基于線粒體多基因串聯(lián)序列的蜆蝶類系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系分析

石慶會(huì)，張桂清，韋中學(xué)，吳 楠，張 嚴(yán)

（1.三明學(xué)院 資源與化工學(xué)院，福建 三明365004；2.福建省資源環(huán)境監(jiān)測(cè)與可持續(xù)經(jīng)營(yíng)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 三明 365004；3.福建省礦山生態(tài)修復(fù)工程技術(shù)研究中心，福建 三明 365004）

基于線粒體多基因串聯(lián)序列的蜆蝶類系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系分析

石慶會(huì)1,2,3，張桂清1，韋中學(xué)1，吳 楠1，張 嚴(yán)1,2,3

（1.三明學(xué)院 資源與化工學(xué)院，福建 三明365004；2.福建省資源環(huán)境監(jiān)測(cè)與可持續(xù)經(jīng)營(yíng)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 三明 365004；3.福建省礦山生態(tài)修復(fù)工程技術(shù)研究中心，福建 三明 365004）

測(cè)定了蜆蝶類兩個(gè)代表種（波蜆蝶、銀紋尾蜆蝶）的線粒體基因 16S rRNA、Cytb、COI、COIII的部分序列。同時(shí)，結(jié)合GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中已公布的其他蝶類 52個(gè)代表種相應(yīng)的基因序列，選取蛾類 2個(gè)代表種作為外類群?；谶@4個(gè)基因的串聯(lián)序列，分別使用鄰接法、最大簡(jiǎn)約法、最大似然法和貝葉斯推論法重新構(gòu)建了蝶類的分子系統(tǒng)樹(shù)，分析了蜆蝶類的系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系。序列分析結(jié)果顯示：經(jīng)比對(duì)處理后串聯(lián)序列共有 4784個(gè)同源位點(diǎn)，其中保守位點(diǎn)2113個(gè)，變異位點(diǎn)2669個(gè)，簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)2149個(gè)；A+T平均含量為 76.8%，具有明顯的AT偏倚性。分子系統(tǒng)樹(shù)表明：蜆蝶類形成一個(gè)單系群，并與灰蝶科形成姊妹群，結(jié)果進(jìn)一步表明蜆蝶類與灰蝶科具有較近的親緣關(guān)系，但能否歸入灰蝶科還有待于進(jìn)一步的論證。

鱗翅目；蜆蝶科；線粒體基因；系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系

蜆蝶類隸屬于鱗翅目、鳳蝶總科，是小型或中型美麗的蝴蝶。有的性二型很明顯，無(wú)季節(jié)差異。幼蟲(chóng)寬扁，一般多毛，與灰蝶相似。取食某些藥用植物，如千里光及薊類植物。蜆蝶善于模擬其他蝶類的形態(tài)，而且顏色和翅形多種多樣，故不易辨認(rèn)。全世界已知1500多種，中國(guó)有 26種，90%以上的種類分布在新熱帶區(qū)，而古北區(qū)、東洋區(qū)和非洲區(qū)種類較少。目前，有關(guān)蜆蝶系統(tǒng)發(fā)生地位的界定還存在一定的分歧。形態(tài)學(xué)上，由于蜆蝶類與灰蝶類具有相似的形態(tài)特征和生活習(xí)性，具有相同的寄主植物，部分學(xué)者認(rèn)為兩者具有較近的親緣關(guān)系，并將蜆蝶類視為灰蝶科中的一個(gè)亞科[1-3]。然而，其他的形態(tài)學(xué)研究結(jié)果卻認(rèn)為蜆蝶類應(yīng)作為一個(gè)獨(dú)立的科級(jí)分類階元[4]。近二十多年來(lái)，隨著 DNA測(cè)序與序列分析和分子系統(tǒng)學(xué)研究技術(shù)的日益成熟，關(guān)于蜆蝶類系統(tǒng)發(fā)生地位及其與其他蝶類系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系的分子系統(tǒng)學(xué)研究也取得了一定的進(jìn)展。但是，相關(guān)研究結(jié)果之間還存在較大的爭(zhēng)議。主要存在兩種觀點(diǎn)，一種觀點(diǎn)認(rèn)為蜆蝶應(yīng)作為一個(gè)獨(dú)立的科級(jí)分類階元，并與灰蝶科形成姊妹群[5-9]。另一種觀點(diǎn)卻支持將蜆蝶科歸入灰蝶科[10-11]。由此可見(jiàn)，關(guān)于蜆蝶類的系統(tǒng)發(fā)生地位的界定還需要更多分子標(biāo)記和分析方法的介入，并結(jié)合形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)及其他相關(guān)學(xué)科證據(jù)進(jìn)行綜合分析。

