超聲波強(qiáng)化提取紫花地丁根中黃酮類化合物的工藝研究

阮樹(shù)堂

摘要：指出了紫花地丁中含有豐富的黃酮類生物堿，大量的試驗(yàn)證明其具有較好的生物活性。采用正交試驗(yàn)法，得出了紫花地丁根中總黃酮的最佳提取工藝條件：物料比 1∶50、功率150 W、提取時(shí)間 50 min、溫度 70 ℃，且紫花地丁根提取物中粗品黃酮得率為1.71 %。

關(guān)鍵詞：紫花地??；提取物；超聲波

中圖分類號(hào)：S811.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：16749944（2017）22013403

1 引言

紫花地?。╒iola Philippica），又稱地丁草、野堇菜、紫地丁，屬多年生草本植物，分布于我國(guó)東北、長(zhǎng)江流域和黃河流域等地。紫花地丁可作為藥材使用，微苦、性寒，具有清熱解毒、抗菌消炎、涼血消腫等功效。黃酮類化合物廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，紫花地丁所含黃酮類成分具有較強(qiáng)的抑菌作用[1]。目前，有關(guān)紫花地丁根成分的研究較少。筆者利用超聲波提取法對(duì)其根進(jìn)行化學(xué)提取，并利用分光光度法考察其黃酮類化合物成分含量，旨在為拓展紫花地丁綜合開(kāi)發(fā)利用提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

2 材料和方法

2.1 試驗(yàn)材料

紫花地丁，采摘于贛州境內(nèi)105國(guó)道旁；

蘆丁黃酮標(biāo)準(zhǔn)品，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；

50%乙醇，RO水。

2.2 試驗(yàn)儀器

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州長(zhǎng)城R—100IVN）；

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（美普達(dá)uv1800pc）；

超聲波循環(huán)提取機(jī)（CTXF—5B）；

恒溫干燥箱（DHG—9241A）；

粉碎機(jī)（FW100）。

2.3 試驗(yàn)過(guò)程及方法

將新鮮的紫花地丁連根拔起，去枝葉，留根部，切片，50-60℃烘干，粉碎，加入溶劑浸提，超聲波提取，正交實(shí)驗(yàn)，得出結(jié)論。試驗(yàn)過(guò)程見(jiàn)圖1。

精確稱取紫花地丁根部樣品2.3130 g 于 100 m L 錐形瓶中， 分別加入不同溶劑 40 mL， 使樣品完全浸泡在溶劑中并浸泡36 h，后將溶劑和樣品混合物轉(zhuǎn)移至超聲提取機(jī)中提取， 取出冷卻至室溫，過(guò)濾，將濾液置于100 mL燒瓶中， 用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)溶劑，得紫花地丁根部提取物，備用。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 0.0350 g 于小燒杯中， 加入30 mL 50 %乙醇，攪拌溶解，后轉(zhuǎn)移至100 mL 容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為 0.35 mg/mL。

準(zhǔn)確移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液 0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40、1.60 mL分別置于10 mL的比色管中，分別加入1%三氯化鋁溶液至刻度，在波長(zhǎng)514 nm處測(cè)定各比色管中溶液的吸光度，以 A 為縱坐標(biāo)，濃度 C 為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行線性擬合[2]，求得回歸方程：A=0.2335+0.8251C （mg/10 mL），相關(guān)系數(shù)r=0.9991。

2.5 提取物的濃度測(cè)定

按照2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法，移取1.00 mL的提取物于10 mL的比色管中，加1% 三氯化鋁溶液至刻度，測(cè)定比色管中溶液的吸光度。

2.6 回收率的測(cè)定

按照上述測(cè)定方法測(cè)定吸光度值，結(jié)合回歸方程，算出紫花地丁根中總黃酮得率，計(jì)算公式為：

總黃酮得率/%=提取液中總黃酮質(zhì)量總質(zhì)量×100%。

2.7 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)設(shè)計(jì)主要討論了在超聲波提取過(guò)程中影響提取效果的物料比、功率、時(shí)間以及提取溫度對(duì)提取紫花地丁中黃酮類物質(zhì)的影響。

3 結(jié)果討論

3.1 紫花地丁根中黃酮總量

由表1可以看出，相較與紫花地丁其他部位的黃酮含量，根中黃酮總量較少[3]。

3.2 正交試驗(yàn)

本試驗(yàn)主要設(shè)計(jì)了4因素4水平的正交試驗(yàn)，相互關(guān)系見(jiàn)表2。

3.2.1 物料比對(duì)提取的影響

在50%的乙醇溶液中，設(shè)定提取溫度 70 ℃、提取時(shí)間 70 min 、功率為150 W條件下，研究物料比分別為1∶30、1∶40、1∶50和1∶60時(shí)對(duì)紫花地丁總黃酮得率影響（圖2）。

試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2顯示，隨著物料比的增加，黃酮含量組建增加，而最佳物料比是1∶50。

3.2.2 功率對(duì)提取的影響

在50%的乙醇溶液中，設(shè)定提取溫度 70 ℃、提取時(shí)間 70 min 、物料比是1∶50的條件下，研究超聲波功率分別為100、150、200和250 W時(shí)對(duì)紫花地丁總黃酮得率影響（圖3）。

結(jié)果見(jiàn)圖3顯示，當(dāng)超聲波功率為150 W時(shí)，黃酮含量最高，為1.95%。

3.2.3 提取時(shí)間對(duì)提取的影響

在50%的乙醇溶液中，設(shè)定提取溫度 70 ℃、提取功率為150 W、物料比是1∶50的條件下，研究提取時(shí)間分別為30 min、50 min、70 min和90 min時(shí)對(duì)紫花地丁總黃酮得率影響（圖4）。

結(jié)果見(jiàn)圖4顯示，當(dāng)提取時(shí)間為70 min時(shí)，黃酮含量最高，為1.63%。

3.2.4 溫度對(duì)提取的影響

在50%的乙醇溶液中，設(shè)定提取時(shí)間 70 min、提取功率為150 W、物料比是1∶50的條件下，研究提取溫度分別為30 ℃、50 ℃、70 ℃和90 ℃ 時(shí)對(duì)紫花地丁總黃酮得率影響（圖5）。

結(jié)果見(jiàn)圖5顯示，當(dāng)提取溫度為70 ℃時(shí)，黃酮含量最高，為1.55%。

由上述試驗(yàn)結(jié)果可以得出結(jié)論，超聲波提取紫花地丁根的黃酮時(shí)的最優(yōu)參數(shù)為：物料比為1∶50、提取溫度 70 ℃、提取時(shí)間 70 min、功率為150 W。

4 結(jié)論

（1）本試驗(yàn)采用正交試驗(yàn)法，得出紫花地丁根中總黃酮的最佳提取工藝條件：物料比1∶50、功率150 W、提取時(shí)間 50 min、溫度 70 ℃，得到紫花地丁根提取物中粗品黃酮含量為 18.58 mg/g。

（2）超聲波強(qiáng)化提取紫花地丁的方法具有省時(shí)、高效、節(jié)能等優(yōu)點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)：

[1]陳蔚燕. 紫花地丁不同方式提取物抑菌效果研究[J] .現(xiàn)代農(nóng)藥，2014， 5（13）：38～40.

[2]侯冬巖，回瑞華，劉曉媛. 紫花地丁中黃酮類化合物提取條件的研究[J]. 鞍山師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，4（9）：19～22.

[3]付戈妍， 付 克， 王洪光，等. 超聲波提取紫花地丁總黃酮及含量測(cè)定[J].內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2008，5（23）：512～513.