金海燕 張建奇
摘 要:本文采用高校液相測(cè)定了白芷藥材中歐前胡素和異歐前胡素的含量,固定相為:安捷倫Cl8(4.6mm×250mm,5um),以乙腈-甲醇-水(30∶35∶35)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)為304nm;異歐前胡素在5~50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系;歐前胡素在5~50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。異歐前胡素和歐前胡素的平均回收率分別為99.5%、99.6%,RSD為0.87%(n=6)、0.89%(n=6);此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好,可用于白芷藥材中異歐前胡素和歐前胡素的含量測(cè)定。
關(guān)鍵詞:白芷藥材;異歐前胡素;歐前胡素
白芷具有祛風(fēng)濕,活血排膿,生肌止痛的功效?!度杖A子本草》記載:"治目赤胬肉,及補(bǔ)胎漏滑落,破宿血,補(bǔ)新血,乳癰、發(fā)背、瘰疬、腸風(fēng)、痔瘺,排膿,瘡痍、疥癬,止痛生肌,去面皯疵瘢。白芷常用于頭痛、牙痛、鼻淵、癰疽瘡瘍、皮膚瘙癢等。白芷具有鎮(zhèn)痛、抗菌、平喘、抗腫瘤、保肝、興奮運(yùn)動(dòng)和呼吸中樞、光毒性等方面的藥理作用[1-4]。本文采用高校液相測(cè)定了白芷藥材中歐前胡素和異歐前胡素的含量。
1 儀器與試藥
LC1620A高效液相色譜儀(河南鄭州南北儀器設(shè)備有限公司);Milli-Q Direct水純化系統(tǒng)(上海力晶科學(xué)儀器有限公司);VWR天平防震墊(北京慧龍環(huán)科環(huán)境儀器有限公司);CO-1000型色譜柱溫箱(武漢恒信世紀(jì)科技有限公司);U-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。異歐前胡素和歐前胡素對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。乙腈(北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司)、甲醇(北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司)、醋酸鈉(北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司)、三乙胺(北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司)、磷酸(濟(jì)南圣和化工有限公司)。
2 含量測(cè)定
2.1 色譜條件:依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果,確定色譜條件如下[5-6]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為(4.6mm×250mm,5μm);流動(dòng)相為乙腈-甲醇-水(30∶35∶35);檢測(cè)波長(zhǎng)為304nm;流速1.0mL·min-1;柱溫:30℃。理論板數(shù)按歐前胡素峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。
2.2 供試品溶液的制備
取白芷藥材適量,粉碎成細(xì)粉,精密稱取,置錐形瓶中,加甲醇適量,超聲處理三十分鐘,放置至室溫,過濾,將濾液轉(zhuǎn)移至50毫升容量瓶?jī)?nèi),加甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,即得。
2.3 對(duì)照品溶液的制備
分別精密稱取歐前胡素和異歐前胡素對(duì)照品2mg、2mg,置100mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得。
2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
制備濃度為5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、30μg·mL-1、40μg·mL-1、50μg·mL-1的異歐前胡素對(duì)照品溶液,制備濃度為5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、30μg·mL-1、40μg·mL-1、50μg·mL-1的歐前胡素對(duì)照品溶液。分別按異歐前胡素、歐前胡素的測(cè)定參數(shù)繼續(xù)測(cè)定。以吸光度為橫坐標(biāo),濃度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明,異歐前胡素在5~50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系;歐前胡素在5~50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2.5 精密度試驗(yàn)
依照2.3項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液,分別精密吸取異歐前胡素和歐前胡素對(duì)照品溶液重復(fù)測(cè)定6次,測(cè)定峰面積積分值,對(duì)照品峰面積積分值的RSD分別為0.66%和0.71%。結(jié)果表明,本實(shí)驗(yàn)精密度良好。
2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)
分別稱取同批白芷藥材樣品6份,分別依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品,按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定含量,并計(jì)算樣品的RSD值,RSD值為0.77%,0.78%,結(jié)果表明,此含量測(cè)定方法的重現(xiàn)性良好。
2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)
依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液,分別在0,2,4小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定,供試品異歐前胡素和歐前胡素峰面積的RSD分別為0.77%和0.79%。結(jié)果表明異歐前胡素和歐前胡素至少在4h內(nèi)穩(wěn)定。
2.8 回收率試驗(yàn)
采用加樣回收試驗(yàn),取已知含量的同一批供試品各6份,分精密添加一定量的異歐前胡素和歐前胡素對(duì)照品,按供試品制備所述方法制備供試品溶液,測(cè)定含量,計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率分別為99.5%和99.6%,RSD分別為0.87%和0.89%。
2.9 樣品含量測(cè)定
依照上述含量測(cè)定方法,測(cè)定五批白芷藥材樣品中異歐前胡素和歐前胡素的含量。
3 討論
分別考察乙腈-甲醇-水(30∶35∶35),乙腈-0.05%磷酸(14:86),甲醇-乙腈-水(40:40:20),甲醇-水(80:20,含0.1%三乙胺)不同比例的流動(dòng)相,結(jié)果以乙腈-甲醇-水(30∶35∶35)為流動(dòng)相,供試品各峰分離效果最好,故選用乙腈-甲醇-水(30∶35∶35)為流動(dòng)相。白芷藥材中異歐前胡素和歐前胡素的含量為不少于0.7mg/g和1.1mg/g。
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