• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    棕櫚酸對轉(zhuǎn)化生長因子β1刺激的肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡及Caspase-12蛋白表達(dá)的影響*

    2017-12-27 18:52:48李雅楠閆宇王銘劉芳肖永紅
    關(guān)鍵詞:星狀棕櫚內(nèi)質(zhì)網(wǎng)

    李雅楠 ,閆宇 ,王銘 ,劉芳 ,肖永紅

    (華北理工大學(xué) 1.公共衛(wèi)生學(xué)院,2.臨床醫(yī)學(xué)院,河北 唐山 063000)

    棕櫚酸對轉(zhuǎn)化生長因子β1刺激的肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡及Caspase-12蛋白表達(dá)的影響*

    李雅楠 1,閆宇 2,王銘 1,劉芳 1,肖永紅 1

    (華北理工大學(xué) 1.公共衛(wèi)生學(xué)院,2.臨床醫(yī)學(xué)院,河北 唐山 063000)

    目的研究棕櫚酸對轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)刺激的肝星狀細(xì)胞(HSC)增殖、凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)蛋白表達(dá)的影響。方法將液氮保存下的肝星狀細(xì)胞株,于37℃、5%CO2孵箱中進(jìn)行復(fù)蘇傳代培養(yǎng),同步化后將細(xì)胞分為5組:空白組、TGF-β1(5 ng/ml)組、TGF-β1+低、中、高劑量棕櫚酸組,即5 ng/ml TGF-β1刺激24 h,再分別加入50、100及200 μmol/L不同劑量棕櫚酸作用24 h后,用MTT比色法檢測細(xì)胞增殖、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率、免疫細(xì)胞化學(xué)法測定Caspase-12蛋白表達(dá)。結(jié)果不同濃度棕櫚酸均能抑制細(xì)胞增殖(P<0.05),且隨著劑量的增加,細(xì)胞相對增殖率(RGR)降低,低、中、高劑量組分別為76.56%、60.93%和34.37%,組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。透視電鏡發(fā)現(xiàn),不同劑量棕櫚酸組出現(xiàn)細(xì)胞核變小,細(xì)胞出現(xiàn)大量線粒體空泡,染色質(zhì)邊集等典型凋亡表現(xiàn)??瞻捉M、TGF-β1組、TGF-β1+低、中、高劑量棕櫚酸組凋亡率分別為(3.32±0.29)%、(1.70±0.14)%、(7.26±0.46)%、(11.24±0.52)%及(15.55±0.31)%,組間兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);隨著棕櫚酸劑量的增加,細(xì)胞Caspase-12蛋白表達(dá)增加(P<0.05)。結(jié)論棕櫚酸能抑制細(xì)胞增殖,增加Caspase-12蛋白表達(dá),促進(jìn)HSC凋亡。

    肝星狀細(xì)胞;棕櫚酸;細(xì)胞增殖;細(xì)胞凋亡;半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)

    肝纖維化(hepatic fibrosis,HF)是對慢性肝損傷的愈合反應(yīng),為一個可逆的過程[1]。肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝臟分泌細(xì)胞外基質(zhì)(extra cellular matrixc,ECM)的主要細(xì)胞,HSC 激活并轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞是HF發(fā)生、發(fā)展的核心環(huán)節(jié)[2]。而轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)可以激活HSC并增加多種促纖維化因子的表達(dá),在肝纖維化中起重要作用[3]。如何逆轉(zhuǎn)HF的進(jìn)程是抗HF研究的重點之一。近年來,針對誘導(dǎo)活化的HSC凋亡成為研發(fā)抗HF藥物的熱點。棕櫚酸是一種動植體內(nèi)常見的高級飽和脂肪酸,有研究報道[4],棕櫚酸刺激巨噬細(xì)胞的脂肪細(xì)胞脂肪酸結(jié)合蛋白(A-FABP)表達(dá)增加,可引起巨噬細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和凋亡,從而發(fā)揮促動脈粥樣硬化作用。亦有研究報道[5-6],棕櫚酸通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡,且呈濃度和時間依賴性降低成骨細(xì)胞增殖活性,增加細(xì)胞凋亡,增高細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白和基因的表達(dá),但其具體機制目前尚不明確。本研究用棕櫚酸作用于經(jīng)TGF-β1刺激的HSC,觀察細(xì)胞增殖、凋亡及ERS標(biāo)志性蛋白Caspase-12的變化,旨在從ERS途徑探討棕櫚酸對HSC凋亡的影響,以為HF的治療提供新的靶點。

