不同貯藏年限廣陳皮對(duì)兔離體腸肌運(yùn)動(dòng)的影響及祛痰作用研究

劉素娟，王智磊，伍清芳，張?chǎng)?，潘歡歡，陳鴻平，劉友平

·藥理毒理·

不同貯藏年限廣陳皮對(duì)兔離體腸肌運(yùn)動(dòng)的影響及祛痰作用研究

劉素娟，王智磊，伍清芳，張?chǎng)?，潘歡歡，陳鴻平，劉友平

目的：研究比較不同貯藏年限廣陳皮對(duì)家兔離體腸肌的影響及祛痰作用，探索廣陳皮臨床使用的最佳貯藏年限。方法：用生物機(jī)能分析系統(tǒng)記錄不同貯藏年限廣陳皮對(duì)正常腸肌及加入工具藥后腸肌的影響，采集腸肌的振幅與頻率，計(jì)算出抑制率；小鼠連續(xù)7 d灌胃給藥，末次給藥后30 min，用酚紅法檢測(cè)小鼠的祛痰作用。結(jié)果：不同貯藏年限廣陳皮對(duì)正常腸肌均有明顯的促進(jìn)作用，貯藏1年作用最強(qiáng)，并能使先用阿托品而緊張性降低的兔離體腸肌進(jìn)一步松弛，振幅進(jìn)一步減弱。當(dāng)年、1年、3年、5年廣陳皮低劑量組小鼠氣道酚紅的排泌量均高于蒸餾水對(duì)照組及鹽酸氨溴索組，且5年廣陳皮低劑量組具有顯著性差異（p＜0.05）。結(jié)論：不同貯藏年限廣陳皮對(duì)兔離體腸肌運(yùn)動(dòng)及祛痰作用存在差異，并以貯藏1年、5年的作用為佳，因此可以根據(jù)不同的治療目的選擇不同貯藏年限的廣陳皮。

廣陳皮；貯藏年限；離體腸??；祛痰；陳用

陳皮為蕓香科植物橘(Citrus reticu1ataB1anco)及其栽培變種的干燥成熟果皮，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，具有理氣健脾，燥濕化痰之功[1]，臨床上主要用于胸脘脹滿、咳嗽痰多、少食吐瀉。陳皮為中藥“六陳”之一，傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為陳皮“陳久者良”[2～3]，一般藥用以2～3年陳皮為主，道地藥材“新會(huì)陳皮”貯藏長(zhǎng)達(dá)數(shù)十年[4]。年份越久的陳皮標(biāo)價(jià)越高，因此市場(chǎng)有用新皮充當(dāng)陳皮銷售使用，但是否陳皮越陳越好，目前說(shuō)法不一[5～8]，針對(duì)這一現(xiàn)狀，本研究選用道地產(chǎn)區(qū)新會(huì)陳皮研究不同貯藏年限陳皮的藥效是否存在差異，從藥效學(xué)證實(shí)陳皮陳用是否具有一定科學(xué)內(nèi)涵。

1 材料

1.1 動(dòng)物 普通健康家兔，雌雄兼用，體重2.0-2.5 kg；昆明種健康小鼠，雌雄各半，體重18-25 g，均由四川省達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK(川)2015-030。

1.2 儀器

CW-3型顯示平滑肌槽（上海繼德教學(xué)實(shí)驗(yàn)器械廠）、BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）、壓力換能器等；R680酶標(biāo)儀（上海精科儀器廠）。