線粒體DNA由于具有分子量小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、母系遺傳、幾乎不發(fā)生重組并且進(jìn)化速度快等特點(diǎn)而被廣泛的應(yīng)用于動(dòng)物系統(tǒng)發(fā)育與進(jìn)化、群體遺傳學(xué)以及比較和功能基因組的研究[12-13]。因此，本文擬通過(guò) PCR擴(kuò)增技術(shù)補(bǔ)充測(cè)定蜆蝶類 2個(gè)代表種，即波蜆蝶（Zemeros flegyas）（波蜆蝶屬）和銀紋尾蜆蝶 （Dodona eugenes）（尾蜆蝶屬）的線粒體基因 16S rRNA、Cytb、COI、COIII的部分序列。同時(shí)，結(jié)合已知的其他蝶類主要類群代表種的相應(yīng)基因序列數(shù)據(jù)，選擇適宜的蛾類代表種作為外類群，運(yùn)用多種建樹(shù)方法重建蝶類主要類群的分子系統(tǒng)樹(shù)，進(jìn)一步探討蜆蝶類的系統(tǒng)學(xué)地位，從而為蜆蝶類乃至整個(gè)蝶類的系統(tǒng)學(xué)和分類學(xué)研究提供更多新的分子生物學(xué)證據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本的采集和保存

實(shí)驗(yàn)所用的波蜆蝶和銀紋尾蜆蝶標(biāo)本分別采集于江西九連山 （2014年 8月）和四川青城山（2015年5月）。標(biāo)本采集后參考《中國(guó)蝶類志》[14]進(jìn)行鑒定與登記，再浸泡于無(wú)水乙醇中，帶回實(shí)驗(yàn)室后置于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 基因組DNA的提取與純化

利用動(dòng)物基因組 DNA快速抽取盒 （生工生物工程 （上海）股份有限公司，型號(hào)：B518221-0050）提取基因組 DNA，具體的操作步驟參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.3 PCR擴(kuò)增與測(cè)序

實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增的4種短基因片段（16S rRNA、Cytb、COI、COIII）均采用通用引物進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增反應(yīng)體系共 50 μL， 其中包括 Buffer （含 Mg2+） 溶液 8 μL、 BSA 溶液 8 μL、 dNTP 溶液 1.2 μL、DNA1.5～2.5 μL、 正向引物 1 μL、 反向引物 1 μL、Taq酶 0.8 μL 以及滅菌水 ddH2O 若干 （將體系補(bǔ)充至 50 μL）。

擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)椋?5℃預(yù)變性 5 min；95℃變性 1 min；退火 （溫度根據(jù)引物的不同而變化)）1 min；72℃延伸 1 min 30 s，循環(huán)次數(shù)為 35次；最后 72℃總延伸 10 min。 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物利用1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，并送至生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行純化測(cè)序。

1.4 數(shù)據(jù)的收集與整理

本文從 GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中共下載了其他蝶類 52個(gè)代表種和外類群2個(gè)代表種雕尺蛾（Biston panterinaria）、桑彌尺蛾 （Phthonandria atrilineata）的線粒體基因組全序列，并從中截取4個(gè)基因（16S rRNA、 Cytb、 COI、 COIII） 的相應(yīng)序列進(jìn)行相關(guān)分析（表 1）。

表1 分析類群代表種的序列來(lái)源信息

續(xù)表1

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

1.5.1 序列組成與變異分析

將所測(cè)定的序列在NCBI網(wǎng)站上運(yùn)用BLAST功能進(jìn)行序列比對(duì)，確認(rèn)所測(cè)序列為目的基因序列，并確保序列方向一致。運(yùn)用MEGA 6.0軟件[15]進(jìn)行序列對(duì)位排列、序列組成與進(jìn)化特征分析。

