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    肺癌干細(xì)胞的研究進(jìn)展

    2020-12-12 01:58:26李思佳宋新宇李文新
    巴楚醫(yī)學(xué) 2020年1期
    關(guān)鍵詞:耐藥性靶向干細(xì)胞

    李思佳 宋新宇 李文新

    (三峽大學(xué) 第一臨床醫(yī)學(xué)院[宜昌市中心人民醫(yī)院] 呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科 &三峽大學(xué) 呼吸系統(tǒng)疾病研究所,湖北 宜昌 443003)

    據(jù)2018年全球腫瘤數(shù)據(jù)報(bào)道,肺癌已成為最常見的腫瘤之一(占總病例的11.6%)[1],同時(shí)也是腫瘤死亡的主要原因(占腫瘤總死亡人數(shù)的18.4%)。肺癌是男性患者最常診斷的腫瘤,且在女性腫瘤患者中,肺癌的發(fā)病率也僅次于乳腺癌[1]。近30年來(lái),由于靶向藥物及放化療的臨床使用,肺癌患者5年生存率逐步提高,但隨即產(chǎn)生的多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)導(dǎo)致患者預(yù)后不良,目前肺癌的5年生存率仍低于30%[2]。因此,明確肺癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移和耐藥機(jī)制以及探索新治療靶點(diǎn)仍是肺癌研究的重點(diǎn)和挑戰(zhàn)。

    腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cell,CSC)的發(fā)現(xiàn)為肺癌的治療提供了新的靶點(diǎn)[3]。CSC是罕見的腫瘤細(xì)胞群體,具有自我更新以及在不同腫瘤環(huán)境中分化為多種細(xì)胞譜系的能力[4]。在染色體水平上,CSC中端粒酶的活性常增強(qiáng)。端粒酶是一種核糖核蛋白復(fù)合物,可反復(fù)添加DNA序列以延長(zhǎng)端粒,并通過(guò)延長(zhǎng)其端粒賦予細(xì)胞無(wú)限增殖的能力。另外,抗凋亡信號(hào)通路、膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性以及遷移和轉(zhuǎn)移的能力均會(huì)增加。因此,CSC可以介導(dǎo)腫瘤耐藥性并維持腫瘤細(xì)胞長(zhǎng)期存活,但通過(guò)干預(yù)CSC是否可緩解腫瘤多藥耐藥性并提高放化療的療效仍存在爭(zhēng)議[5]。本文將對(duì)肺癌干細(xì)胞的起源、特點(diǎn)、腫瘤標(biāo)志物、信號(hào)通路以及針對(duì)肺癌干細(xì)胞的靶向治療進(jìn)行論述,并對(duì)肺癌干細(xì)胞的應(yīng)用前景進(jìn)行分析。

    1 肺癌干細(xì)胞起源

    CSC又稱腫瘤起始細(xì)胞(tumor-initiating cells,TICs),是存在于腫瘤組織中的一類具有較強(qiáng)致瘤性、自我更新、無(wú)限增殖以及分化潛能的細(xì)胞,因其保持干細(xì)胞特性而又被稱為腫瘤干細(xì)胞[6]。CSC由正常組織干細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來(lái)。正常組織干細(xì)胞具有自我更新能力,且生存周期較長(zhǎng),分為細(xì)胞靜止期、增殖期和分化期。CSC是多種因素長(zhǎng)期誘導(dǎo)、多步累積而產(chǎn)生的。正常情況下,大部分干細(xì)胞處于細(xì)胞靜止期,發(fā)生突變的可能性較小,但當(dāng)干細(xì)胞處于增殖期和分化期時(shí)將大大增加突變發(fā)生幾率。即使大部分突變的干細(xì)胞會(huì)被機(jī)體識(shí)別并清除,但仍有少部分可能會(huì)被保留并繼承下來(lái)。在全能干細(xì)胞分化過(guò)程中,每一階段的干細(xì)胞都可能積累了不同程度的基因突變,而這些基因突變的干細(xì)胞可能因?yàn)槲h(huán)境改變而發(fā)生細(xì)胞增殖和分化的失衡,最終轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤干細(xì)胞[7]。腫瘤干細(xì)胞發(fā)生后可能參與一系列的腫瘤活動(dòng),例如引發(fā)腫瘤細(xì)胞更新、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移、腫瘤滋養(yǎng)血管生成以及放化療耐受性增加等[8]。因此,肺癌干細(xì)細(xì)胞(lung cancer stem cell,LCSC)可能是治療肺癌、減少腫瘤的耐藥性、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的重要靶點(diǎn),靶向干預(yù)LCSC可能在源頭上預(yù)防腫瘤的發(fā)生、耐藥以及復(fù)發(fā)。

