開痹方對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者免疫功能影響

蘇振宇 李 琳 陳曉宇

河北省玉田縣醫(yī)院檢驗科 河北唐山 064100；①華北理工大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院；②開灤總醫(yī)院林西醫(yī)院檢驗科

開痹方對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者免疫功能影響

蘇振宇 李 琳①陳曉宇②

河北省玉田縣醫(yī)院檢驗科 河北唐山 064100；①華北理工大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院；②開灤總醫(yī)院林西醫(yī)院檢驗科

①目的 探討開痹方對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎免疫功能影響，為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 (RA)的中醫(yī)治療提供實驗依據(jù)。②方法 選擇診斷明確的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者105例，隨機(jī)分為開痹方組和對照組。開痹方組服用開痹方，對照組采用常規(guī)治療(甲氨蝶呤及西樂葆)。各組患者均用藥2個月。觀察兩組患者治療前后的臨床癥狀及體征，同時測定其血清中主要免疫學(xué)指標(biāo)。③結(jié)果 開痹方組治療后關(guān)節(jié)壓痛數(shù)和關(guān)節(jié)腫脹數(shù)均少于對照組，RF和ESR均低于對照組，差異具有顯著性(P均<0.05)；治療后開痹方組患者血清中IgG和C3高于對照組， IL-1、IL-6和TNF-α均低于對照組，差異具有顯著性(P均<0.05)。④結(jié)論 開痹方能提高類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者體液和固有免疫功能，抑制致炎性細(xì)胞因子分泌。

開痹方 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 免疫功能

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA) 屬自身免疫性疾病，臨床主要表現(xiàn)為小關(guān)節(jié)損傷并伴有明顯的慢性滑膜炎癥。患者常伴有關(guān)節(jié)滑膜不同程度的增生以及出現(xiàn)血管翳，極易損傷關(guān)節(jié)軟骨，誘發(fā)骨、關(guān)節(jié)壞死現(xiàn)象，使患者致殘[1]。目前西藥常用于治療RA的藥物包括:非甾體抗炎藥素(nonsteroidalantiinflammatorydrμgs,NSAIDs)、糖皮激素(glucocorticoid,GC)以及緩解病情抗風(fēng)濕藥(disease-modifying anti-rheumatic drμgs，DMARDs)等。盡管上述藥物可以緩解癥狀，但副作用較大[2]。中草藥因毒副作用小、價格低廉等原因備受關(guān)注。本研究以溫陽通絡(luò)組方開痹方為治療組，常規(guī)西藥治療為對照組，探討開痹方對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的免疫功能影響，為類風(fēng)濕的中藥治療提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料 病例取自玉田縣醫(yī)院和開灤總醫(yī)院林西醫(yī)院2014年9月～2016年9月門診105例類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者，病例納入標(biāo)準(zhǔn)參照2014版(ACR/EULAR)RA診斷標(biāo)準(zhǔn)。將2個醫(yī)院入選病例按照年齡、性別配比的原則交替入組開痹方組和對照組。開痹方組53例，男26例，女27例，年齡(49.6±9.2)歲。對照組52例，其中男25例，女27例，年齡(50.2±8.6)歲。

1.2干預(yù)措施 對照組：常規(guī)治療，服用甲氨蝶呤(10mg/次，1次/周)，西樂葆(0.2mg/次，2次/日)。開痹方組：口服開痹方150mL/次，2 次/日(早、晚餐后溫服)。開痹方組成為：秦艽10g，雞血藤20g，防風(fēng)6g，威靈仙10g，土鱉蟲15g，羌活10g，獨活10g，川芎10g，骨碎補(bǔ)10g，牛膝15g，烏梢蛇15g，蜈蚣1條，赤芍15g，青風(fēng)藤10g，忍冬藤15g，桂枝10g，炙甘草6g，茯苓15g。將藥物加涼水浸泡1小時后以砂鍋煎藥，先用大火煮沸后，再用文火煮，每劑煎3次，第一次煎制時間為0.5小時，第二次煎制時間為40分鐘，第三次同第二次。3次各取藥汁100mL，混合均勻后，每日飯后0.5小時服用。治療時間均為2個月。

