大. 殼聚糖[M]. 北京：化學工業(yè)出版社，2001：9-12.

[6]王浩. 殼聚糖的改性研究進展及其應用[J]. 成都紡織高等?？茖W校學報，2017，34（1）：187-194.

[7]鐘婧，洪艷，陳勇. 殼聚糖季銨鹽的最新研究進展[J]. 中國組織工程研究與臨床康復，2008，12（6）：1115-1118.

[8]蘇曉明，鐘宏，余新陽. 有機硅季銨鹽的合成方法及應用[J]. 成都紡織高等?？茖W校學報，2008，25（3）：9-11.

Investigation on the Bacteriostatic Effect of Compound Antibacterial Spray

HUANG Huiying GAO Jingxian Biosafety Evaluation Center, Jiangsu Institute of Medical Device Testing, Nanjing Jiangsu 210019, China

Objective To study the bacteriostatic effect of the compound antibacterial spray. Methods Thehygienic standard for disposable sanitary productsGB15979-2002 bacteriostasis test of appendix C 4 andtechnical specification for disinfection (2002 Edition)bacteriostatic ring test were used to investigate bacteriostatic effect of the compound antibacterial spray. Results The bacteriostatic rates of compound antibacterial spray to Escherichia coli and Staphylococcus aureus were more than 99.9%. The diameter of bacteriostatic rings of Escherichia coli and Staphylococcusaureus were 9.01 mm and 12.12 mm, respectively. Conclusion Compound antibacterial spray has strong bacteriostatic effect on Gram negative bacteria and gram positive bacteria.

江蘇省醫(yī)療器械檢驗所生物安全評價中心，江蘇 南京210019

compound antibacterial spray; chitosan quaternary ammonium salt; organic silicon quaternary ammonium salt; bacteriostatic effect

R187

A

1674-9316（2017）27-0148-03

10.3969/j.issn.1674-9316.2017.27.079