益智仁-烏藥醚提取物對(duì)腎陽虛多尿模型大鼠血環(huán)磷酸腺苷和醛固酮水平的影響

朱 葉 謝毅強(qiáng) 尹德輝

(海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，海南 ?？?571199)

益智仁-烏藥醚提取物對(duì)腎陽虛多尿模型大鼠血環(huán)磷酸腺苷和醛固酮水平的影響

朱 葉 謝毅強(qiáng) 尹德輝

(海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，海南 ?？?571199)

目的觀察益智仁-烏藥醚提取物對(duì)腎陽虛多尿模型大鼠的血環(huán)磷酸腺苷(cAMP)和醛固酮(ALD)水平的影響。方法應(yīng)用腺嘌呤(250 mg/kg)造模，給予大鼠灌胃4 w，分別給予陽性對(duì)照藥厄貝沙坦、益智仁-烏藥醚提取物治療4 w，觀察益智仁-烏藥醚提取物對(duì)大鼠cAMP和ALD的影響。結(jié)果與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血漿cAMP含量顯著升高(Plt;0.01)，血清ALD含量明顯降低(Plt;0.01)；益智仁-烏藥醚提取物高劑量組血漿cAMP含量較模型組明顯升高(Plt;0.05)，血清ALD含量較模型組明顯升高(Plt;0.05)。結(jié)論益智仁-烏藥醚提取物能夠提高腎陽虛多尿模型大鼠血漿cAMP和血清ALD水平。

腎陽虛多尿模型；益智仁；烏藥；環(huán)磷酸腺苷(cAMP)；醛固酮(ALD)

益智是海南四大南藥之一，配伍烏藥具有溫補(bǔ)腎陽、溫化腎氣、減少尿量的作用，臨床上常用于腎氣虛寒的遺精、早泄、尿頻、遺尿等癥。課題組前期采用腎陽虛多尿大鼠模型已證明“益智-烏藥”藥對(duì)提取物具有縮尿作用，且其石油醚部位顯示出較好的效果，優(yōu)于其他部位〔1〕。本實(shí)驗(yàn)擬將益智仁-烏藥醚提取物作用于腎陽虛多尿大鼠模型，探討其對(duì)血漿環(huán)磷酸腺苷(cAMP)和血清醛固酮(ALD)水平的影響，研究益智配伍烏藥補(bǔ)腎縮尿的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康SD大鼠，SPF級(jí)，不拘雌雄，體重180～220 g，長沙市天勤生物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK(湘)2009-0012。室內(nèi)25℃，自由飲食水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w后，無不良反應(yīng)即進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。

1.2試劑與儀器 益智和烏藥購自?？谑袊鹛冕t(yī)藥公司，經(jīng)海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院田建平副教授鑒定益智為姜科山姜屬植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果實(shí)；烏藥是樟科植物烏藥Lindera aggregate(Sims)Kosterm的干燥塊根。

腺嘌呤(上海諾泰化工有限公司，生產(chǎn)批號(hào)20110312)；厄貝沙坦(安博維，賽諾菲杭州制藥有限公司，批號(hào)：2A205)；離心機(jī)；AF240電子天平(中國瑞士梅勒公司)；酶標(biāo)儀(上海閃普)；大鼠cAMP ELISA檢測(cè)試劑盒(上海寶曼生物科技有限公司，產(chǎn)品編號(hào)：CK-E90861M)；大鼠ALD ELISA檢測(cè)試劑盒(上海寶曼生物科技有限公司，產(chǎn)品編號(hào)：CK-E92888M)。