1.3觀測指標(biāo)

1.3.1標(biāo)本采集 治療結(jié)束后第3天采集患者血液標(biāo)本，囑患者早晨空腹，用普通采血管(促凝劑+分離膠)抽取靜脈血2mL，待其完全凝固后，3000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘，分離血清。用血沉管采集靜脈血至刻度處，用于紅細(xì)胞沉降率(ESR)測定。血常規(guī)管采取靜脈血2mL，備檢。

1.3.2RF測定(免疫散射比濁法) 試劑室溫下平衡0.5小時。用移液器分別吸取標(biāo)準(zhǔn)品、樣品和空白液(0.9%氯化鈉溶液)15μL于3個試管中，再吸取R1試劑(磷酸鹽緩沖液，40mmol/L，pH7.4)250μL分別放入試管中。37℃孵育5分鐘，取出在340nm波長下比色，記錄吸光度A1。然后加入R2試劑(含熱聚合人IgG)50μL。37℃孵育5分鐘，取出在340nm波長下比色，記錄下吸光度A2。依下式計算樣本RF值:

ΔA校準(zhǔn)品=(A2校準(zhǔn)品-A1校準(zhǔn)品)-(A2空白-A1空白)

ΔA樣品=(A2樣品-A1樣品)-(A2空白-A1空白)

C樣品=C標(biāo)準(zhǔn)品×(ΔA樣品/ΔA校準(zhǔn)品)

1.3.3ESR檢測 用血沉管采取靜脈血至刻度處，直立于快速血沉檢測架，0.5小時后觀察結(jié)果，讀取紅細(xì)胞下沉的高度。

1.3.4CRP、IgG、IgM、 C3及C4檢測(同RF測定)。

1.3.5IL-1檢測方法(雙抗體夾心ELISA法) 試劑盒室溫下平衡0.5小時。配制試劑與IL-1標(biāo)準(zhǔn)品，稀釋待測血清。加入待測血清、不同濃度IL-1標(biāo)準(zhǔn)品、對照血清至相應(yīng)微孔中，每孔100μL 。膠紙封板，37℃溫浴1小時。甩盡孔內(nèi)液體，用洗滌液每孔300μL洗孔4次，在吸水紙上拍干。各孔加工作濃度生物素化抗人IL-1抗體100μL，箔紙封板，37℃溫浴1小時，同上法洗孔。各孔加工作濃度HRP標(biāo)記鏈霉親和素100μL，膠紙封板，37℃溫浴0.5小時，同上法洗孔。各孔加入酶底物/色原(過氧化物酶/TMB)100μL,37℃避光反應(yīng)15min，加入終止液(2mol/L H2SO4)100μL終止反應(yīng)。以空白孔(含酶底物/色原液與終止液)調(diào)零。于酶聯(lián)儀450nm波長測吸光度，計算樣本中IL-1濃度。

1.3.6IL-6及TNF-α檢測(同IL-1檢測)。

2 結(jié)果

2.1開痹方組及對照組治療前癥狀體征比較 本研究調(diào)查患者105例，開痹方組53例，對照組52例。經(jīng)獨立樣本t檢驗，結(jié)果表明，兩組間年齡、性別一致，具有可比性。開痹方組與對照組患者治療前癥狀體征(晨僵持續(xù)時間、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)和關(guān)節(jié)壓痛數(shù))等指標(biāo)一致，因此，兩組患者資料治療前具有可比性，見表1。

表1 開痹方組和對照組治療前癥狀體征比較

2.2開痹方組及對照組治療后癥狀體征比較 治療后開痹方組關(guān)節(jié)腫脹數(shù)和關(guān)節(jié)壓痛數(shù)均少于對照組，差異具有顯著性，晨僵持續(xù)時間在兩組間差異不具有顯著性。提示與常規(guī)治療比較，開痹方可減少類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)腫張數(shù)及關(guān)節(jié)壓痛數(shù)，見表2。