    2 肺癌干細(xì)胞標(biāo)志物

    在臨床診療過(guò)程中如何篩選LCSC一直是備受關(guān)注的話題。研究證明,肺癌干細(xì)胞可以表達(dá)多種干性標(biāo)志物,如CD133、CD44、CD90、CD87、側(cè)群細(xì)胞(side population cells,SP)、乙醛脫氫酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)等[9]。其中經(jīng)典的糖蛋白CD133和CD44是篩選腫瘤干細(xì)胞最常用的表面標(biāo)志物。

    2.1 CD133

    CD133是一種由prom基因編碼的五次跨膜糖蛋白,分子量大約為120 kDa[10]。在造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞等未分化細(xì)胞中??蓹z測(cè)到CD133的表達(dá);并且研究發(fā)現(xiàn)CD133在癌組織中的表達(dá)較癌旁及正常組織顯著增高,且與腫瘤細(xì)胞分化程度呈負(fù)相關(guān)[11]。另一研究證明,CD133可通過(guò)上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和缺氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia-induced factor-1α,HIF-1α)的表達(dá)水平促進(jìn)LCSC的轉(zhuǎn)移[12]。CD133廣泛存在于多種CSC中,目前在肝癌、腦膠質(zhì)瘤、結(jié)腸癌中均被證實(shí)為腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物,其陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤惡性程度密切相關(guān)[13]。然而,CD133不能單獨(dú)作為鑒定肺癌干細(xì)胞的標(biāo)志,還需同時(shí)聯(lián)合其他的標(biāo)志物進(jìn)行分選,以提高其陽(yáng)性率。

    2.2 CD44

    CD44是一種廣泛分布的多功能跨膜表面糖蛋白,其作為信號(hào)受體可介導(dǎo)細(xì)胞黏附、增殖、分化、遷移、血管形成和蛋白酶對(duì)接等多種功能,另外它還能夠接受細(xì)胞外基質(zhì)糖基化以及作為透明質(zhì)酸化信息的受體[14]。近年研究發(fā)現(xiàn),腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移與CD44有密切的關(guān)系,CD44可用于評(píng)價(jià)非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后[15]。Leung等[16]研究發(fā)現(xiàn),CD44+非小細(xì)胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的分化能力增強(qiáng)。且與CD44-細(xì)胞相比,CD44+細(xì)胞對(duì)順鉑有更強(qiáng)的耐藥性且具有更強(qiáng)的腫瘤干細(xì)胞成瘤能力。但目前CD44能否成為L(zhǎng)CSC的特異性標(biāo)志物還需進(jìn)一步研究。

    2.3 SP細(xì)胞表型

    SP細(xì)胞是具有CSC特性的一類細(xì)胞,根據(jù)SP細(xì)胞表型分離純化LCSC是目前的主要方法。其內(nèi)膜廣泛表達(dá)有ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(ATP-binding cassette transporter,ABC transporter),主要包括ABCB1(P-糖蛋白,MDR1),ABCC1-5(多藥耐藥蛋白,MRP1-5)和ABCG2(乳腺癌耐藥蛋白,BRCP1)等[17]。Ho等[18]從H460、H23、HTB-58、A549、H441、H2170六種肺腫瘤細(xì)胞系中分離出的SP細(xì)胞中均高表達(dá)ABCG2,因此ABCG2被認(rèn)為是SP的主要表型。研究證明,ABCG2在結(jié)腸癌、肝癌、肺癌等腫瘤中均可作為CSC標(biāo)志物[19]。ABCG2作為膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,可利用ATP水解產(chǎn)生的能量將結(jié)構(gòu)上與其不相關(guān)的小分子(例如細(xì)胞毒化療藥物)泵出細(xì)胞,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低[20]。因此,腫瘤細(xì)胞的MDR現(xiàn)象可能與SP細(xì)胞的表達(dá)相關(guān)。

    3 LCSC的相關(guān)信號(hào)通路

    研究表明,正常組織干細(xì)胞的自我更新以及分化能力均受到一些信號(hào)傳導(dǎo)通路的調(diào)控,它們失調(diào)或異常激活都會(huì)導(dǎo)致LCSC的形成和腫瘤的發(fā)生[21]。目前發(fā)現(xiàn)與LCSC關(guān)系密切的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要包括Wnt通路、Hedgehog通路和Notch通路等[4]。