1.3 藥物

陳皮Citrus reticu1ata B1anco購(gòu)于廣東新會(huì)區(qū)新寶堂公司，分別取各貯藏年限廣陳皮藥材粉末，加入8倍量水，回流提取1.5 h，過(guò)濾，濾渣加入6倍量水回流提取1 h，合并濾液，濃縮至0.8 g?mL-1，一部分分別稀釋成0.4 g?mL-1、0.5 g?mL-1藥液，冰箱冷藏備用；1×10-5g?mL-1氯化乙酰膽堿溶液（上海三愛思試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20061130）；0.5 mg?mL-1阿托品注射液（山東天福制藥廠，批號(hào)0909271）；臺(tái)式液（每1000 mL臺(tái)式液含氯化鈉8 g，氯化鉀0.2 g，七水硫酸鎂0.26 g，磷酸二氫鈉0.065 g，碳酸氫鈉1 g，氯化鈣0.2 g，葡萄糖1 g）；鹽酸氨溴索注射液（Boehringer Ingelheim Espana，S.A.公司生產(chǎn)，批號(hào)527251）。

2 方法

2.1 不同貯藏年限廣陳皮對(duì)兔離體腸肌運(yùn)動(dòng)的影響

取家兔猛擊其頭枕部致昏，迅速剖開腹腔，取近幽門端十二指腸，置冷臺(tái)氏液中。沿腸壁剪去腸系膜，將腸管剪成1.5-2 cm的小段備用。調(diào)節(jié)恒溫平滑肌槽，使水溫保持在 ( 37±0.5)℃。將壓力換能器與BL-420F 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)連接。取兔腸一段，兩端各穿一線，其中一線固定于L型通氣管上，放入有50 mL臺(tái)式液的浴槽內(nèi)，固定L型同器官，并調(diào)節(jié)恒溫平滑肌槽，緩慢通入氣泡( 2個(gè)氣泡/s) 。腸肌另一端與壓力換能器相連，加1 g負(fù)荷，打開BL-420F生物機(jī)能試驗(yàn)系統(tǒng)，待腸肌運(yùn)動(dòng)恢復(fù)正常后，記錄一段腸管正?；顒?dòng)曲線，開始滴加給藥。采用分離加藥的方法，即加入一種被檢藥液后觀察5 min，然后用37℃的臺(tái)式液多次沖洗，待肌條的活動(dòng)基本恢復(fù)穩(wěn)定后（相隔至少20 min）再加入另一種藥。加入工具藥3 min后再加入被檢藥液。加入被檢藥液的量均為0.2 mL，藥液的濃度指溶于肌槽中50 mL臺(tái)式液后的最終濃度。

2.2 不同貯藏年限廣陳皮祛痰作用研究

昆明種小鼠144只，隨機(jī)分為12組，每組12只，分別為蒸餾水空白組、鹽酸氨溴索組、不同貯藏年限高劑量組（0.8 g?mL-1）、低劑量組（0.4 g?mL-1）。給藥組分別按表所列劑量灌胃給藥（0.2 mL/10g）、空白組給予等量蒸餾水，每日一次，連續(xù)灌胃7 d。末次給藥前各組小鼠禁食12 h、末次給藥后30 min，小鼠腹腔注射5%酚紅溶液0.1 mL/10g，30 min后脫頸椎處死動(dòng)物，暴露氣管，剝?nèi)夤苤車M織，剪下自甲狀軟骨下至支氣管分支處的一段氣管，浸入盛有2 mL5%NaHCO3溶液的試管中，振搖并放置過(guò)夜，以將其中的酚紅充分洗出，3000 r?min-1離心10min，得到透明上清液，546 nm處測(cè)定OD值。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

以正常腸肌或給予工具藥（氯化乙酰膽堿溶液和硫酸阿托品溶液）后的收縮平均振幅與頻率之乘積與給藥后各段腸肌的收縮平均振幅與頻率之乘積之差，再與正常腸肌或給予工具藥后的腸肌收縮平均振幅與頻率之乘積之比計(jì)算抑制率。應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，符合正態(tài)分布用單因素方差分析或獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布采用非參數(shù)檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 結(jié)果