    1 材料與方法

    1.1 細(xì)胞株

    表型為活化的HSC株,從四氯化碳刺激的大鼠肝細(xì)胞中分離并獲得永生性。

    1.1.1 藥品與試劑棕櫚酸(購自北京百威靈公司),二甲基亞砜(DMSO)、青霉素及鏈霉素混合液(雙抗)(美國Sigma公司生產(chǎn)),胎牛血、DMEM高糖培養(yǎng)基、磷酸鹽緩沖液及含體積分?jǐn)?shù)0.25%乙二胺四乙酸(EDTA)胰蛋白酶(購自美國BI公司),TGF-β1(批號:PHG9204,購自美國Gibco公司),辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗兔二抗(美國Arigo公司),兔抗鼠Caspase-12一抗(武漢博士德有限公司),F(xiàn)ITC Annexin V Apoptosis Detection Kit Ι(購自美國BD公司)。

    1.1.2 儀器3111細(xì)胞孵育箱(美國Thermo公司),F(xiàn)ACScalibur流式細(xì)胞儀(美國貝帝公司),AC24S1生物安全柜(新加坡ESCO公司),TS100F倒置相差顯微鏡(日本Nikon公司),Universal HoodⅡ凝膠成像分析儀,7500透射電子顯微鏡(日本Hitachi公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)將存放于液氮中的細(xì)胞復(fù)蘇傳代培養(yǎng)于含有6%胎牛血清、1%雙抗(100 u/ml青霉素、100 μg/ml鏈霉素)DMEM 高糖培養(yǎng)基中,在37℃、5%二氧化碳CO2孵箱中進(jìn)行孵育。當(dāng)細(xì)胞長滿密度達(dá)到80%時,胰蛋白酶進(jìn)行傳代并接種在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。

    1.2.2 細(xì)胞分組及處理空白組,TGF-β1組,TGF-β1+低、中、高劑量棕櫚酸組??瞻捉M加入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h,TGF-β1組加入5 ng/ml TGF-β1作用細(xì)胞48 h,TGF-β1+低、中、高劑量棕櫚酸組先用5 ng/ml TGF-β1作用細(xì)胞24 h,再分別加入50、100及200 μmol/L棕櫚酸,培養(yǎng)24 h后檢測各項指標(biāo)的改變。

    1.2.3 MTT比色法檢測HSC增殖 [7]細(xì)胞經(jīng)常規(guī)培養(yǎng)后,以2.5×104個/孔的密度接種于96孔板中,每孔200 μl細(xì)胞懸液,每組設(shè)置5個復(fù)孔并在37℃、5%CO2孵箱中進(jìn)行孵育48 h,在培養(yǎng)結(jié)束前,每孔加入20 μl MTT避光孵育4 h,4 h之后棄去上清液,加入200 μl DMSO,避光震蕩10 min后酶標(biāo)儀490 nm波長處讀取光密度值(OD),計算細(xì)胞相對增殖率(relative growth rate,RGR)RGR= 實驗組OD490/對照組OD490×100%。

    1.2.4 透視電子顯微鏡觀察HSC超微結(jié)構(gòu)的改變[8]將細(xì)胞處理后進(jìn)行消化、離心,預(yù)冷的PBS洗3遍,戊二醛4℃固定過夜。然后用PBS緩沖液洗2 h,鋨酸固定1.5 h,PBS再次清洗2 h,然后依次經(jīng)過酒精(30%、50%、70%、90%、100%)脫水,樹脂包埋,AOE型鉆石切片機進(jìn)行超薄切片,枸櫞酸鉛,醋酸鈾雙染,透視電子顯微鏡觀察HSC細(xì)胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)的改變。

    1.2.5 AV/PI雙染檢測HSC凋亡[9]細(xì)胞經(jīng)過處理后,預(yù)冷PBS清洗3遍,胰蛋白酶進(jìn)行消化,離心,沉淀細(xì)胞,棄去培養(yǎng)基,預(yù)冷PBS再次清洗3遍;預(yù)留1/3空白組細(xì)胞,不加任何染料,作為陰性對照組,剩下細(xì)胞加入1×Binding buffer 195 μl+5 μl An-nexin V,輕輕吹打進(jìn)行混勻,避光孵育30 min,離心沉淀細(xì)胞,棄上清液,加入1×Binding buffer 195μl+5 μl PI,輕輕吹打混勻,之后流式細(xì)胞儀檢測。

    1.2.6 免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測HSC內(nèi)Caspase-12蛋白表達(dá)[9]取對數(shù)生長期的細(xì)胞,胰蛋白酶消化,接種在帶有玻片的6孔板內(nèi),按照各處理組操作完成后,將培養(yǎng)板孔中的蓋玻片取出,PBS沖洗2次,用4%多聚甲醛固定,按SP法試劑盒操作方法進(jìn)行Caspase-12蛋白免疫細(xì)胞化學(xué)染色,DAB顯色后,顯微鏡下觀察后攝片。結(jié)果判定:以胞漿棕黃色為陽性表達(dá)。

