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    MTHFR C677T 基因多態(tài)性在佳木斯地區(qū)健康人及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者中的分布頻率①

    2018-01-04 00:59:01沈慶明荊洪英
    黑龍江醫(yī)藥科學(xué) 2017年6期
    關(guān)鍵詞:佳木斯健康人復(fù)發(fā)性

    方 芳,方 舟,沈慶明,荊洪英

    (佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科,黑龍江 佳木斯 154003)

    MTHFR C677T 基因多態(tài)性在佳木斯地區(qū)健康人及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者中的分布頻率①

    方 芳,方 舟,沈慶明,荊洪英

    (佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科,黑龍江 佳木斯 154003)

    目的:探究MTHFR C677T基因在佳木斯地區(qū)健康人和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的基因型及等位基因的分布頻率。方法:采用熒光染色原位雜交方法檢測(cè)健康人與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的MTHFR C677T基因型。結(jié)果:健康人CC型、CT型、TT型分別為11.9%、46.6%、41.5%,C等位基因和T等位基因分別為35.2%和64.8%,流產(chǎn)患者CC型、CT型、TT型分別為24.3%、36.8%、38.9%,C等位基因和T等位基因分別為42.7%和57.3%。結(jié)論:佳木斯地區(qū)健康人和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的MTHFR C677T基因型及等位基因的分布頻率有顯著性差異。

    MTHFR C677T;熒光染色原位雜交;復(fù)發(fā)性流產(chǎn);等位基因

    復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(recurrent pregnancy loss,RPL)是指妊娠20周之前與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生≥3次的自然流產(chǎn),且不存在染色體、解剖、內(nèi)分泌和自身免疫功能異常以及生殖道感染等病因,發(fā)病率約為1%~3%[1]。這種情況嚴(yán)重影響著孕婦。本文通過(guò)對(duì)居住在佳木斯及其周邊婦女的MTHFR(677C>T)多態(tài)性分布情況,研究復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與MTHFR C677T基因多態(tài)性的關(guān)系,為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)疾病的基因診斷和基因?qū)蛩幬镏委熖剿鞒鲆粭l新的方法與手段。

    1 資料與方法

    1.1 研究對(duì)象

    健康人:為我院育齡女性健康志愿者118例,無(wú)流產(chǎn)史及不良病史。流產(chǎn)患者:自2014-12~2015-10在我院計(jì)劃生育門(mén)診就診的患者144例,年齡26~39歲。入選試驗(yàn)對(duì)象需使用EDTA真空采血管采集外周靜脈血5mL,用來(lái)檢測(cè)MTHFR C677T基因型。

    1.2 方法

    本文采用的方法是熒光染色原位雜交方法。(1)富集白細(xì)胞:取200μL新鮮全血加入1100μL氯化銨溶液中。顛倒幾次混勻后室溫放置5min。然后離心機(jī)3000r/min (700g) 離心5min,用移液槍吸出上清液,保留管底白細(xì)胞。(2)裂解保存:在富集了白細(xì)胞的管中加入50μL耀金保,用槍吹吸或震蕩試管混勻。(3)加樣:取1.5μL直接加入待測(cè)基因?qū)?yīng)的耀金分試劑中,上機(jī)檢測(cè)。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn),P<0.05為具有顯著性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    MTHFR C677T基因型和等位基因分布情況,見(jiàn)表1。以下數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS 17.0軟件進(jìn)行處理,健康人與流產(chǎn)患者CC/CT/TT三種基因型經(jīng)χ2檢驗(yàn),(χ2=6.992,P<0.05),C/T等位基因經(jīng)χ2檢驗(yàn)(χ2=3.090,P>0.05),流產(chǎn)患者與健康人基因型分布之間的差異有顯著性。

    表1 健康人和流產(chǎn)患者M(jìn)THFR C677T基因型及等位基因頻率分布(%)

    本地區(qū)健康人與報(bào)道健康人CC/CT/TT三種基因型經(jīng)χ2檢驗(yàn)(χ2=79.436,P<0.01),C/T等位基因經(jīng)χ2檢驗(yàn)(χ2=83.351,P<0.01),本地區(qū)健康人與報(bào)道健康人基因型分布及等位基因頻率分布之間的差異有高度顯著性。流產(chǎn)患者與報(bào)道流產(chǎn)患者CC/CT/TT三種基因型經(jīng)χ2檢驗(yàn)(χ2=62.827,P<0.01),C/T等位基因經(jīng)χ2檢驗(yàn)(χ2=9.395,P<0.01),流產(chǎn)患者與報(bào)道流產(chǎn)患者基因型分布及等位基因頻率分布之間的差異有高度顯著性。