1.5.2 堿基替代飽和度分析

分子數(shù)據(jù)通常要進(jìn)行多重替代（multiple substitution）或出現(xiàn)飽和（saturation）現(xiàn)象，受進(jìn)化噪音影響的可能性較大，從而對(duì)系統(tǒng)發(fā)育分析產(chǎn)生一定的影響，尤其是距離法或最大簡(jiǎn)約法分析。因此，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行堿基替代飽和度分析是必要的。本文運(yùn)用MEGA 6.0[15]軟件分別統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)集中各序列之間的差異度（轉(zhuǎn)換Ts、顛換Tv）和相應(yīng)的遺傳距離（p-distance），并以差異度為縱軸，遺傳距離為橫軸在Excel中作散點(diǎn)圖，判斷其是否達(dá)到飽和。隨著距離的增加，觀察到的差異數(shù)不再增加時(shí)，則認(rèn)為此序列達(dá)到飽和，重建系統(tǒng)發(fā)生時(shí)要進(jìn)行特別加權(quán)[16]。

1.5.3 遺傳距離的計(jì)算

遺傳距離能夠更全面地反映親本品種間的遺傳差異，是衡量品種間若干性狀綜合遺傳差異大小的指標(biāo)。本文運(yùn)用MEGA 6.0軟件15]，將對(duì)比過(guò)的數(shù)據(jù)先按照不同類群進(jìn)行分組，再基于p-distance模型計(jì)算組間平均遺傳距離。

1.6 分子系統(tǒng)樹(shù)的構(gòu)建

分別采用鄰接法（neighbor joining，NJ）、最大簡(jiǎn)約法（maximum parsimony method，MP）、最大似然法（maximum likelihood method，ML）和貝葉斯推論法（Bayesian inference，BI），重新構(gòu)建蝶類主要類群54個(gè)代表種的分子系統(tǒng)樹(shù)。NJ樹(shù)通過(guò)MEGA 6.0軟件[15]構(gòu)建，具體參數(shù)設(shè)置如下：Method：p-distance，Variance Estimation Method：Bootstrap method，No.of Bootstrap Replications：1000，Substitutions to Include：d:Transitions+Transversions，系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)采用內(nèi)部分支檢驗(yàn)和1000次抽樣自展檢驗(yàn)來(lái)評(píng)估各節(jié)點(diǎn)的置信度。MP樹(shù)和ML樹(shù)分別通過(guò)PAUP*4.0b10軟件和RaxML在線構(gòu)建，均采用啟發(fā)式搜索，系統(tǒng)樹(shù)各分支的置信度分別以1000次自舉檢驗(yàn)值和100次自舉檢驗(yàn)值表示。應(yīng)用Modeltest 3.7軟件在 AIC標(biāo)準(zhǔn)下估算出構(gòu)建 MP樹(shù)和ML樹(shù)時(shí)所用的最優(yōu)模型 （GTR+I+Γ）。BI樹(shù)利用 MrBayes 3.1.2（Huelsenbeck and Ronquist,2001）構(gòu)建，所用的模型與構(gòu)建MP樹(shù)和ML樹(shù)時(shí)所用到的模型相同，即 lset設(shè)置替換模型 nst=6（GTR模型），位點(diǎn)速率變異模型設(shè)置為rates=gamma（gamma分布）。同時(shí)建立4條馬爾科夫鏈（MCMC chains），以隨機(jī)樹(shù)為起始樹(shù)，共運(yùn)行25萬(wàn)代，每100代抽樣一次，重復(fù)1次，直至標(biāo)準(zhǔn)誤差小于0.01，每2 500代抽樣一次，舍棄老化樣本構(gòu)建一致樹(shù)。

2 結(jié)果

2.1 序列組成與變異

本文分析的54個(gè)蝶類代表種的16S rRNA、Cytb、COI和COIII基因序列，經(jīng)比對(duì)剪切后，長(zhǎng)度分別為1 372、1 126、1 505和781 bp，4個(gè)基因的串聯(lián)序列總長(zhǎng)度為4 784 bp。串聯(lián)序列中保守位點(diǎn)2 113個(gè)，變異位點(diǎn)為2 669個(gè)，簡(jiǎn)約信息位點(diǎn)為2 149個(gè)（表2）。