4.1 不同貯藏年限廣陳皮對(duì)兔離體腸肌運(yùn)動(dòng)的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1-3。表1結(jié)果表明，不同貯藏年限對(duì)腸肌表現(xiàn)均為促進(jìn)作用，1年廣陳皮的作用最強(qiáng)，2、3、5年之間沒有顯著性差異。表2結(jié)果表明，2年廣陳皮可拮抗乙酰膽堿引起的兔離體十二指腸痙攣性收縮，其余可進(jìn)一步增強(qiáng)乙酰膽堿引起的離體腸肌收縮強(qiáng)度。不同組別差異不顯著。表3結(jié)果表明，1年能使先用阿托品而緊張性降低的兔離體腸肌進(jìn)一步松弛，振幅進(jìn)一步減弱，說(shuō)明1年能協(xié)同阿托品對(duì)兔離體小腸的抑制作用。其余組別對(duì)阿托品引起的兔離體腸機(jī)松弛作用呈現(xiàn)拮抗作用，5年作用最強(qiáng)。

表1 不同貯藏年限對(duì)正常家兔離體腸肌運(yùn)動(dòng)的影響(±s，n=3)

表1 不同貯藏年限對(duì)正常家兔離體腸肌運(yùn)動(dòng)的影響(±s，n=3)

組別濃度抑制率（%）1年3.33-188.90±0.67 2年3.33-35.88±0.19*

注：各組與1年比較，*P＜0.05

表2 不同貯藏年限對(duì)乙酰膽堿致家兔離體腸肌收縮的影響(±s,n=3)

表2 不同貯藏年限對(duì)乙酰膽堿致家兔離體腸肌收縮的影響(±s,n=3)

組別濃度抑制率（%）1年3.33-0.43±0.18 2年3.3315.27±0.37 3年3.33-30.56±014 5年3.33-39.44±0.44

表3 不同貯藏年限對(duì)阿托品致家兔離體腸肌舒張的影響(±s,n=3)

表3 不同貯藏年限對(duì)阿托品致家兔離體腸肌舒張的影響(±s,n=3)

注∶各組與5年比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別濃度抑制率（%）1年3.331.32±0.28*2年3.33-2.41±0.15*3年3.33-9.55±0.03*5年3.33-42.9±0.04

4.2 祛痰作用

由表4知，當(dāng)年、1年、3年、5年低劑量酚紅排泌量高于蒸餾水及陽(yáng)性組，且5年低劑量具有顯著性差異。除當(dāng)年高低劑量組外，其他組高低劑量間差異不顯著。不同貯藏年限之間比較，5年低劑量與1年、2年具有顯著性差異，與當(dāng)年、3年低劑量不顯著?？梢?，當(dāng)年廣陳皮低劑量、3年廣陳皮低劑量與5年廣陳皮低劑量相比其他組，有較好的祛痰作用。

表4 不同貯藏年限廣陳皮對(duì)小鼠氣管酚紅排泌量的影響(±s,n=12)

表4 不同貯藏年限廣陳皮對(duì)小鼠氣管酚紅排泌量的影響(±s,n=12)

注：給藥組與空白比較，aP＜0.05，與陽(yáng)性組比較，bP＜0.05。

組別劑量（g?kg -1）氣管酚紅排泌量/A蒸餾水--0.30±0.09鹽酸氨溴索0.030.32±0.07當(dāng)年廣陳皮高劑量160.25±0.06低劑量80.36±0.06 1年廣陳皮高劑量160.30±0.05低劑量80.34±0.13 2年廣陳皮高劑量160.30±0.07低劑量80.28±0.04 3年廣陳皮高劑量160.28±0.01低劑量80.36±0.12 5年廣陳皮高劑量160.29±0.04低劑量80.46±0.20ab