表2 開痹方組及對照組治療后癥狀體征比較

2.3開痹方組及對照組治療后RF、ESR及CRP比較 治療后開痹方組RF和ESR均低于對照組，差異具有顯著性，而CRP在兩組間差異不具有顯著性。提示與常規(guī)治療比較，開痹方可降低類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者RF及ESR，見表3。

表3 開痹方組及對照組治療后RF、ESR及CRP比較

2.4開痹方組及對照組治療后患者血清中抗體及補(bǔ)體水平比較 治療后開痹方組患者血清中IgG和C3高于對照組，而IgM和C4在兩組間差異不具有顯著性。提示與常規(guī)治療比較，開痹方可提高類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者體液免疫及固有免疫功能，見表4。

表4 開痹方組及對照組治療后患者血清中IgG、IgM、C3和C4的比較

2.5開痹方組及對照組治療后細(xì)胞因子比較比較 治療后開痹方組患者血清中IL-1、IL-6和TNF-α均低于對照組，差異具有顯著性。提示與常規(guī)治療比較，開痹方可降低類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者炎性細(xì)胞因子水平，見表5。

表5 開痹方組及對照組治療后患者血清中IL-1、IL-6和TNF-α的比較

3 討論

RA屬于典型的免疫性疾病，患者多伴有慢性關(guān)節(jié)炎癥。關(guān)節(jié)疼痛、功能障礙、并伴有輕、中度發(fā)熱等是RA的主要臨床表現(xiàn)[3]。RA患者滑膜組織和滑膜液中,可見多種免疫細(xì)胞 (如T細(xì)胞、樹突狀以及肥大細(xì)胞)的浸潤及細(xì)胞因子(IL-1、IL-6以及TNF-α)異常分泌，這些因素均和RA的形成、演變及預(yù)后密切相關(guān)[4]。根據(jù)中醫(yī)學(xué)觀點，RA歸為“痹證”或者是“歷節(jié)風(fēng)”，多是因為風(fēng)、濕、寒以及熱等諸多邪氣在筋脈、肌肉以及關(guān)節(jié)中長時間滯留，促使經(jīng)脈受阻，引發(fā)疼痛，從而導(dǎo)致關(guān)節(jié)組織出現(xiàn)明顯的慢性炎癥。本研究應(yīng)用開痹方對RA患者進(jìn)行治療，以常規(guī)治療方法為對照，探討開痹方對RA患者免疫功能的影響，從而評價其對RA的免疫學(xué)干預(yù)效果，為其臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。

研究結(jié)果表明，開痹方組治療后關(guān)節(jié)腫脹數(shù)和關(guān)節(jié)壓痛數(shù)少于對照組，反映類風(fēng)濕活動性指標(biāo)RF及ESR低于對照組，說明開痹方對RA癥狀控制效果優(yōu)于常規(guī)治療方法。關(guān)節(jié)腫脹是RA的主要癥狀，消除關(guān)節(jié)腫脹是治療RA的主要目標(biāo)之一，也是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病情得以恢復(fù)的重要評價指標(biāo)[5]。開痹方組方中雞血藤和骨碎補(bǔ)具有活血舒脈的功能。雞血藤的主要活性成分包括黃酮類、苷類、萜類、蒽醌類以及內(nèi)酯類等。這些成分具有抗氧化與抑制炎癥等作用。骨碎補(bǔ)中含有大量的黃酮類，可有效減輕二甲苯引起的小鼠耳部水腫現(xiàn)象，骨碎補(bǔ)總黃酮也能夠降低毛細(xì)血管自身的通透性，以緩解組織胺或者5-羥色胺誘發(fā)的炎癥水腫[6]。