    圖像分析:將染色后的細(xì)胞爬片經(jīng)Image-pro plus專業(yè)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析,200倍視野下每組圖片隨機選取6個視野,取其積分光密度值作為Caspase-12蛋白表達(dá)。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

    數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件,計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用方差分析,兩兩比較用LSD-t檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 細(xì)胞增殖情況

    經(jīng)單因素方差分析結(jié)果顯示,各組OD值比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=195.25,P=0.000),TGF-β1組與空白組比較OD值增高(P<0.05);不同濃度棕櫚酸均抑制細(xì)胞增殖(P<0.05),且隨著劑量的增加,細(xì)胞RGR降低,低、中、高劑量棕櫚酸組,組間兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

    2.2 HSC細(xì)胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)的改變

    空白組細(xì)胞體積較大,輪廓不規(guī)則,伸展性好,周緣伸出密集不規(guī)則的樹枝狀偽足。胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)可見正常微絨毛、線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和細(xì)胞核(見圖1A);TGF-β1組和空白組無差異,有完整的細(xì)胞器,細(xì)胞核處于分裂相,染色質(zhì)分布均勻(見圖1B);TGF-β1+低劑量棕櫚酸組,細(xì)胞表面微絨毛消失,表面平滑,胞漿收縮(見圖1C);TGF-β1+中劑量棕櫚酸組染色質(zhì)凝集、濃縮(見圖1D);TGF-β1+高劑量棕櫚酸組染色質(zhì)密度增加,沿核膜邊集,厚薄不均,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大量空泡,細(xì)胞核變小等典型細(xì)胞凋亡特征(見圖1E)。

    2.3 各處理組細(xì)胞間凋亡率

    流式細(xì)胞儀檢測各處理肝星狀細(xì)胞凋亡散點圖,見圖2。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析顯示,不同處理組間細(xì)胞凋亡率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(F=707.27,P=0.000),TGF-β1組凋亡率低于空白組(P<0.05);隨著棕櫚酸劑量加大,細(xì)胞凋亡率增加。見表2。

    2.4 HSC內(nèi)Caspase-12蛋白表達(dá)

    不同處理組HSC免疫組織化學(xué)結(jié)果見圖3。與空白組比較,TGF-β1組HSC的細(xì)胞漿染色深淺不明顯(見圖3B);低、中、高劑量棕櫚酸細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色,且隨著劑量的增加,細(xì)胞漿棕黃色逐漸加深(見圖3C~E)。與空白組比較,TGF-β1組Caspase-12蛋白表達(dá)未見差異(P>0.05),不同劑量棕櫚酸使HSC中Caspase-12蛋白表達(dá)增強(P<0.05)。見表3。

    表1 不同處理組HSC吸光度的改變 (n=5,±s)

    表1 不同處理組HSC吸光度的改變 (n=5,±s)

    注:1)與空白組比較,P<0.05;2)與 TGF-β1組比較,P<0.05;3)與TGF-β1+低劑量棕櫚酸組比較,P<0.05;4)與TGF-β1+中劑量棕櫚酸組比較,P<0.05

    空白組 1.28±0.13 100.00 TGF-β1組 1.85±0.111) 144.00 TGF-β1+棕櫚酸組低0.98±0.081)2) 76.56 195.25 0.000中0.78 ±0.041)2)3) 60.93高0.44 ±0.031)2)3)4) 34.37

    圖1 透視電子顯微鏡下各處理組細(xì)胞的形態(tài)變化

    圖2 不同處理組HSC凋亡散點圖

    表2 不同處理組HSC凋亡率的改變 (n=3,%,±s)

    表2 不同處理組HSC凋亡率的改變 (n=3,%,±s)

    注:1)與空白組比較,P<0.05;2)與 TGF-β1組比較,P<0.05;3)與TGF-β1+低劑量棕櫚酸組比較,P<0.05;4)與TGF-β1+中劑量棕櫚酸組比較,P<0.05

    空白組 3.32±0.29 TGF-β1組 1.70±0.141)TGF-β1+棕櫚酸組低7.26±0.461)2) 707.27 0.000中11.24±0.521)2)3)高15.55±0.311)2)3)4)

    圖3 各處理組細(xì)胞中Caspase-12蛋白的表達(dá)(免疫組織化學(xué))

    表3 各組HSC中Caspase-12蛋白表達(dá) (n=6,±s)

    表3 各組HSC中Caspase-12蛋白表達(dá) (n=6,±s)

    注:1)與空白組比較,P<0.05;2)與 TGF-β1組比較,P<0.05;3)與TGF-β1+低劑量棕櫚酸組比較,P<0.05

    空白組 4 827.12±116.10 TGF-β1組 4 845.49±131.27 TGF-β1+棕櫚酸組低6 545.90±205.891) 517.52 0.000中8 352.85±212.461)2)高9 619.55±114.641)2)3)

