白芷中2個(gè)主要活性成分含量測(cè)定

金海燕 張建奇

摘 要：本文采用高校液相測(cè)定了白芷藥材中歐前胡素和異歐前胡素的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），以乙腈-甲醇-水（30∶35∶35）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為304nm；異歐前胡素在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；歐前胡素在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。異歐前胡素和歐前胡素的平均回收率分別為99.5%、99.6%，RSD為0.87%（n=6）、0.89%（n=6）；此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于白芷藥材中異歐前胡素和歐前胡素的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：白芷藥材；異歐前胡素；歐前胡素

白芷具有祛風(fēng)濕，活血排膿，生肌止痛的功效?！度杖A子本草》記載："治目赤胬肉，及補(bǔ)胎漏滑落，破宿血，補(bǔ)新血，乳癰、發(fā)背、瘰疬、腸風(fēng)、痔瘺，排膿，瘡痍、疥癬，止痛生肌，去面皯疵瘢。白芷常用于頭痛、牙痛、鼻淵、癰疽瘡瘍、皮膚瘙癢等。白芷具有鎮(zhèn)痛、抗菌、平喘、抗腫瘤、保肝、興奮運(yùn)動(dòng)和呼吸中樞、光毒性等方面的藥理作用[1-4]。本文采用高校液相測(cè)定了白芷藥材中歐前胡素和異歐前胡素的含量。

1 儀器與試藥

LC1620A高效液相色譜儀（河南鄭州南北儀器設(shè)備有限公司）；Milli-Q Direct水純化系統(tǒng)（上海力晶科學(xué)儀器有限公司）；VWR天平防震墊（北京慧龍環(huán)科環(huán)境儀器有限公司）；CO-1000型色譜柱溫箱（武漢恒信世紀(jì)科技有限公司）；U-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。異歐前胡素和歐前胡素對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。乙腈（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、甲醇（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、醋酸鈉（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、三乙胺（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、磷酸（濟(jì)南圣和化工有限公司）。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[5-6]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈-甲醇-水（30∶35∶35）；檢測(cè)波長(zhǎng)為304nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃。理論板數(shù)按歐前胡素峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取白芷藥材適量，粉碎成細(xì)粉，精密稱取，置錐形瓶中，加甲醇適量，超聲處理三十分鐘，放置至室溫，過濾，將濾液轉(zhuǎn)移至50毫升容量瓶?jī)?nèi)，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取歐前胡素和異歐前胡素對(duì)照品2mg、2mg，置100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、30μg·mL-1、40μg·mL-1、50μg·mL-1的異歐前胡素對(duì)照品溶液，制備濃度為5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、30μg·mL-1、40μg·mL-1、50μg·mL-1的歐前胡素對(duì)照品溶液。分別按異歐前胡素、歐前胡素的測(cè)定參數(shù)繼續(xù)測(cè)定。以吸光度為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，異歐前胡素在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；歐前胡素在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液，分別精密吸取異歐前胡素和歐前胡素對(duì)照品溶液重復(fù)測(cè)定6次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD分別為0.66%和0.71%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱取同批白芷藥材樣品6份，分別依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，RSD值為0.77%，0.78%，結(jié)果表明，此含量測(cè)定方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，供試品異歐前胡素和歐前胡素峰面積的RSD分別為0.77%和0.79%。結(jié)果表明異歐前胡素和歐前胡素至少在4h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，分精密添加一定量的異歐前胡素和歐前胡素對(duì)照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率分別為99.5%和99.6%，RSD分別為0.87%和0.89%。

2.9 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定五批白芷藥材樣品中異歐前胡素和歐前胡素的含量。

3 討論

分別考察乙腈-甲醇-水（30∶35∶35），乙腈-0.05%磷酸（14：86），甲醇-乙腈-水（40：40：20），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-甲醇-水（30∶35∶35）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-甲醇-水（30∶35∶35）為流動(dòng)相。白芷藥材中異歐前胡素和歐前胡素的含量為不少于0.7mg/g和1.1mg/g。

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