甘油對(duì)冰凍解凍紅細(xì)胞質(zhì)量的影響觀察

劉利俊

（內(nèi)蒙古烏蘭察布市中心血站成分科，內(nèi)蒙古 烏蘭察布 012000）

?基礎(chǔ)研究?

甘油對(duì)冰凍解凍紅細(xì)胞質(zhì)量的影響觀察

劉利俊

（內(nèi)蒙古烏蘭察布市中心血站成分科，內(nèi)蒙古 烏蘭察布 012000）

目的觀察甘油對(duì)冰凍解凍紅細(xì)胞質(zhì)量的影響。方法 選取保存于2～6℃RH陰性去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞10袋，-80℃冰凍并予ACP215全自動(dòng)血細(xì)胞處理儀解凍，根據(jù)不同方法分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組，前者5袋冰凍解凍去甘油，后者5袋不去甘油，觀察冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量指標(biāo)情況。結(jié)果兩組冰凍解除去甘油紅細(xì)胞中甘油殘余量、游離血紅蛋白濃度和血紅蛋白含量對(duì)比；差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)為：甘油殘余量≤10 g/L；游離血紅蛋白濃度≤1 g/L；血紅蛋白≥16 g/L。結(jié)論制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)均符合，且可為臨床搶救獲取更多時(shí)間。

甘油；冰凍解凍紅細(xì)胞質(zhì)量；影響

隨著近年來(lái)我國(guó)廣泛開(kāi)展成分輸血，Rh（D）陰性血用量隨之增長(zhǎng)。超低溫甘油化冰凍保存紅細(xì)胞是血站貯備，若臨床急需可及時(shí)予以解凍洗滌，很大程度上爭(zhēng)取更多的搶救時(shí)間[1]。甘油化制備冰凍解凍紅細(xì)胞為長(zhǎng)時(shí)間保存Rh（D）陰性血理想方案，本研究予ACP215全自動(dòng)血細(xì)胞處理儀對(duì)2種冰凍紅細(xì)胞予以去甘油洗滌，且檢測(cè)2種方案制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量，獲取滿(mǎn)意效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞、一次性無(wú)菌空袋、9%Nacl、6%羥乙基淀粉溶液、0.9%Nacl一次性注射器、、一次性輸血器、分漿夾、掛鉤、止血鉗。無(wú)菌接管機(jī)、電子秤、DL-6M離心機(jī)、脫色搖床、血液分漿夾、高頻熱合機(jī)。

1.2 方法

取6 d內(nèi)紅細(xì)胞懸液10袋，2500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，分離上清液并移到六珠袋內(nèi)，加入甘油，每分鐘振動(dòng)60次，直至甘油加完排空袋內(nèi)空氣；甘油化細(xì)胞置入室溫下半小時(shí)后，離心取100 mL上清液，冰凍保存于-80℃冰箱內(nèi)，5袋甘油化紅細(xì)胞不去甘油，另外5袋甘油化冰凍紅細(xì)胞，切勿疊加放置。保存30 d后將冰凍紅細(xì)胞取出置入37～40℃恒溫水浴箱內(nèi)熔化，血袋全部浸沒(méi)于水，輕輕振動(dòng)使其快速融化，不得用手搓捏未融化的紅細(xì)胞，直至冰凍紅細(xì)胞完全解凍；予ACP215全自動(dòng)血細(xì)胞處理儀選取去甘油程序，將裝有9%NaCl洗滌溶液袋用無(wú)菌接管機(jī)通過(guò)輸液器與三珠袋相連，調(diào)整輸液器滴速，注入9 %NaCl溶液80 mL，20分鐘加完，平衡5分鐘。再加入100 mL羥乙基淀粉溶液，先慢后快，10分鐘加完，平衡5分鐘。以2500轉(zhuǎn)/分離心8分鐘，去除上清。滴加100 mL羥乙基淀粉溶液，10分鐘內(nèi)加完，平衡5分鐘。再加入0.9%NaCl溶液150 mL，30分鐘加完。2500轉(zhuǎn)/分，離心8分鐘，去除上清。滴加0.9 %NaCl溶液150 mL，加至一半時(shí)，平衡5分鐘。再調(diào)整滴速至90滴/分，20分鐘加完，2500轉(zhuǎn)/分，離心8分鐘，去除上清。滴加0.9 %NaCl溶液100 mL，2500轉(zhuǎn)/分，離心8分鐘，去除上清。洗滌上清液應(yīng)無(wú)明顯溶血跡象，最后加入0.9 %NaCl 溶液100 mL，懸浮后供臨床使用。最后予鄰聯(lián)甲苯胺法對(duì)游離血紅蛋白進(jìn)行檢測(cè)，血紅蛋白含量予血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)，甘油殘余量予過(guò)碘酸鈉法檢測(cè)，B-D細(xì)菌培養(yǎng)與檢測(cè)系統(tǒng)予以細(xì)菌培養(yǎng)、檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)與評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