    3 討論

    傳統(tǒng)觀點認(rèn)為,HF形成過程中的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞是HSC。TGF-β1刺激HSC可作為體外的HF模型,可以用于進(jìn)行HSC基因表達(dá)調(diào)控、抗纖維化藥物作用及纖維化發(fā)生機制等研究[3]。促進(jìn)活化的HSC凋亡,有助于逆轉(zhuǎn)HF。棕櫚酸是一種在生物體內(nèi)廣泛存在的飽和脂肪酸,又稱十六烷酸。有結(jié)果表明,棕櫚酸對βTC6細(xì)胞增殖率及胰島素的合成有抑制作用,并且呈時間-劑量依賴性作用,證實棕櫚酸對βTC6細(xì)胞的毒性損傷作用[10]。本研究用不同劑量棕櫚酸作用于經(jīng)TGF-β1刺激的HSC,MTT結(jié)果顯示,低、中、高劑量棕櫚酸增殖率依次降低,說明棕櫚酸明顯抑制HSC增殖。

    PARK等[11]發(fā)現(xiàn),HSC經(jīng)棕櫚酸處理后其線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較對照組疏松,當(dāng)加入Caspase、p53或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑能使細(xì)胞增殖水平恢復(fù)。表明棕櫚酸能抑制細(xì)胞增殖可能與細(xì)胞凋亡、自噬和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)[5],棕櫚酸可誘導(dǎo)包括成骨細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞凋亡,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能參與棕櫚酸誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡過程。

    內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)在棕櫚酸誘導(dǎo)的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、胰島細(xì)胞凋亡中也發(fā)揮重要作用[12-14]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是繼死亡受體活化和線粒體損傷之后第3條介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。其中ERS有1條特有Caspase-12途徑,Caspase-12與其他的Caspases一樣以無活性的酶原形式存在。ERS引起Caspase-12激活,激活的Caspase-12切割并激活Caspase-9,活化的Caspase-9激活Caspase-3等效應(yīng)Caspases,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。BITKO等[15]研究發(fā)現(xiàn),由呼吸道合胞病毒引起的A549人肺上皮細(xì)胞凋亡與Caspase-12活化及ERS有關(guān)。本實驗通過免疫組織細(xì)胞化學(xué)檢測法發(fā)現(xiàn),低、中、高劑量棕櫚酸上調(diào)細(xì)胞內(nèi)Caspase-12表達(dá)水平。

    研究結(jié)果表明,棕櫚酸能抑制細(xì)胞增殖,增加Caspase-12蛋白表達(dá),促進(jìn)HSC凋亡。用棕櫚酸干預(yù)可能為抗纖維化的治療帶來了新的提示。

    [1]黃艷,黃成,李俊.肝纖維化病程中Kupffer細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子對肝星狀細(xì)胞活化增殖、凋亡的調(diào)控[J].中國藥理學(xué)通報,2010,26(1):9-13.

    [2]唐桂連.肝星狀細(xì)胞與肝纖維化[J].國際消化病雜志,2012,32(5):270-273.

    [3]ZHOU W C,ZHANG Q B,QIAO L.Pathogenesis of liver cirrhosis[J].World Journal of Gastroenterology,2014,20(23):7312-7324.[4]李卉.脂肪酸結(jié)合蛋白在棕櫚酸誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡中的作用和機制[D].長沙:中南大學(xué),2012.

    [5]辛瑩.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)棕櫚酸誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞凋亡[D].鄭州:鄭州大學(xué),2015.

    [6]NIELSON C M,MARSHALL L M,ADAMS A L,et al.BMI and fracture risk in older men:the osteoporotic fractures in men study(Mr OS)[J].J Bone Miner Res,2011,26(3):496-502.

    [7]李喜艷,王加啟,魏宏陽,等.MTT比色法檢測賴氨酸、蛋氨酸對體外培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞增殖的影響[J].生物技術(shù)通報,2010,3(39):143-148.

    [8]王銘,閆宇,李雅楠,等.衣霉素對轉(zhuǎn)化生長因子β1的肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡及Caspase-9蛋白表達(dá)的影響[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2016,33(1):40-43.

    [9]梁曉飛,王銘,肖永紅.粉防己堿對小鼠肺成纖維細(xì)胞的凋亡及Caspase-3蛋白的影響[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2016,32(6):531-533.

    [10]陳丹玲.ERp46在棕櫚酸誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的保護(hù)作用及Exendin-4的干預(yù)研究[D].福州:福建醫(yī)科大學(xué),2012.

    [11]PARKE J,LEE A Y,PARK S,et al.Multiple pathways are involved in palmitic acid-induced toxicity[J].Food and Chemical Toxicology,2014,67(5):26-34.

    [12]LU J,WANG Q,HUANG L,et al.Palmitate causes endoplasmic reticulum stress and apoptosis in human mesenchymal stem cells:prevention by AMPK activator[J].Endocrinology,2012,153(11):5275-5284.