5 討論

本研究結(jié)果表明不同貯藏年限陳皮對(duì)正常離體腸肌均表現(xiàn)為促進(jìn)作用，使振幅和頻率進(jìn)一步增大。使用阿托品后貯藏1年陳皮可使腸肌進(jìn)一步松弛，其余年限則表現(xiàn)為收縮強(qiáng)度增大，這與前人研究結(jié)果不盡一致[9～10]，但也有研究表明陳皮水煎液在使用阿托品后，能提高收縮強(qiáng)度[11]，陳皮提取物對(duì)在體動(dòng)物胃腸動(dòng)力具有促進(jìn)作用，而對(duì)離體腸管有一定的抑制作用[12]?？梢婈惼?duì)胃腸道運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)為雙向調(diào)節(jié)作用，即促進(jìn)和抑制作用。陳皮隨著貯藏年限增加，揮發(fā)性成分香茅醛等成分逐漸消失[13]，且其中的香茅醛與胃腸道運(yùn)動(dòng)密切相關(guān)[14]，本研究結(jié)果顯示陳皮隨著貯藏年限增加，促進(jìn)作用減弱，說(shuō)明正是陳皮中揮發(fā)性成分在貯藏過(guò)程散失，導(dǎo)致藥效的減弱。但貯藏5年陳皮的作用比2、3年要強(qiáng)，這可能是陳皮在長(zhǎng)久的貯藏過(guò)程中，黃酮類成分含量逐漸升高[15]，藥效物質(zhì)組分比例的緩慢改變，使得藥效發(fā)生了改變，也說(shuō)明陳皮對(duì)胃腸道的作用不僅僅以揮發(fā)性成分為基礎(chǔ)，也可能與黃酮類等其他成分有關(guān)。

對(duì)不同貯藏年限祛痰作用研究，證實(shí)陳皮確有祛痰作用，當(dāng)年、1年、3年祛痰作用相當(dāng)，以5年祛痰作用為佳。與他人研究結(jié)果一致[16]。研究報(bào)道隨貯藏時(shí)間延長(zhǎng)，陳皮中檸檬烯含量下降明顯[15]，而此成分與祛痰作用密切相關(guān)[14]，說(shuō)明隨著貯藏年限增加，陳皮的祛痰作用理應(yīng)降低，但本研究卻表明陳皮祛痰作用在增強(qiáng)，可能祛痰作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)并不僅僅是檸檬烯，是多成分綜合作用的結(jié)果，而不是單一成分作用的結(jié)果。

結(jié)合離體腸肌及祛痰作用的結(jié)果，看出不同貯藏年限陳皮藥效確實(shí)存在差異，1年與5年之間的差異最顯著，其中，1年廣陳皮對(duì)離體腸肌作用比其他年限強(qiáng)，祛痰作用5年廣陳皮比其他年限較佳。說(shuō)明陳皮陳久者良具有一定的科學(xué)道理。因此可以根據(jù)臨床需求選用不同貯藏年限的陳皮，而對(duì)于陳皮究竟是否陳用的研究應(yīng)不僅僅局限于某一單體成分，而是從中藥的整體性出發(fā)，對(duì)中藥指紋圖譜與藥效即譜效關(guān)系深入研究，闡釋陳皮陳用的科學(xué)內(nèi)涵。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)[S]. 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015∶191.

[2] 陶弘景.本草經(jīng)集注[M].昆明∶群聯(lián)出版社,1955∶360.

[3] 雷斅.雷公炮炙論.上?！蒙虾Ｖ嗅t(yī)學(xué)院出版社,1986∶52．

[4] DB44/T 604-2009.地理標(biāo)志產(chǎn)品新會(huì)陳皮[S].

[5] 王振財(cái),趙宏偉.“陳皮非陳不能入藥”質(zhì)疑[J].長(zhǎng)春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1998,14(69)∶47.

[6] 陶乃貴,張振英.中藥“六陳”并非陳者良[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2004,25(10)∶714.

[7] 李京生,付萬(wàn)敏.話說(shuō)陳藥及應(yīng)用[J].首都醫(yī)藥.2012,(19)∶40.

[8] 易倫朝,謝培山,梁逸曾,等. GC/MS和HPLC 對(duì)陳皮“陳久者良”的驗(yàn)證[J],中國(guó)藥學(xué)雜志,2005,40(21)∶1610.

