乙肝血清標(biāo)志物聯(lián)合HBV DNA檢測(cè)在HBV感染診斷中的應(yīng)用研究

韓峰，鄭正茂

（上饒市第二人民醫(yī)院，江西 上饒 334000）

--臨床研究--

乙肝血清標(biāo)志物聯(lián)合HBV DNA檢測(cè)在HBV感染診斷中的應(yīng)用研究

韓峰，鄭正茂

（上饒市第二人民醫(yī)院，江西 上饒 334000）

目的探討乙肝血清標(biāo)志物聯(lián)合乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)DNA檢測(cè)在HBV感染診斷中應(yīng)用價(jià)值。方法 選擇乙肝患者142例，均采集空腹靜脈血進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)HBV水平分為A、B、C組，觀察并記錄HBV DNA和HBV血清標(biāo)志物（包括抗-HBe、抗-HBs、HBeAg、抗-HBc、HBsAg）的含量。結(jié)果A組HBV DNA陽(yáng)性率為96.77%（30/31），B組HBV DNA陽(yáng)性率為60.42%（29/60），C組HBV DNA陽(yáng)性率為5.88%（3/51），組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與C組比較，A組和B組HBV DNA定量結(jié)果明顯提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；HBV DNA檢出符合率為73.94%（105/142），HBsAg檢出符合率為72.54%（103/142），兩者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 對(duì)HBV感染患者實(shí)施乙肝血清標(biāo)志物聯(lián)合HBV DNA檢測(cè)，能起到互補(bǔ)作用，提高診斷準(zhǔn)確率，為臨床治療HBV感染提供可靠的參考依據(jù)。

血清標(biāo)志物；乙肝病毒；HBV DNA

乙肝是臨床常見的一種傳染性疾病，據(jù)統(tǒng)計(jì)，慢性乙型肝炎病毒感染者在全球范圍內(nèi)約有2.4億人，其中死于HBV感染相關(guān)并發(fā)癥的人數(shù)高達(dá)78萬(wàn)，對(duì)人類健康造成嚴(yán)重的威脅[1]。HBV DNA定量檢測(cè)和HBV血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)是目前判斷和診斷HBV傳染性及傳染程度的常用手段。血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)方法簡(jiǎn)單快速，在大批量的乙肝病毒篩查中應(yīng)用較為廣泛，但卻無(wú)法反映HBV DNA復(fù)制情況[2]。HBV DNA定量檢測(cè)能直接反映HBV是否存在、監(jiān)測(cè)HBV DNA復(fù)制情況，在診斷乙肝的突變株方面具有明顯的優(yōu)勢(shì)，同時(shí)能幫助臨床預(yù)測(cè)不同時(shí)期乙肝的感染[3]。本研究選擇本院門診接診的部分乙肝患者為研究對(duì)象，分析乙肝血清標(biāo)志物聯(lián)合HBV DNA檢測(cè)在HBV感染診斷中應(yīng)用價(jià)值。現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年3月～2016年8月在本院門診就診的乙肝患者142例，其中男92例，女50例；年齡10～73歲，平均年齡（38.65±4.88）歲。根據(jù)HBV水平分為3組，其中HBsAg、抗HBc陽(yáng)性、HBeAg為A組（31例）；HBsAg、抗HBc陽(yáng)性、抗HBe陽(yáng)性為B組（60例）；抗-HBe、抗-HBs、抗-HBc陽(yáng)性，抗-HBc、抗-HBs陽(yáng)性，抗-HBc、抗-HBe陽(yáng)性，抗-HBs陽(yáng)性，抗-HBc陽(yáng)性，全陰性以及HBsAg等為C組（51例）。

1.2 方法 采集所有患者空腹靜脈血，將其進(jìn)行3 h的靜置，離心，取血清，隨后保存在-20℃環(huán)境下待測(cè)。選用上海博耀生物科技有限公司提供的乙型肝炎血清標(biāo)志物ELISA定性試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照其說(shuō)明書進(jìn)行操作和判斷結(jié)果。在100μL DNA濃縮液中加入100μL血清，混勻后，離心棄上清。將20μL HBV DNA提取液加入管底沉淀中，將其充分混勻后。進(jìn)行10 min的恒溫煮沸，離心取上清備用；將標(biāo)準(zhǔn)品和處理后的樣品各2μL加入PCR反應(yīng)管，離心30 s后，將其放置于儀器樣品槽，并對(duì)其反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行相應(yīng)設(shè)置，讀取熒光值。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察并記錄HBV DNA和HBV血清標(biāo)志物（包括抗-HBe、抗-HBs、HBeAg、抗-HBc、HBsAg）的含量。HBV DNA定量檢測(cè)的判斷標(biāo)準(zhǔn)：HBV DNA濃度＜5.0 lg copies/mL為陰性，≥5.0 lg copies/mL為陽(yáng)性。血清學(xué)標(biāo)志物定量檢測(cè)的判斷標(biāo)準(zhǔn)：抗-HBe濃度＜0.3 PEIU/mL為陰性，≥0.3 PEIU/mL為陽(yáng)性；抗-HBs濃度＜10.0 mIU/mL為陰性，≥10.0 mIU/mL為陽(yáng)性；HBeAg濃度＜0.2 ng/mL為陰性，≥0.2 ng/mL為陽(yáng)性；抗-HBc濃度＜0.9 PEIU/mL為陰性，≥0.9 PEIU/mL為陽(yáng)性；HBsAg濃度＜0.5 PEIU/mL為陰性，≥0.5 PEIU/mL為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料采用“±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（n）表示，組間率（%）的比較采用Χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV DNA結(jié)果 A組HBV DNA陽(yáng)性率為96.77%（30/31），B組HBV DNA陽(yáng)性率為60.42%（29/60），C組HBV DNA陽(yáng)性率為5.88%（3/51），組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與C組比較，A組和B組HBV DNA定量結(jié)果明顯提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 HBV DNA定量結(jié)果對(duì)比（±s，lg copies/mL）