    [13]ZHAO Y,TAN Y,XI S,et al.A novel mechanism by which SDF-1β protects cardiac cells from palmitate-induced endo plasmic reticulum stress and apoptosis via CXCR7 and AMPK/p38 MAPK-mediated interleukin-6 generation[J]. Diabetes,2013,62(7):2545-2558.

    [14]SIMON-SZABóL,KOKAS M,MANDLJ,et al.Metformin attenuatespalmitate-induced endoplasmic reticulum stress,serine phosphorylation of IRS-1 and apoptosis in rat insulinoma cells[J].PloS One,2014,9(6):e97868.

    [15]NAKAGAWA T,ZHU H,MORISHIMA N,et al.Caspase-12 mediates ER_specific apoptosis and cytotoxicity by amyloid_β[J].Nature,2000,403(6765):98-103.

    Effect of palmitic acid on caspase-12 and proliferation and apoptosis of hepatic stellate cells*

    Ya-nan Li1,Yu Yan2,Ming Wang1,Fang Liu1,Yong-hong Xiao1
    (1.College of Public Health,2.College of Clinical Medicine,North China University of Science and Technology;Tangshan,Hebei 063000,China)

    ObjectiveTo investigate the effect of palmitic acid (PA)on caspase-12 and proliferation and apoptosis in rat hepatic stellate cells (HSCs)when stimulated by transforming growth factor-β1(TGF-β1).MethodsHSCs were randomly divided into five groups:Sham group,TGF-β1group,TGF-β1+low PA group,TGF-β1+middle PA group and TGF-β1+high PA group.HSCs were stimulated by TGF-β1(5 ng/ml)for 24 hours followed by co-incubation with PA under different doses(50,100,and 200 umol/L).No intervention was performed in Sham group.Cell proliferation was detected by MTT;morphological manifestations of cells were obtained by transmission electronmicroscope;apoptosis rate was determined by flow cytometry;expression levels of caspase-12 was measured by Immunohistochemistry.ResultsCellular proliferation was significantly inhibited with PA treatment in a dose dependent manner(P<0.05).Transmission electronmicroscope showed typical apoptotic features such as small nuclei,large numbers of mitochondria vacuoles and obvious edge sets of DNA.Treatment of PA dramatically increased apoptosis rate when compared with TGF-β1group[(7.26±0.46)%vs(1.70±0.14)%,P<0.05;(11.24±0.52)%vs(1.70±0.14)%,P<0.05;(15.55±0.31)%vs(1.70±0.14)%,P<0.05].Expression of caspase-12 protein increased significantly with PA in dose dependent manner (P<0.05).ConclusionPA inhibits cellular proliferation through promoting caspase-12 mediated apoptosis in HSCs.

    hepatic stellate cell;palmitic acid;proliferation;apoptosis;caspase-12

    R575.5

    A

    10.3969/j.issn.1005-8982.2017.30.003

    1005-8982(2017)30-0015-06

    2017-07-08

    河北省自然科學(xué)基金資助項目(No:H2015209043)

    肖永紅,E-mail:kycxyh@tom.com;Tel:0315-8805226

    (王榮兵 編輯)