1.3動(dòng)物造模及給藥 造模參考文獻(xiàn)〔2〕方法，SD大鼠48只隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、去氨加壓素(10 mg/kg)組、益智仁-烏藥醚提取物高、中、低劑量(20、10、5 g·kg-1·d-1)組，每組8只。根據(jù)前期預(yù)實(shí)驗(yàn)〔1〕，益智烏藥的提取物選擇石油醚部位進(jìn)行試驗(yàn)。除正常對(duì)照組以外，其余各組大鼠每天上午均給予腺嘌呤(250 mg/kg)灌服，連續(xù)4 w。從實(shí)驗(yàn)第3周開始，益智仁-烏藥醚提取物高、中、低劑量組和去氨加壓素組分別按1 ml/100 g連續(xù)灌胃給藥干預(yù)4 w，正常對(duì)照組和模型組給予等量生理鹽水。實(shí)驗(yàn)6 w后，各大鼠眼眶靜脈取血，分別得血清和血漿。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1一般狀態(tài) 正常對(duì)照組大鼠活潑好動(dòng)，毛發(fā)光澤如初。模型組大鼠逐漸食量減少，體重減輕，畏寒蜷縮，毛發(fā)枯燥，多尿；與模型組比較，益智仁-烏藥高劑量組和去氨加壓素組的大鼠活動(dòng)力較強(qiáng)，毛發(fā)較光澤，體重略有增加。

2.2益智仁-烏藥醚提取物對(duì)腎陽虛大鼠血漿cAMP、血清ALD的影響 與正常對(duì)照組比較，腎陽虛多尿模型大鼠血漿cAMP含量顯著升高血清ALD含量顯著；與模型組比較，去氨加壓素組與益智仁-烏藥醚提取物高劑量組cAMP含量升高血清ALD含量升高(Plt;0.05)，見表1。

表1 益智仁-烏藥醚提取物對(duì)腎陽虛多尿大鼠血漿cAMP及血清ALD水平的影響

與正常對(duì)照組比較：1)Plt;0.01；與模型組比較：2)Plt;0.05

3 討 論

藥對(duì)又稱對(duì)藥，是臨床中藥配伍中相對(duì)固定的兩味藥物的搭配形式，以協(xié)同增強(qiáng)療效或相互糾正偏性、緩和毒性為目的，古有縮泉丸一方，即是烏藥配益智仁加上山藥，其中益智仁性溫，味辛，具有暖腎固精縮尿、溫脾止瀉攝唾的功能，用于腹中冷痛，口多唾涎，腎虛遺尿，小便頻數(shù)，遺精白濁等。益智仁的生物活性多樣，神經(jīng)保護(hù)作用、抗炎作用和抗老年癡呆作用是近年來的研究熱點(diǎn)〔3〕；烏藥性辛，溫，具有行氣止痛、溫腎散寒的功效，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，烏藥對(duì)免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及抗病毒等方面具有廣泛的藥理活性〔4〕。二者配伍具有溫腎祛寒，縮尿止遺的功效，用于治療下元虛冷，小便頻數(shù)等癥，治療效果顯著〔5〕。

腎陽虛多尿大鼠模型是通過腺嘌呤對(duì)腎臟的直接毒性作用，出現(xiàn)類似腎陽虛的癥候表現(xiàn)，模型表現(xiàn)符合中醫(yī)腎陽虛典型證候，且造模成功后具有明顯尿量增加，是比較公認(rèn)動(dòng)物模型〔6〕。實(shí)驗(yàn)所用的去氨加壓素片(彌凝)為臨床治療遺尿、小便頻數(shù)的常用藥物，可以通過激活腎臟集合小管V2受體發(fā)揮抗利尿作用，療效肯定，但其作用僅限于影響水的再吸收，下調(diào)尿量而起到止遺的作用，且價(jià)格昂貴，有一定的副作用〔7〕。cAMP在水通道蛋白(AQP)2調(diào)節(jié)及細(xì)胞膜的水滲透通透性方面起著重要的調(diào)節(jié)作用〔8〕。cAMP有助于磷酸化AQP2，從而增強(qiáng)其轉(zhuǎn)運(yùn)水的能力。ALD是調(diào)節(jié)機(jī)體水鹽代謝的重要物質(zhì)，促進(jìn)機(jī)體保鈉排鉀，維持體液容量和滲透壓的平衡，與多尿的產(chǎn)生關(guān)系密切，血中ALD水平升高時(shí)鈉重吸收增多，排出減少，尿液減少〔9〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，益智仁-烏藥醚提取物可以增加實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血中cAMP、ALD濃度，從而可增強(qiáng)其轉(zhuǎn)運(yùn)水的能力，水的重吸收增加，起到減少尿量的效果，推測(cè)其可能為益智配伍烏藥補(bǔ)腎縮尿的分子機(jī)制。