基因序列堿基組成分析結(jié)果顯示，不論是單個(gè)基因還是串聯(lián)基因序列，A+T平均含量均超過(guò)了70%，并明顯高于G+C的平均含量，與其他鱗翅目昆蟲(chóng)線粒體基因一樣，具有明顯的AT偏倚性（表 3）。

表2 4個(gè)基因序列及其串聯(lián)序列的進(jìn)化特征

表3 4個(gè)基因及其串聯(lián)序列堿基組成

2.2 堿基替換

本研究運(yùn)用MEGA 6.0軟件[15]分別統(tǒng)計(jì)了串聯(lián)序列之間的差異度（轉(zhuǎn)換Ts、顛換Tv）和相應(yīng)的遺傳距離（p-distance），并以差異度為縱軸，遺傳距離為橫軸在Excel中作散點(diǎn)圖如圖1所示。結(jié)果顯示：隨著遺傳距離的增加，轉(zhuǎn)換與顛換均出現(xiàn)遞增的趨勢(shì)，并保持著良好的線性關(guān)系，轉(zhuǎn)換與顛換值均未超過(guò)2.0表明堿基替換代未出現(xiàn)飽和狀態(tài)。因此，串聯(lián)基因序列轉(zhuǎn)換與顛換的信息都將應(yīng)用于后續(xù)的系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)的構(gòu)建。

2.3 遺傳距離分析

采用 MEGA6.0軟件[15]基于K2P模型計(jì)算6科54種蝶類與外類群之間的遺傳距離，結(jié)果如表4所示。結(jié)果顯示：蝶類各科間的遺傳距離介于0.118～0.163之間，平均遺傳距離為0.134，其中蜆蝶類與灰蝶科的遺傳距離最小（0.118），而蜆蝶類與蛺蝶科的遺傳距離為0.129。由此可見(jiàn)，本文所選取的蜆蝶類與灰蝶科間的親緣關(guān)系相對(duì)于蛺蝶科更為親近。

圖1 本研究串聯(lián)基因序列的堿基替代飽和度散點(diǎn)圖

表4 基于串聯(lián)基因序列計(jì)算蝶類主要類群間的平均遺傳距離

2.4 系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系分析

基于4個(gè)基因的串聯(lián)序列，以蛾類的兩個(gè)代表種作為外類群，分別應(yīng)用鄰接法、最大簡(jiǎn)約法、最大似然法和貝葉斯推論法重建了蝶類的分子系統(tǒng)樹(shù)。結(jié)果顯示，NJ樹(shù)、MP樹(shù)、ML樹(shù)以及BI樹(shù)的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基本一致，其中ML樹(shù)和BI樹(shù)最為穩(wěn)定，如圖3～4所示。

ML樹(shù)和BI樹(shù)均顯示，蛺蝶科、灰蝶科、蜆蝶科、粉蝶科、弄蝶科、鳳蝶科的代表種均形成單系群，其中蜆蝶形成一個(gè)獨(dú)立支系（ML樹(shù)和BI樹(shù)的置信值分別為64%和0.94），并與灰蝶科形成穩(wěn)定的姊妹群（ML樹(shù)和BI樹(shù)的置信值分別為100%和1.00）。然而，蛺蝶科并沒(méi)有直接與灰蝶科形成姊妹群，而是與灰蝶科+蜆蝶科的組合群形成姊妹群 （ML樹(shù)和BI樹(shù)的置信值分別為80%和1.00），蝶類主要類群間的系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系可表示為（（（（蛺蝶科+（灰蝶科+蜆蝶科））+粉蝶科）+弄蝶科）+鳳蝶科）。