    猜你喜歡
    星狀棕櫚內(nèi)質(zhì)網(wǎng)
    內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自噬及其與疾病的關(guān)系研究進(jìn)展
    缺氧誘導(dǎo)因子-1α對肝星狀細(xì)胞影響的研究進(jìn)展
    The Six Swans (II)By Grimm Brothers
    憤怒誘導(dǎo)大鼠肝損傷中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的表達(dá)
    它們可以用來書寫嗎
    棕櫚樹
    棕櫚
    散文詩(2017年17期)2018-01-31 02:34:05
    棕櫚設(shè)計有限公司
    LPS誘導(dǎo)大鼠肺泡上皮細(xì)胞RLE-6 TN內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及凋亡研究
    超聲引導(dǎo)星狀神經(jīng)節(jié)阻滯治療原發(fā)性痛經(jīng)
    欧美zozozo另类| 午夜福利高清视频| 免费黄色在线免费观看| 久久久久久久久大av| 日韩欧美 国产精品| 国产精品久久久久久久久免| 成人漫画全彩无遮挡| 欧美一级a爱片免费观看看| 欧美成人a在线观看| 少妇的逼好多水| 国产精品国产高清国产av| 天美传媒精品一区二区| 99久国产av精品国产电影| 亚洲在久久综合| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 亚洲国产最新在线播放| 1000部很黄的大片| 日本av手机在线免费观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 91久久精品国产一区二区成人| av在线亚洲专区| 麻豆成人午夜福利视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 亚洲国产精品专区欧美| 狠狠狠狠99中文字幕| 久久久亚洲精品成人影院| 久久精品久久精品一区二区三区| 成人三级黄色视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 日韩欧美国产在线观看| 国产精品福利在线免费观看| 最后的刺客免费高清国语| 岛国毛片在线播放| 少妇人妻一区二区三区视频| 啦啦啦啦在线视频资源| 黄色配什么色好看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 91aial.com中文字幕在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影| av专区在线播放| 日韩亚洲欧美综合| 乱人视频在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 中文资源天堂在线| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲欧美日韩高清专用| 超碰av人人做人人爽久久| 免费黄色在线免费观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 天天一区二区日本电影三级| 国产高清国产精品国产三级 | 91在线精品国自产拍蜜月| 国产亚洲5aaaaa淫片| 国产精品野战在线观看| 1024手机看黄色片| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 欧美区成人在线视频| 中文字幕制服av| 婷婷六月久久综合丁香| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲av一区综合| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲欧美日韩高清专用| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 色综合色国产| 麻豆成人午夜福利视频| 久久久久久久久大av| 午夜精品一区二区三区免费看| 久久久久久久午夜电影| 久久鲁丝午夜福利片| 日本一二三区视频观看| av在线观看视频网站免费| 内射极品少妇av片p| 国产亚洲精品久久久com| 亚州av有码| 亚洲精品乱久久久久久| 国产成人freesex在线| 青春草国产在线视频| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲最大成人中文| 秋霞在线观看毛片| 在线观看美女被高潮喷水网站| 少妇的逼好多水| 日韩av不卡免费在线播放| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 国产人妻一区二区三区在| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 插逼视频在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 日韩亚洲欧美综合| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 一本久久精品| 变态另类丝袜制服| 国产精品国产高清国产av| av在线老鸭窝| 久久草成人影院| 91久久精品电影网| eeuss影院久久| 中文字幕久久专区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 在线免费十八禁| 91久久精品国产一区二区三区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| a级一级毛片免费在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲真实伦在线观看| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 午夜福利在线观看吧| 蜜臀久久99精品久久宅男| 日本熟妇午夜| 亚洲图色成人| 午夜激情福利司机影院| 亚洲va在线va天堂va国产| 丰满乱子伦码专区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 欧美变态另类bdsm刘玥| 色视频www国产| 色吧在线观看| 看十八女毛片水多多多| av黄色大香蕉| 简卡轻食公司| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲电影在线观看av| 99久国产av精品| 精品免费久久久久久久清纯| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲国产欧美人成| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲经典国产精华液单| 欧美色视频一区免费| 美女国产视频在线观看| 一级黄色大片毛片| 特级一级黄色大片| 一级av片app| av女优亚洲男人天堂| 69av精品久久久久久| 国产 一区精品| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 欧美3d第一页| 成年免费大片在线观看| 国产精品伦人一区二区| 久久久久性生活片| 免费看av在线观看网站| 精品久久久久久成人av| 国产一区有黄有色的免费视频 | 久久久久久久久久成人| 波多野结衣巨乳人妻| 夜夜爽夜夜爽视频| 尾随美女入室| 亚洲四区av| 日韩大片免费观看网站 | 蜜桃久久精品国产亚洲av| 一级二级三级毛片免费看| 久久国产乱子免费精品| 亚洲图色成人| 日本午夜av视频| 久久久精品大字幕| 国产成人aa在线观看| 乱人视频在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 日本五十路高清| 亚洲第一区二区三区不卡| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 日韩欧美 国产精品| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 国产亚洲精品久久久com| 久久精品综合一区二区三区| av国产免费在线观看| h日本视频在线播放| 精品一区二区三区视频在线| 国产一区二区在线av高清观看| av福利片在线观看| 免费无遮挡裸体视频| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲最大成人手机在线| 