1尹德輝，韋 祎，謝毅強(qiáng)，等.“益智-烏藥”藥對(duì)抗糖尿病腎病有效部位的篩選〔J〕.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2015；26(3)：579-81.

2鄭平東，朱燕俐，丁名城，等.腺嘌呤誘發(fā)“腎陽虛”動(dòng)物模型的研制〔J〕.中國醫(yī)藥學(xué)報(bào)，1990；5(8)：228-33.

3陳 萍，王培培，焦?jié)烧?，?益智仁的化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展〔J〕.現(xiàn)代藥物與臨床，2013；28(4)：617-23.

4閆利利，王金芳，李秋月，等.烏藥的化學(xué)成分研究〔J〕.中國藥業(yè)，2013；22(2)：16-7.

5鄧義衛(wèi)，韋國麟.縮泉丸治療遺尿癥臨床應(yīng)用和實(shí)驗(yàn)研究概況〔J〕.黑龍江醫(yī)藥，2012；25(1)：129-32.

6彭 成.中醫(yī)藥動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法學(xué)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：287.

7唐 卓，卿國忠，劉玲玲，等.醋酸去氨加壓素致抗利尿激素分泌不當(dāng)綜合征3例〔J〕.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2013；7(17)：154-6.

8Maurice DH，Palmer D，Tilley DG，etal.Cyclic nucleotide phosphodiesterase activity，expression，and targeting in cells of the cardiovascular system〔J〕.Mol Pharmacol，2003；64(3)：533-46.

9莫?jiǎng)γ?，劉唐威，黃榮杰，等.不同性別原發(fā)性醛固酮增多癥的臨床特點(diǎn)分析〔J〕.重慶醫(yī)學(xué)，2013；42(4)：447-9.

〔2016-12-21修回〕

(編輯 李相軍)

EffectoftheetherextractoftheYizhiren-WuyaoonCamp,ALDlevelsinpolyuriamodelofYang-deficiencyrats

ZHUYe,XIEYi-Qiang,YINDe-Hui.

HainanMedicalCollege,Haikou571199,Hainan,China

ObjectiveTo observe the influence of ether extract of the Yizhiren-Wuyao on the levels of cyclic adenosine monophosphate(cAMP)，aldosterone(ALD) in polyuria model of Yang-deficiency rats.MethodsThe model rats were induced by given adenine (250 mg/kg). After irrigation for 4 w, the levels of cAMP and ALD in the four groups were measured.ResultsCompared with those of normal control group, the cAMP level was significantly elevated, the ALD level was significantly decreased in model group(Plt;0.01); the levels of cAMP and ALD in Yizhiren-Wuyao high-dose group were significantly higher compared with those of model group(Plt;0.05).ConclusionsExtract of the Yizhiren-Wuyao could increase plasma cAMP and ALD levels in polyuria model of yang-deficiency rats.

Polyuria model of Yang-deficiency；Yizhiren；Obtusiloba； cAMP；ALD

R287

A

1005-9202(2017)22-5498-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.22.006

國家自然科學(xué)基金(81473618、81360586)

謝毅強(qiáng)(1972-)，男，教授，醫(yī)學(xué)博士，主要從事中醫(yī)藥防治內(nèi)分泌及代謝疾病的臨床與實(shí)驗(yàn)研究。

朱 葉(1976-)，女，教授，醫(yī)學(xué)博士，主要從事中醫(yī)藥防治內(nèi)分泌疾病的臨床與實(shí)驗(yàn)研究。