    從上述結(jié)果可以看出:本地區(qū)人與報(bào)道的基因型分布及等位基因頻率分布之間的差異具有高度顯著性,說(shuō)明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生存在地域性差異。本地區(qū)T等位基因所占比例為64.8%,說(shuō)明T等位基因在佳木斯東部地區(qū)突變率較高。

    3 討論

    3.1 MTHFR C677T是一個(gè)常見(jiàn)的突變位點(diǎn), Frosst[3]等在1995年首次發(fā)現(xiàn)??煞譃橐吧?CC)、突變雜合型(CT)和突變純合型(TT) 3種。MTHFR C677T位點(diǎn)發(fā)生突變的基因?yàn)榈?77位上的胸腺嘧啶取代了胞嘧啶,造成了丙氨酸被纈氨酸取代,最為顯著的表現(xiàn)為MTHFR酶活性下降,是他們改變了MTHFR的氨基酸結(jié)構(gòu),影響了MTHFR酶的活性,這就使得同型半胱氨酸無(wú)法正常完成向蛋氨酸的轉(zhuǎn)化,造成血中同型半胱氨酸的含量明顯升高[4]。

    3.2 首次報(bào)道佳木斯東部地區(qū)女性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的MTHFR C677T基因分布情況,CC型、CT型、TT型分別為11.9%、46.6%、41.5%,C等位基因和T等位基因分別為35.2%和64.8%,與報(bào)道有顯著性差異,說(shuō)明可能存在地域性差異,說(shuō)明T等位基因在佳木斯東部地區(qū)突變率較高。

    3.3 本地區(qū)流產(chǎn)患者CC型、CT型、TT型分別為24.3%、36.8%、38.9%,C等位基因和T等位基因分別為42.7%和57.3%;報(bào)道流產(chǎn)患者CC型、CT型、TT型分別為30.8%、43.4%、25.8%,C等位基因和T等位基因分別為52.5%和47.5%。經(jīng)χ2檢驗(yàn),流產(chǎn)患者與報(bào)道流產(chǎn)患者基因型分布及等位基因頻率分布之間的差異有高度顯著性。

    3.4 隨著分子生物學(xué)和精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展,疾病與一些藥物相關(guān)的基因多態(tài)性之間的相關(guān)性研究越來(lái)越受關(guān)注[5~9],為臨床疾病的診斷與治療提供了依據(jù)。本文通過(guò)檢測(cè)MTHFR C677T堿基突變,比較了佳木斯地區(qū)復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者和健康人之間的差異。結(jié)果顯示,佳木斯地區(qū)健康人與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者3種基因型分布及等位基因分布頻率都具有顯著性,但由于檢驗(yàn)數(shù)據(jù)比較少,有待進(jìn)一步探討本地區(qū)MTHFR C677T與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)之間的關(guān)系。

    [1]Strirrat GM. Recurrent misscarriage.Ⅱ:clinical associations,causes and management[J].Lancet,1990,336(8717):728-733

    [2]孫玲玲,方芳,荊洪英,等.MTHFR C677T基因多態(tài)性與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)性的Meta分析[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2015,38(6):52-55

    [3]Frosst P,Blom HJ,Milos R, et al. A candidate genetic risk factor for vascular disease:a common mutation in methylenetetrahydrofolate[J]. N-at Genet,1995,10(2):111-113

    [4]Perales D,Martinez de J,Villarreal LE,et al. Folic acid levels homocysteine and polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase enzyme (MTHFR)in patients with preeclampsia and eclampsia[J]. Gineco Lobstet Mex,2001,23(69):6-11

    [5]左璐,方芳,楊軍,等.佳木斯地區(qū)健康人群與高血壓患者CYP3A4*1G基因多態(tài)性分析[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2015,38(1):7-9

    [6]杜美霖,方洪壯,張?zhí)煊ⅲ?ACE基因多態(tài)性在佳木斯正常人高血壓患者中的分布[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2015,38(3):161

    [7]田寅,太史靖華,國(guó)玉芝,等.CYP1B1SNPrs1056827,rs1056836基因多態(tài)性與乳腺癌關(guān)聯(lián)研究頻率[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2015,37(5):1-2

    [8]荊洪英,董立華,谷繼卜,等.癲癇患者CYP2D6*10基因多態(tài)性分析[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2012,35(5):3-4

    [9]王歆,方舟,方芳,等.糖尿病患者IRS-1和MTHFR基因多態(tài)性分析[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2015,38(6):46-47

    佳木斯大學(xué)科學(xué)技術(shù)面上項(xiàng)目,編號(hào):13Z1201549。

    方芳(1979~)女,黑龍江佳木斯人,碩士,主管藥師。

    荊洪英(1958~)女,黑龍江佳木斯人,學(xué)士,主任藥師,碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:wjinghongying@126.com。

    R714.21

    A

    1008-0104(2017)06-0054-02

    2017-03-16)

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