3 討論

通過(guò)對(duì)蝶類6科54個(gè)代表種4個(gè)線粒體基因（16S rRNA、COI、COIII、Cytb）部分序列及其串聯(lián)基因序列進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，4個(gè)線粒體基因出現(xiàn)明顯的A+T含量偏高的現(xiàn)象，這與其他文獻(xiàn)報(bào)道的昆蟲(chóng)線粒體基因核苷酸組成頻率相一致，均存在富含AT堿基現(xiàn)象[17]。Knight and Mindell（1993）認(rèn)為轉(zhuǎn)換顛換比的值小于2.0，則此基因序列的突變已達(dá)到飽和狀態(tài)，受進(jìn)化噪音影響的可能性較大，重建系統(tǒng)發(fā)生時(shí)不進(jìn)行特別加權(quán)就會(huì)得出錯(cuò)誤信息[18]。根據(jù)已有的研究認(rèn)為，出現(xiàn)這種結(jié)果的原因有兩個(gè)：第一，可能是由于某些位點(diǎn)發(fā)生了多次轉(zhuǎn)換替代，即轉(zhuǎn)換出現(xiàn)了飽和現(xiàn)象；第二，與高A+T含量有很大的關(guān)系，由于高A+T含量增加了顛換的可能性[19]。本文序列分析結(jié)果顯示，無(wú)論是單個(gè)基因序列還是串聯(lián)序列，均出現(xiàn)富含A+T堿基的現(xiàn)象，究其原因，本文認(rèn)為是由于高A+T含量導(dǎo)致顛換增加的可能性。本文分子系統(tǒng)樹(shù)分析結(jié)果顯示，蜆蝶類的代表種形成單系群，并與灰蝶科具有較近的親緣關(guān)系。同時(shí)，組間遺傳距離分析結(jié)果顯示，蜆蝶類與灰蝶科的遺傳距離最小，同樣表明兩者之間具有較近的親緣關(guān)系，這與前期基于分子證據(jù)的部分研究結(jié)果相吻合[5-9]。然而，本文所選取的蜆蝶類代表種存在一定的局限性，未能涵蓋蜆蝶所有的分類群，因此并不能直接認(rèn)定蜆蝶類可以作為灰蝶科內(nèi)的一個(gè)亞科級(jí)分類階元，并不支持前期基于形態(tài)學(xué)證據(jù)[1-3]和部分分子證據(jù)[10-11]的研究結(jié)果。

圖2 基于串聯(lián)基因序列構(gòu)建的蝶類主要類群的ML樹(shù)

圖3 基于串聯(lián)基因序列構(gòu)建的蝶類主要類群的BI樹(shù)

綜上所述，本文認(rèn)為蜆蝶類還是作為一個(gè)科級(jí)分類階元--蜆蝶科較為合理，并與灰蝶科具有較近的親緣關(guān)系。至于能否將其作為一個(gè)亞科級(jí)分類階元?dú)w入灰蝶科，還有待于更多蜆蝶代表種以及更多分子證據(jù)的的介入進(jìn)行更充分的論證。

[1]KRISTENSEN N P．Remarks on the family－level phylogeny of butterflies （Insecta， Lepidoptera， Rhopalocera）[J]．J Zool Syst Evol Res，1976，14：25－33．

[2]ACKERY PR．Systematic and faunistic studies on butterflies [M]//Vane－Wright R I，Ackery PR．The Biology of Butterflies London：Academic Press，1984．

[3]周堯．中國(guó)蝴蝶分類與鑒定[M]．鄭州：河南科學(xué)技術(shù)出版社，1998．

[4]壽建新，周堯，李宇飛．世界蝴蝶分類名錄[M]．西安：陜西科技出版社，2006．

[5]WELLER S J，PASHLEY D P，MARTIN J A．Reassessment of butterfly family relationships using independent genes and morphology[J]．Ann Entomol Soc Am，1996，89：184－192．

[6]CAMPBELL D L，BROWER A V Z， PIERCE N E．Molecular evolution of the wingless gene and its implications for the phylogenetic placement of the butterfly family Riodinidae （Lepidoptera：Papilionoidea）[J]．Mol Biol Evol，2000，17：684－696．

[7]WAHLBERG N，BRABY M F，BROWER A V Z，et al．Synergistic effects of combining morphological and molecular data in resolving the phylogeny of butterflies and skippers[J]．Proc R Soc B，2005，272：1577－1586．

[8]HEIKKILa M， KAILA L，MUTANEN M，et al．Cretaceous origin and repeated tertiary diversification of the redefined butterflies[J]．Proc R Soc B， 2012，279：1093－1099．

[9]楊邦和，吳孝兵，諸立新，等．基于COII和EF－1ɑ基因部分序列的中國(guó)蝶類科間系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系[J]．動(dòng)物學(xué)報(bào)，2008，54：233－244．