    3.1 Wnt信號(hào)通路

    Wnt通路在哺乳動(dòng)物胚胎發(fā)育和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的形成過(guò)程中發(fā)揮重要的作用,還可以調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、增殖和運(yùn)動(dòng)以及參與多種組織的損傷再生過(guò)程。Wnt配體是一類分泌蛋白,與人類肺癌相關(guān)的Wnt配體主要有Wnt1、Wnt2、Wnt7a、Wnt5a。Wnt通路可分為β-連環(huán)蛋白依賴的經(jīng)典Wnt通路以及β-連環(huán)蛋白非依賴的非經(jīng)典Wnt通路[22]。在腫瘤細(xì)胞中β-連環(huán)蛋白的突變可以導(dǎo)致自身無(wú)法被磷酸化激活和泛素化降解,β-連環(huán)蛋白不僅可在胞漿內(nèi)大量聚集,還可進(jìn)入細(xì)胞核調(diào)控細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)調(diào)控相關(guān)的基因,導(dǎo)致細(xì)胞失控性增殖而致癌。Yang等[22]發(fā)現(xiàn),在順鉑耐藥的A549肺腺腫瘤細(xì)胞系中,Wnt5a可以通過(guò)其介導(dǎo)的非經(jīng)典Wnt通路增加ALDH陽(yáng)性LCSC的干細(xì)胞特性。

    3.2 Hedgehog信號(hào)通路

    Hedgehog信號(hào)通路在胚胎發(fā)育的早期發(fā)揮著極為重要的作用,同時(shí)它還與肺癌的發(fā)生發(fā)展息息相關(guān)。Hedgehog通路有三個(gè)同源基因:sonic hedgehog(Shh)、Indian hedgehog(Ihh)和desert hedgehog(Dhh),分別表達(dá)Shh、Ihh和Dhh三種蛋白;還有跨膜受體Patched(PTCH)和Smoothened(SMO),及其下游的轉(zhuǎn)錄因子為Gli (Gli1-3)[23]。Watkins等[24]發(fā)現(xiàn),Shh和Gli-1在肺的氣道上皮損傷修復(fù)中高度活躍,50%的SCLC患者腫瘤組織中有Shh和Gli-1表達(dá),但在NSCLC中僅有10%的表達(dá)。Katoh等[23]還發(fā)現(xiàn)Hedgehog通路可與Wnt通路共同誘導(dǎo)CD133和CD44等干細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá),促進(jìn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,還可使腫瘤細(xì)胞獲得干細(xì)胞特性和耐藥性[25]。

    3.3 Notch通路

    Notch是廣泛分布于多種細(xì)胞表面的短程通訊系統(tǒng)[26]。哺乳動(dòng)物中已發(fā)現(xiàn)了四個(gè)相關(guān)受體(Notch1~4),以及兩個(gè)配體家族(Delta樣和Jagged樣)。它對(duì)于胚胎生長(zhǎng)過(guò)程和正常成體干細(xì)胞中細(xì)胞的增殖和分化至關(guān)重要,已在SCLC和NSCLC中觀察到Notch信號(hào)傳導(dǎo)失調(diào)可促進(jìn)CSC的產(chǎn)生和維持[27]。Westhoff等[28]發(fā)現(xiàn),在NSCLC中,約1/3的樣本存在著Notch通路的變異,并確定兩種變異類型:Numb表達(dá)的缺失和Notch1功能獲得性突變。Numb被認(rèn)為是Notch信號(hào)通路的安全裝置,Numb基因的缺失、突變都可激活Notch通路而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。Notch通路和多種轉(zhuǎn)錄因子之間的交流可加強(qiáng)EMT的過(guò)程,使NSCLC獲得更高的運(yùn)動(dòng)性、侵襲力及代謝活力。Sullivan等[17]發(fā)現(xiàn),利用γ-促分泌酶抑制劑MRK-003阻斷該信號(hào)可以導(dǎo)致肺癌ALDH+細(xì)胞顯著減少,并伴有腫瘤細(xì)胞增殖能力降低,在體內(nèi)外均抑制了腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)并增加腫瘤細(xì)胞的凋亡,這提示Notch通路可以作為L(zhǎng)CSC靶向治療的潛在靶點(diǎn)。

    4 治療

    肺癌的傳統(tǒng)治療方式是手術(shù)治療,輔之以順鉑、卡鉑以及奈達(dá)鉑等藥物進(jìn)行化療。在化療初期,患者的定位率以及5年生存率均明顯增加。尤其是SCLC的患者,他們對(duì)化療藥物極其敏感。在晚期SCLC患者中,與非鉑基藥物相比,用鉑基藥物治療的患者年生存率可提高5%[29]。但隨之而來(lái)的是各種先天或后天的耐藥,限制了化療的治療效果。對(duì)目前傳統(tǒng)的肺癌治療具有耐藥性的患者來(lái)說(shuō),他們的有效治療不僅要針對(duì)異質(zhì)性的腫瘤細(xì)胞,更重要的是針對(duì)肺癌微環(huán)境中的CSC。因此,CSC標(biāo)記不僅可能有助于識(shí)別和隔離這些腫瘤干細(xì)胞亞群,還可以提供特定的靶向治療。