觀察并對(duì)比2組冰凍解除去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量，包括甘油殘余量、游離血紅細(xì)胞含量、血紅蛋白含量。分析質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，甘油殘余量≤10 g/L，殘余白細(xì)胞≤1*107/U，游離血紅細(xì)胞≤1 g/L，血紅蛋白16 g/L[2]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以“s”表示，采用t檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 對(duì)比兩組冰凍解除去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量指標(biāo)

兩組冰凍解除去甘油紅細(xì)胞中甘油殘余量、游離血紅蛋白濃度、血紅蛋白含量對(duì)比；差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 對(duì)比兩組冰凍解除去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量指標(biāo)（s，g/L）

表1 對(duì)比兩組冰凍解除去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量指標(biāo)（s，g/L）

組別（n=袋數(shù)） 甘油殘余量 游離血紅蛋白濃度 血紅蛋白含量實(shí)驗(yàn)組（n=5） 6.57±1.41 0.33±0.12 16.52±0.48對(duì)照組（n=5） 6.35±1.27 0.34±0.14 16.71±0.52

2.2 質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

甘油殘余量：≤10 g/L；游離血紅蛋白濃度：≤1 g/L；血紅蛋白：≥16 g/L。

3 討 論

冷凍保存RH陰性血為保存稀有血液唯一途徑，經(jīng)大量臨床研究均獲得認(rèn)可，但制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的環(huán)節(jié)較為復(fù)雜[3，4]。作為采供血機(jī)構(gòu)，于單位或者街頭開(kāi)展血液收集與獻(xiàn)血招募時(shí)，因?yàn)槭艿綍r(shí)間、環(huán)境等外部因素的制約，針對(duì)獻(xiàn)血者RH血型不予以檢測(cè)，僅當(dāng)血液收集至血站后再采取相關(guān)儀器設(shè)備予以檢測(cè)，最終確定獻(xiàn)血者血型是否為RH型[5]。因?yàn)榕R床通常較少使用RH陰性血液，故若血站6℃保存RH陰性血液比較多的時(shí)候，且可能存在A、B、O血型等不同情況，從而極易導(dǎo)致血液過(guò)期報(bào)廢[6]。紅細(xì)胞冰凍技術(shù)發(fā)明、應(yīng)用，可有效解決上述問(wèn)題，不僅避免采集RH陰性血液因臨床未及時(shí)使用而導(dǎo)致過(guò)期報(bào)廢情況的發(fā)生，而且可確保臨床需要RH陰性血液時(shí)及時(shí)供應(yīng)。紅細(xì)胞保存于-80℃冰凍可延長(zhǎng)保存時(shí)間，并提高保存效果，為目前臨床最有效的一種長(zhǎng)期保存紅細(xì)胞方案，同時(shí)屬于稀有血型自身輸血重要手段。本研究采取的ACP215全自動(dòng)細(xì)胞處理儀已有效代替以往手工制備法，不僅避免消耗時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，而且減小污染風(fēng)險(xiǎn)。ACP215全自動(dòng)處理儀制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞為全封閉式，其制備時(shí)間比較短，僅耗時(shí)60 min，可有效縮短患者搶救等待時(shí)間，降低血液污染率與勞動(dòng)強(qiáng)度，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)血站規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化及自動(dòng)化制備模式。經(jīng)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：2組冰凍解除去甘油紅細(xì)胞中甘油殘余量、游離血紅蛋白濃度、血紅蛋白含量對(duì)比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)為甘油殘余量：≤10 g/L；游離血紅蛋白濃度：≤1 g/L；血紅蛋白：≥16 g/L提示冰凍解凍去甘油與不去甘油均與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)相符合，但冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞可為臨床搶救獲取更多時(shí)間。分析原因可能為：甘油是紅細(xì)胞內(nèi)低溫保護(hù)劑，能夠有效降低紅細(xì)胞于冷凍時(shí)電解質(zhì)濃度下降，避免細(xì)胞膜脂蛋白復(fù)合物發(fā)生變性，以及類(lèi)脂質(zhì)丟失，進(jìn)而防止發(fā)生溶血情況。

總結(jié)上文，冰凍紅細(xì)胞冰凍前不去甘油與去除甘油，制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)均符合，但后者能夠?yàn)榕R床搶救獲取更多時(shí)間。

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ISSN.2095-8242.2017.069.13474.02

本文編輯：趙小龍