[10]鄒方振，郝家勝，黃敦元，等．基于線粒體ND1和16S rRNA基因序列探討國(guó)產(chǎn)12科蝶類的系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系[J]．昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)，2009，53：118－126．

[11]ZHAO F，HUANG D Y，SUN X Y，et al．The first mitochondrial genome for the butterfly family Riodinidae （Abisara fylloides） and its systematic implications [J]．Zool Res，2013，34：E109－E119．

[12]VIGILAN L，STONEKING M， HARPENDING H．African populations and the evolution of human mitochondrial[J]．Science，1991，253：1503－1507．

[13]STONEKING M，SOODYALL H．Human evolution and the mitochondrial genome[J]．Curr Opin Genet Dev，1996(6)：731－736．

[14]周堯．中國(guó)蝶類志[M]．鄭州：河南科學(xué)技術(shù)出版社，1999．

[15]TAMURE K，STECHER G，PETER D，et al．MEGA6：Molecular evolutionary genetics analysis sersion 6．0[J]．Mol Biol Evol， 2013， 30：2725－2729

[16]壽建新．國(guó)內(nèi)外蝴蝶分類認(rèn)識(shí)總結(jié)[J]．西安文理學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2014（4）：12－13．

[17]夏靖，胡靜，朱國(guó)萍，等．大衛(wèi)絹蛺蝶線粒體基因組全序列的測(cè)定和分析[J]．昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)，2011(5)：34－36．

[18]毛增輝，郝家勝，朱國(guó)萍，等．菜粉蝶線粒體基因組全序列的測(cè)定和分析[J]．昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)，2010，48：2－4．

[19]王菊平，聶新平，曹天文，等．大紫蛺蝶粒體基因組全序列的測(cè)定和分析[J]．動(dòng)物分類學(xué)報(bào)，2012（1）：27－28．

Phylogenetic Placement of Riodinids(Lepidoptera:Papilionidae)Based on Multiple Mitochondrial Gene Sequences

SHI Qing-hui1,2,3,ZHANG Gui-qing1,WEI Zhong-xue1,WU Nan1,ZHANG Yan1,2,3
(1.School of Resources and Chemical Engineering,Sanming University,Sanming 365004,China;2.Fujian Provincial Key Laboratory of Resources and Environment Monitoring and Sustainable Management and Utilization,Sanming University,Sanming 365004,China;3.Fujian Province Engineering Research Center of Mine Ecological Construction,Sanming University,Sanming 365004,China)

The partial mitochondrial 16S rRNA,Cytb,COI and COIII genes ofZemeros flegyasandDodona eugeneswere newly amplified and sequenced.Meanwhile,the homologous sequences of 52 representative species of butterfly were obtained from the GenBank.Based on these data,the sequence variation and the phylogenetic relationship of these groups were analyzed,and the phylogenetic trees of the 54 species from all currently recognized families of butterfly were reconstructed based the combined dataset of the four gene sequences with the neighbor joining (NJ),maximum parsimony(MP),maximum likelihood (ML)and Bayesian Inference(BI)methods.The results of the sequence analysis showed that the four combined genes are 4784 bp in length by alignment,including 2113 conserved sites,2669 variable sites and 2149 parsimonious-informative sites,and the average percentage of A+T is 76.8%.The results of phylogenetic analyses indicated that the riodinid butterflies were strongly supported monophyletic groups and sister to Lycaenidae.Therefore,the results of this paper further confirmed that the Riodinidae and Lycaenidae are more closely to each other.However,it is needed to further prove whether it belongs to Lycaenidae.

lepidoptera;riodinidae;mitochondrial gene;phylogeny

Q969.432.1

A

1673-4343（2017）06-0009-09

10．14098/j．cn35－1288/z．2017．06．002

2017-09-29

福建省教育廳中青年教師教育科研項(xiàng)目（JAT160456）；三明學(xué)院科學(xué)研究基金（B201605）；福建省科技廳自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2017J05059）；福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2014J01136）

石慶會(huì)，男，安徽宿松人，講師，博士。主要研究方向：昆蟲(chóng)資源監(jiān)測(cè)、分子系統(tǒng)學(xué)與進(jìn)化生態(tài)學(xué)。

朱聯(lián)九）