IgG是由B細(xì)胞活化后分泌的一種具有免疫中和作用的主要抗體類型，IgG具有親和力強(qiáng)，半衰期長等特點，血清中IgG含量的高低是衡量個體的體液免疫功能狀態(tài)的重要指標(biāo)。在炎癥反應(yīng)過程中，伴隨大量IgG的消耗，因此導(dǎo)致血清中IgG含量急劇降低，進(jìn)而引起機(jī)體免疫力的降低[7]。研究結(jié)果表明：開痹方治療后IgG含量高于對照組，說明開痹方能夠改善機(jī)體體液免疫功能。C3是中人血清中含量最多的一種補(bǔ)體類型，補(bǔ)體活化的經(jīng)典途徑、替代途徑及MBL途徑均需大量C3參與。炎癥反應(yīng)過程中，補(bǔ)體C3不斷消耗，導(dǎo)致機(jī)體固有免疫功能及裂解異物細(xì)胞的能力降低，不利于炎癥的修復(fù)[8]。研究結(jié)果表明：開痹方治療后C3含量高于對照組，說明開痹方能夠提高機(jī)體固有免疫功能。

RA患者的關(guān)節(jié)液、血清中IL-1的表達(dá)高于正常水平，因此，IL-1被認(rèn)為是RA的一種致炎性細(xì)胞因子，在急性和慢性炎癥的致病過程發(fā)揮重要作用，與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的病理過程密切相關(guān)[9]。IL-6 是由T、B淋巴細(xì)胞和肝細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌的一類具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白，它能夠誘導(dǎo)肝細(xì)胞產(chǎn)生急性期蛋白，并激活補(bǔ)體、誘導(dǎo)促炎性細(xì)胞因子釋放和刺激中性粒細(xì)胞趨化，加強(qiáng)炎性反應(yīng)。近年來，越來越多的證據(jù)表明TNF-α與RA的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，它在 RA滑膜炎癥反應(yīng)中起關(guān)鍵作用，具有多種炎性和免疫反應(yīng)活性，幾乎涉及RA炎癥反應(yīng)的每個環(huán)節(jié)[10]。開痹方組治療后致炎性細(xì)胞因子IL-1、IL-6和TNF-α分泌水平低于對照組，說明開痹方能夠通過抑制致炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，更好地抑制RA的炎癥反應(yīng)，從而控制RA發(fā)生過程中與之相關(guān)的癥狀。

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(2017-06-27 收稿)(王一伊 編輯)

EffectofKaiBiprescriptiononimmunityofpatientswithrheumatoidarthritis

SUZhenyu,LILin,CHENXiaoyu

(DepartmentofClinicalLaboratory,YutianHospitalofHebeiProvince,Yutian064100,China)

ObjectiveTo reveal the effect of Kai Bi prescription on the immunity of patients with Rheumatoid Arthritis, so to provide the experimental basis for the treatment of traditional Chinese medicine to rheumatoid arthritis.Methods105 patients definitely diagnosed with rheumatoid arthritis were divided into Kai Bi prescription and control group randomly. The Patient in Kai Bi prescription group was treated with the Kai Bi prescription, and the patient in the control group was treated with methotrexate and Celebrex. All patients were treated for 2 months. The clinical symptoms and objective sign of patients in the above two groups were recorded after treatment. In addition, severalimmune indexeswere determined.ResultsThe numbers of joint tenderness and swelling of Kai Bi prescription group after treatment were less than those of the control group statistically, so were the RF and ESR(P<0.05). The contents of IgG and C3in patients of Kai Bi prescription groupwere higher than those in the control group,whilethesecretions of IL-1, IL-6and TNF-αwere in a reverse result(P<0.05).ConclusionKai Bi prescription was observed to increase the humoral and innate immunitiesof patients with Rheumatoid Arthritis, togather with inhibit the secretion of inflammation cytokines.

Kai Bi prescription.Rheumatoid arthritis.Immunnity

R 593.22

A

2095-2694(2017)06-462-05

蘇振宇(1974-),男，主管檢驗師,碩士研究生。研究方向：免疫學(xué)診斷。

李 琳。