成年女人永久免费观看视频| 1000部很黄的大片| 内射极品少妇av片p| 国产精品永久免费网站| 婷婷色av中文字幕| av卡一久久| 国产高清国产精品国产三级 | 丰满乱子伦码专区| www日本黄色视频网| 欧美日韩综合久久久久久| 国产毛片a区久久久久| 麻豆成人av视频| 少妇熟女欧美另类| 春色校园在线视频观看| 麻豆国产97在线/欧美| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 美女cb高潮喷水在线观看| 日韩av在线大香蕉| 在现免费观看毛片| 久久精品夜色国产| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 女的被弄到高潮叫床怎么办| 成人二区视频| 亚洲国产色片| 久久综合国产亚洲精品| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲国产精品专区欧美| 色综合色国产| 又爽又黄a免费视频| 能在线免费看毛片的网站| av国产免费在线观看| 国产精品一区二区在线观看99 | 日日撸夜夜添| 欧美高清性xxxxhd video| videossex国产| kizo精华| 综合色丁香网| 国产不卡一卡二| 国产伦在线观看视频一区| 成人av在线播放网站| 嫩草影院新地址| 变态另类丝袜制服| 边亲边吃奶的免费视频| 久久人妻av系列| 最近手机中文字幕大全| 我要看日韩黄色一级片| 偷拍熟女少妇极品色| 色播亚洲综合网| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 午夜爱爱视频在线播放| 国产精品久久久久久久久免| 亚洲人成网站在线播| av黄色大香蕉| 国产亚洲精品av在线| 内射极品少妇av片p| av福利片在线观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产精品福利在线免费观看| av免费在线看不卡| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 深爱激情五月婷婷| 偷拍熟女少妇极品色| 午夜老司机福利剧场| 婷婷色av中文字幕| 在线播放国产精品三级| 午夜老司机福利剧场| 国产亚洲最大av| 听说在线观看完整版免费高清| 51国产日韩欧美| 精品无人区乱码1区二区| 级片在线观看| 美女高潮的动态| 国产精品嫩草影院av在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲怡红院男人天堂| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 永久网站在线| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 亚洲欧美精品自产自拍| 91狼人影院| 老女人水多毛片| 午夜精品国产一区二区电影 | 三级国产精品片| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 久久久a久久爽久久v久久| 一边亲一边摸免费视频| 精品人妻熟女av久视频| 青春草国产在线视频| 成人性生交大片免费视频hd| 最近最新中文字幕免费大全7| 天堂中文最新版在线下载 | 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 中文字幕亚洲精品专区| 一级av片app| 久久精品国产亚洲av天美| 精品久久久久久成人av| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产v大片淫在线免费观看| 久久精品久久久久久久性| 老司机影院成人| 三级毛片av免费| 特大巨黑吊av在线直播| 干丝袜人妻中文字幕| 国产精品伦人一区二区| 免费黄网站久久成人精品| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 精品人妻熟女av久视频| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 色网站视频免费| 精品少妇黑人巨大在线播放 | av黄色大香蕉| 老司机福利观看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 午夜福利成人在线免费观看| 国内精品宾馆在线| 亚洲成av人片在线播放无| 两个人视频免费观看高清| 男女国产视频网站| 国产69精品久久久久777片| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 赤兔流量卡办理| 亚洲欧美精品自产自拍| www.av在线官网国产| 亚洲成色77777| 夫妻性生交免费视频一级片| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产乱人偷精品视频| 有码 亚洲区| 久久精品影院6| 毛片一级片免费看久久久久| 久久久久性生活片| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲一区高清亚洲精品| 成年女人永久免费观看视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 九九在线视频观看精品| 成年av动漫网址| ponron亚洲| 久久久久久久国产电影| av在线观看视频网站免费| 欧美人与善性xxx| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 国产69精品久久久久777片| 成年女人永久免费观看视频| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲精品国产成人久久av| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产成人福利小说| 99热网站在线观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 日本熟妇午夜| 国产精品乱码一区二三区的特点| 赤兔流量卡办理| 久久精品国产亚洲av天美| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲精品一区蜜桃| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲美女搞黄在线观看| 十八禁国产超污无遮挡网站| 97超碰精品成人国产| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲成人av在线免费| 亚洲av日韩在线播放| 永久网站在线| 免费观看a级毛片全部| 美女黄网站色视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲精品国产av成人精品| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 精华霜和精华液先用哪个| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 日韩精品青青久久久久久| 免费电影在线观看免费观看| 国产成人免费观看mmmm| 一个人免费在线观看电影| 一级二级三级毛片免费看| 麻豆乱淫一区二区| 中文在线观看免费www的网站| 秋霞伦理黄片| av福利片在线观看| 国产av在哪里看| www.色视频.com| 国产精品日韩av在线免费观看| 精品久久久久久久末码| 两个人视频免费观看高清| 国产精品一区www在线观看| 国产一级毛片在线| 成人二区视频| 老女人水多毛片| 老司机福利观看| 国产单亲对白刺激| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 大话2 男鬼变身卡| 小说图片视频综合网站| 中文天堂在线官网| 最近中文字幕2019免费版| 欧美最新免费一区二区三区| 国产亚洲5aaaaa淫片| 成人三级黄色视频| 国产精品久久久久久精品电影| 精品久久久久久久久av| 七月丁香在线播放| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产私拍福利视频在线观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲综合精品二区| 国产美女午夜福利| 在线播放国产精品三级| 欧美成人午夜免费资源| 午夜久久久久精精品| 国产精品野战在线观看| 亚洲性久久影院| 国产午夜福利久久久久久| av在线观看视频网站免费| 婷婷六月久久综合丁香| 有码 亚洲区| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 欧美丝袜亚洲另类| 大香蕉97超碰在线| av.