表1 HBV DNA定量結(jié)果對(duì)比（±s，lg copies/mL）

注：與C組比較，aP＜0.05

組別A組B組C組例數(shù)3160 51 HBV DNA定量結(jié)果7.28±1.41a 4.39±1.38a 3.56±1.64

2.2 血清標(biāo)志物和HBV DNA陽(yáng)性率相比 在62例HBV DNA陽(yáng)性標(biāo)本中，檢出HBsAg 59例，占95.16%；檢出HBeAg 29例，占46.77%。兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。HBV DNA檢出符合率為73.94%（105/142），HBsAg檢出符合率為72.54%（103/142），兩者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表2 血清標(biāo)志物和HBV DNA陽(yáng)性率相比[n（%）]

2.3 HBV DNA在不同血清學(xué)模式下的測(cè)定結(jié)果 HBV DNA含量為2.7～5.0 lg copies/mL時(shí)，B組所占比例最高為59.26%；5.0～7.0 lg copies/mL時(shí)，以A組居多，占61.54%，其次為B組，占38.46%；＞7.0 lg copies/mL時(shí)，主要以A組多見，占85.71%，見表3。

表3 血清標(biāo)志物和HBV DNA陽(yáng)性率相比[n（%）]

3 討論

醫(yī)學(xué)研究顯示，在機(jī)體受到HBV感染時(shí)會(huì)產(chǎn)生免疫殺傷的作用，HBV感染程度及其轉(zhuǎn)歸情況與免疫功能水平高低有密切聯(lián)系，當(dāng)機(jī)體免疫功能較差時(shí)，HBV DNA會(huì)出現(xiàn)復(fù)制，且呈持續(xù)性的分泌HBeAg；當(dāng)患者病情好轉(zhuǎn)或免疫功能較好時(shí)，HBV則不會(huì)復(fù)制，抗-HBe呈陽(yáng)性，HBeAg呈陰性[4-5]。HBV DNA能準(zhǔn)確、直接反映HBV的復(fù)制情況，而乙肝血清學(xué)標(biāo)志物（抗-HBe、抗-HBs、HBeAg、抗-HBc、HBsAg）則能較好反映出機(jī)體受到HBV感染時(shí)的免疫功能狀態(tài)[6]。因而，臨床將HBV DNA分子生物學(xué)檢測(cè)和乙肝血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)作為診斷HBV感染的重要手段。目前，臨床常采用ELISA法對(duì)乙肝血清學(xué)標(biāo)志物實(shí)施檢測(cè)，具有價(jià)廉、快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)勢(shì)，能有效判定患者是否受到HBV感染，但難以動(dòng)態(tài)、及時(shí)的顯示HBV傳染性及復(fù)制情況[7]。HBV DNA目前常以熒光定量PCR予以檢測(cè)，能有效避免乙肝血清學(xué)標(biāo)志物出現(xiàn)的弊端。

本研究結(jié)果顯示，A組HBV DNA陽(yáng)性率為96.77%（30/31），B組HBV DNA陽(yáng)性率為60.42%（29/60），C組HBV DNA陽(yáng)性率為5.88%（3/51），可見HBV在HBeAg陽(yáng)性患者體內(nèi)的復(fù)制較為頻繁，具有較好的傳染性。在62例HBV DNA陽(yáng)性標(biāo)本中，檢出HBsAg 59例（95.16%），檢出HBeAg 29例（46.77%），表明HBV DNA陽(yáng)性者大多攜帶HBsAg。HBsAg和HBV DNA檢出符合率之間無(wú)明顯的差異，表明HBV DNA含量與HBsAg值之間有一定的聯(lián)系。HBV DNA在不同血清學(xué)模式下的測(cè)定結(jié)果顯示，當(dāng)HBV DNA含量＞7.0 lg copies/mL時(shí)，A組所占比例遠(yuǎn)高于其他兩組，表明HBeAg水平與HBV DNA含量呈正相關(guān)。臨床可通過(guò)對(duì)HBeAg檢測(cè)，間接判斷HBV傳染和復(fù)制情況。本研究中，HBV DNA含量為5.0～7.0 lg copies/mL時(shí)，以A組居多，占61.54%，分析原因可能與HBV變異株有關(guān)。臨床研究顯示，HBV復(fù)制在患者體內(nèi)HBV DNA含量＞5.0 lg copies/mL時(shí)最為活躍，當(dāng)體內(nèi)HBV DNA含量＜5.0 lg copies/mL時(shí)的患者感染狀態(tài)較低[8]。因而，臨床可在實(shí)施乙肝血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)的同時(shí)定量檢測(cè)HBV DNA，利于判斷患者體內(nèi)病毒復(fù)制情況。此外，HBV DNA定量檢測(cè)在對(duì)乙肝患者抗病毒的診治中能對(duì)血清學(xué)轉(zhuǎn)換起到預(yù)測(cè)作用，有效判斷外顯型和隱匿性HBV的傳染性、復(fù)制活躍程度及其藥物療效。

綜上所述，對(duì)HBV感染患者實(shí)施乙肝血清標(biāo)志物聯(lián)合HBV DNA檢測(cè)，能起到互補(bǔ)作用，提高診斷準(zhǔn)確率，能為臨床治療HBV感染提供可靠的參考依據(jù)。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2017.34.023