[9] 趙祎姍,黃偉,王曉宇,陳鴻平,劉友平. 陳皮和青皮對(duì)兔離體腸肌運(yùn)動(dòng)的影響[J]. 遼寧中醫(yī)雜志,2011,(07)∶1451.

[10] 官福蘭,王如俊,王建華.陳皮及橙皮苷對(duì)離體腸管運(yùn)動(dòng)的影響[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2002,(02)∶65.

[11] 陳君.陳皮“行氣”功效物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D].湖南中醫(yī)藥大學(xué),2012.

[12] 張旭,紀(jì)忠岐,趙長(zhǎng)敏,等. 陳皮提取物對(duì)小鼠胃排空、腸推進(jìn)及家兔離體回腸平滑肌的影響[J].河南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2012,(01)∶12.

[13] 高蓓.廣陳皮黃酮類化合物和揮發(fā)油成分及其活性研究[D].華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2011.

[14] 羅歡,卞海,韓燕全,等.陳皮提取物多種藥效作用的譜效關(guān)系研究[J].山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2016,(05)∶22.

[15] 張?chǎng)?劉素娟,王智磊,等.模擬加速試驗(yàn)研究陳皮揮發(fā)性成分與黃酮類成分動(dòng)態(tài)變化規(guī)律[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2016,(11)∶1752.

[16] 楊錫倉(cāng),王曉莉,王雨靈,等.不同貯存年限的陳皮藥效比較[J].甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2001,18(4)∶22.

Study of the influence on contractile activity of rabbit intestinal muscle in vitro and expectorant action of Guang Chenpi of different storage period

/LIU Su-juan, WANG Zhi-lei, WU Qing-fang, ZHANG Xin, PAN Huan-huan, CHEN Hong-ping, LIU You-ping//(School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:The study compared the effect of Guang Chenpi of different storage period on rabbit intestinal musclein vitroand expectorant action, to explore the best storage period of Guang Chenpi for wide clinical use.Method:In vitrointestinal muscle experiment was carried out with biological function analysis system recording the in fluence of Guang Chenpi on normal intestinal muscle and the effect after the addition of tool drug. The amplitude and frequency of intestinal muscle were collected to calculate the inhibition rate. Mouse was intragastricly administered of drug for seven days. 30 min after the last treatment, the phenol red method was used to investigate the expectorant action in mice.Result:Guang Chenpi of different storage time promoted the activity of normal intestinal muscle and the medicine stored for 1 year showed the strongest effect, and relaxed the isolated rabbit intestinal muscle after atropine use,which according further reduced the amplitude. The phenol excretions in mice airway of Guang Chenpi low dose group of storage time (0, 1,3, 5 years) were higher than that of distilled water group and Ambroxol hydrochloride group. And 5 years Guang Chenpi group showed significant difference (P ＜ 0.05).Conclusion:Guang Chenpi of different storage periods show different effect on isolated rabbit intestinal muscle movement and different expectorant effects. And Chenpi of 1 and 5 years storage year show the best effect. We can choose Guang Chenpi of different storage time according to different therapeutic purpose.

Guang Chenpi; storage period;in vitrointestinal muscle; expectorant effect; use after stroage

R285.5

A

1674-926X(2017)06-013-04

國(guó)家自然科學(xué)基金委國(guó)家基礎(chǔ)科學(xué)人才培養(yǎng)基金（J1310034-14）；四川省科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)項(xiàng)目（2015JY0012）：川產(chǎn)大宗藥材川陳皮快速、 無(wú)損模式識(shí)別及品質(zhì)評(píng)價(jià)模型研究

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川 成都 610075

劉素娟，女，在讀碩士，主要從事中藥化學(xué)成分與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化研究Tel∶13730874707 Email∶1521153620@qq.com

陳鴻平，女，副教授，主要從事中藥炮制、中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究工作Tel∶028- 61800103 Email∶397373340@qq.com

2016-05-01

（責(zé)任編輯：陳思敏）