在线天堂| 91久久精品国产一区二区三区| 日韩精品有码人妻一区| 国产淫片久久久久久久久| 99热这里只有是精品50| eeuss影院久久| 午夜激情欧美在线| 伦精品一区二区三区| 三级国产精品欧美在线观看| 高清日韩中文字幕在线| 综合色av麻豆| 国产精品一区www在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲av男天堂| 97超视频在线观看视频| 午夜精品在线福利| 国产精品蜜桃在线观看| 乱码一卡2卡4卡精品| av在线老鸭窝| 国产精品永久免费网站| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 日韩欧美三级三区| 亚洲av成人av| 亚洲va在线va天堂va国产| 午夜老司机福利剧场| 国产av在哪里看| 久久久久久伊人网av| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲色图av天堂| 欧美+日韩+精品| 国产成人午夜福利电影在线观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 日本熟妇午夜| 精品不卡国产一区二区三区| 一个人看的www免费观看视频| 色综合亚洲欧美另类图片| 69av精品久久久久久| 久久99蜜桃精品久久| 久久精品91蜜桃| 欧美人与善性xxx| 99热网站在线观看| 久久久a久久爽久久v久久| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产精品三级大全| av免费在线看不卡| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 精品午夜福利在线看| 国产高清国产精品国产三级 | 全区人妻精品视频| 色综合站精品国产| 亚洲精品456在线播放app| 黄色一级大片看看| 亚洲自偷自拍三级| 国产淫片久久久久久久久| 久久久久免费精品人妻一区二区| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产精品一区www在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲国产精品久久男人天堂| 免费电影在线观看免费观看| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲无线观看免费| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 精品国产露脸久久av麻豆 | 国产黄色视频一区二区在线观看 | 亚洲久久久久久中文字幕| 精品久久久久久电影网 | 成人漫画全彩无遮挡| 国产探花极品一区二区| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 日本熟妇午夜| 禁无遮挡网站| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 韩国高清视频一区二区三区| 热99在线观看视频| 亚洲在线自拍视频| 欧美性感艳星| 色网站视频免费| 亚洲最大成人手机在线| ponron亚洲| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲伊人久久精品综合 | 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 亚洲国产精品sss在线观看| 国产精华一区二区三区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 婷婷色av中文字幕| 精品久久久久久电影网 | 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲av二区三区四区| 2021少妇久久久久久久久久久| 永久免费av网站大全| 国产乱来视频区| 日本色播在线视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 久久精品影院6| 麻豆成人av视频| 六月丁香七月| 国产免费一级a男人的天堂| 熟女人妻精品中文字幕| 国产精品福利在线免费观看| 天堂影院成人在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 中国美白少妇内射xxxbb| 免费搜索国产男女视频| 免费观看在线日韩| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 最新中文字幕久久久久| 老女人水多毛片| 男女国产视频网站| 99久久九九国产精品国产免费| 免费观看的影片在线观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产精品伦人一区二区| 99热网站在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 免费搜索国产男女视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 嘟嘟电影网在线观看| 国产精品一及| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲欧美精品自产自拍| 成年免费大片在线观看| 亚洲国产精品专区欧美| 韩国高清视频一区二区三区| 免费av不卡在线播放| 在线天堂最新版资源| 哪个播放器可以免费观看大片| 免费搜索国产男女视频| 成人亚洲精品av一区二区| 日韩欧美在线乱码| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲国产最新在线播放| 国产亚洲精品av在线| 国产精品一区二区三区四区久久| 91精品国产九色| 午夜福利在线在线| 日本欧美国产在线视频| 大香蕉久久网| 我要看日韩黄色一级片| 99热这里只有是精品50| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产视频内射| 国产av码专区亚洲av| 视频中文字幕在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲av.av天堂| 成人二区视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 精品欧美国产一区二区三| av福利片在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 丝袜美腿在线中文| 中文字幕久久专区| 亚洲怡红院男人天堂| 国产又色又爽无遮挡免| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲第一区二区三区不卡| 色视频www国产| 国产高清视频在线观看网站| 久久精品国产亚洲av涩爱| 午夜精品在线福利| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产激情偷乱视频一区二区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 久久精品91蜜桃| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 亚洲最大成人中文| 国产美女午夜福利| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 人人妻人人看人人澡| 午夜老司机福利剧场| 久久99蜜桃精品久久| 青春草视频在线免费观看| 久久韩国三级中文字幕| 国产高潮美女av| 在线播放国产精品三级| 我要看日韩黄色一级片| 精品一区二区三区人妻视频| 九九爱精品视频在线观看| or卡值多少钱| 永久网站在线| 黄色欧美视频在线观看| 成人特级av手机在线观看| 高清午夜精品一区二区三区| 干丝袜人妻中文字幕| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 看十八女毛片水多多多| 日韩一区二区三区影片| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国语自产精品视频在线第100页| 中文字幕精品亚洲无线码一区| av免费在线看不卡|