    4.1 針對(duì)肺癌干細(xì)胞標(biāo)志物的靶向治療

    CSC中存在多種小RNA(MicroRNA,miRNA)的異常表達(dá),其中miR-34a可抑制腫瘤細(xì)胞,其類似物可能成為抗腫瘤藥物[30]。靶向miRNA,其靶標(biāo)可構(gòu)成一種或者多種CSC標(biāo)志物,能夠降低肺癌中的藥物耐藥性,從而顯著提高患者的治愈率和5年生存率[29]。研究發(fā)現(xiàn),敲除CD133+細(xì)胞中oct-4的表達(dá),可明顯抑制腫瘤浸潤(rùn),阻斷CD133+細(xì)胞形成球體并促進(jìn)這些細(xì)胞分化為CD133-,增加CD133+細(xì)胞的放化療效果。另外,Xia等[31]發(fā)現(xiàn)抑制ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體可以減少表達(dá)SP標(biāo)志物細(xì)胞的耐藥性。但ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體在正常細(xì)胞中也有表達(dá),這些正常干細(xì)胞的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)體具有正常的生理作用。因此,針對(duì)性的抑制CSC中表達(dá)的ABC成員可能是更有效的途徑。

    4.2 針對(duì)信號(hào)通路的靶向治療

    研究發(fā)現(xiàn)Wnt-β-catenin途徑在一些腫瘤的耐藥性和腫瘤原性中發(fā)揮作用,抑制Wnt-β-catenin途徑可能是一種靶向CSC的策略[32]。Sullivan[17]和Liu等[33]發(fā)現(xiàn),利用γ-促分泌酶抑制劑MRK-003和DAPT(GSI-IX)阻斷Notch信號(hào)通路,在體內(nèi)外均可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,且GSI可顯著增強(qiáng)順鉑的療效。另外,Shh信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑對(duì)不同類型的腫瘤有治療價(jià)值,但Shh抑制劑對(duì)腫瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用。

    4.3 抑制EMT

    EMT過(guò)程對(duì)腫瘤細(xì)胞的入侵和轉(zhuǎn)移發(fā)揮重要作用,上述的一些信號(hào)通路會(huì)激活肺癌EMT過(guò)程,使腫瘤細(xì)胞獲得干細(xì)胞特性和耐藥性[34]。因此,抑制EMT過(guò)程也是治療肺癌的一種策略。該過(guò)程與高表達(dá)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor,HGF)的肺癌不良預(yù)后有關(guān),HGF是Met受體(EMT的有效誘導(dǎo)劑)的天然配體。當(dāng)使用抑制劑PHA-665752和PF-2341066(克唑替尼)阻斷Met磷酸化時(shí),該表型可以逆轉(zhuǎn),從而為化療耐受的SCLC提供新的治療靶點(diǎn)[35]??诉蛱婺崾且环N雙重Met/ALK抑制劑,對(duì)攜帶微管蛋白樣4-間變性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合蛋白的患者有明顯的益處[36]。此外,該化合物可以增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性[36]。

    5 結(jié)論與展望

    由于肺癌的高發(fā)病率以及高死亡率,對(duì)于肺癌治療的突破迫在眉睫。關(guān)于傳統(tǒng)的肺癌治療,如手術(shù)、放療、化療以及靶向治療都是通過(guò)各種方式減少腫瘤細(xì)胞的數(shù)量,但是由于多藥耐藥的產(chǎn)生,其治愈率較低,且容易復(fù)發(fā)或者轉(zhuǎn)移。腫瘤干細(xì)胞學(xué)說(shuō)的提出為肺癌提供了更為有效的治療策略,從耐藥發(fā)生的根源解決問(wèn)題。但是由于一些干細(xì)胞標(biāo)志物不止存在于LCSC中,特異性低,所以很難識(shí)別治療靶點(diǎn)。其次,LCSC和正常干細(xì)胞存在一些相似的功能及通路,在治療時(shí)也難以區(qū)分。總之,LCSC理論上雖提供了新的思路,但由此帶來(lái)的挑戰(zhàn)也不容小覷,只有不斷深入探究才能更新肺癌的治療方法,提高肺癌患者的生存率。

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