四數(shù)九里香不同提取液的急性毒性試驗(yàn)研究

1.廣西南寧市第八人民醫(yī)院，廣西 南寧 530001；2.廣西民族醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530001

四數(shù)九里香不同提取液的急性毒性試驗(yàn)研究

黃小秋1楊其波1黃小玉1楊增艷2

1.廣西南寧市第八人民醫(yī)院，廣西 南寧 530001；2.廣西民族醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530001

目的研究四數(shù)九里香不同提取液的急性毒性。方法采用改良寇氏法對(duì)四數(shù)九里香水和75%乙醇提取液的急性毒性進(jìn)行研究，按最大給藥體積40mL/kg灌胃給藥后，觀察小鼠的活動(dòng)、飲食、二便、存亡等情況。結(jié)果四數(shù)九里香水提取液的LD50值為69.18 g/kg，95%的可信限為63.10～75.86 g/kg；75%乙醇提取液LD50值為183.44 g/kg，95%的可信限為169.82～199.53 g/kg。結(jié)論四數(shù)九里香水提取液和75%乙醇提取液均具有一定的藥理毒性。

四數(shù)九里香；不同提取液；急性毒性

四數(shù)九里香MurrayatetrameraHuang又稱千里香、滿山香、過山香、千只眼等，為蕓香科九里香屬植物，民間常用于感冒發(fā)熱、支氣管炎、哮喘、風(fēng)濕麻木、筋骨疼痛、 跌打瘀血腫痛、皮膚瘙癢、濕疹、毒蛇咬傷、瘧疾、胃痛、水腫等[1]。龔志強(qiáng)等[2]分別采用水蒸氣蒸餾、超臨界CO2流體萃取及超聲波溶劑萃取3種方法對(duì)四數(shù)九里香揮發(fā)油進(jìn)行成分鑒定及對(duì)比研究，牙啟康等[3]通過硅膠柱層析和重結(jié)晶方法對(duì)四數(shù)九里香非揮發(fā)性成分進(jìn)行研究，從四數(shù)九里香乙醇提取物中首次分離得到5個(gè)單體化合物，黃蓓等[4]的現(xiàn)代藥理研究表明四數(shù)九里香水提取物具有良好的抗炎和鎮(zhèn)痛作用，但有關(guān)四數(shù)九里香的毒性試驗(yàn)研究未見有報(bào)道。研究采用改良寇氏法[5]對(duì)四數(shù)九里香水提取液和75%乙醇提取液進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)研究，為進(jìn)一步研究開發(fā)該藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 藥品與試劑 藥材四數(shù)九里香采于2015年12月百色市靖西縣，經(jīng)廣西民族醫(yī)藥研究院藍(lán)日春副主任中藥師鑒定為蕓香科九里香屬植物四數(shù)九里香的莖葉，藥材陰干后備用。

1.2 儀器 CF-1000H系列高精度電子教學(xué)計(jì)重秤(上海華德衡器有限公司)。

1.3 動(dòng)物 SPF級(jí)昆明種小鼠200只，雌雄各半，體重(20±2) g，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)為SCXK桂2014-0002。

2 方法

2.1 四數(shù)九里香水提取液的制備 稱取四數(shù)九里香粗粉800g，加入8倍量的水，浸泡40min后大火煮沸，保持微沸1h，用紗布過濾；剩下藥渣繼續(xù)加入8倍量的水，同法第2次煎煮，過濾，將兩次濾液合并后濃縮成335mL濃浸膏，相當(dāng)于2.38g原藥材/mL。

2.2 四數(shù)九里香乙醇提取液的制備 稱取四數(shù)九里香粗粉800g，加入8倍量的75%乙醇溶液，浸泡30min后水浴加熱回流提取1h，過濾；剩余藥渣加入8倍量的75%乙醇溶液，按上法回流提取，過濾，將2次濾液合并后濃縮，得到流浸膏175mL，相當(dāng)于4.57g原藥材/mL。

2.3 急性毒性實(shí)驗(yàn) 參照經(jīng)典的小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定預(yù)試，求最大耐受量 MTD、最大給藥量[5]MLD 和半數(shù)致死量LD50。通過對(duì)小鼠灌胃給藥，進(jìn)行急性毒性正式研究，連續(xù)觀察14d，記錄小鼠的中毒反應(yīng)及死亡率。

2.3.1 四數(shù)九里香水提取液、醇提取液急性毒性預(yù)試驗(yàn) 取10只小鼠，(20±2)g，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前禁食12h，按最大給藥體積40mL/kg灌胃給藥，給藥后觀察小鼠的中毒情況，給藥24h后10只小鼠全部死亡。根據(jù)小鼠死亡的情況適當(dāng)?shù)恼{(diào)整給藥劑量，分別找出引起小鼠0 %(Dn)死亡和 100%(Dm)死亡的劑量，并找出相應(yīng)的劑量組間距 r值，然后測(cè)定LD50值，并根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行正式試驗(yàn)。

2.3.2 四數(shù)九里香水提取液急性毒性實(shí)驗(yàn) 取50只小鼠，(20±2)g，雌雄各半，根據(jù)改良寇氏法，將小鼠隨機(jī)分為5個(gè)劑量組，每組雌雄各5只，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定組間劑量比為1∶0.85，各組劑量含生藥材分別為95.20、80.92、68.78 、58.46、49.70 g/kg。實(shí)驗(yàn)前禁食12h，按最大給藥體積40mL/kg灌胃給藥，藥后給予自由飲水?dāng)z食，觀察小鼠的活動(dòng)、飲食、二便、存亡等情況。

2.3.3 四數(shù)九里香醇提取液急性毒性實(shí)驗(yàn) 取40只小鼠，(20±2)g，雌雄各半，根據(jù)改良寇氏法，將小鼠隨機(jī)分為4個(gè)劑量組，每組雌雄各5只，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定組間劑量比為1∶0.85，各組劑量含生藥材分別為215.06、182.8、155.38、132.07 g/kg。實(shí)驗(yàn)前禁食12h，按最大給藥體積40mL/kg灌胃給藥，藥后給予自由飲水?dāng)z食，觀察小鼠的活動(dòng)、飲食、二便、存亡等情況。

2.4 LD50值的計(jì)算 根據(jù)公式計(jì)算得。

四數(shù)九里香水提取液半數(shù)致死量為：

95%的可信限為log-1=[lg(69.18±1.96)×0.02156]=log-1(1.84±0.0422)

上限為75.86 g/kg，下限為63.10 g/kg

四數(shù)九里香醇提取液半數(shù)致死量為：

標(biāo)準(zhǔn)誤

上限為199.53 g/kg，下限為169.82 g/kg

3 結(jié)果

3.1 一般情況 對(duì)小鼠經(jīng)口攻毒灌胃給藥后24h內(nèi)密切觀察小鼠的異常反應(yīng)。給藥后30min內(nèi)，一些動(dòng)物出現(xiàn)活動(dòng)減少、豎毛、目光呆滯、步履蹣跚、呼吸急促、食欲減退等初始中毒現(xiàn)象，最終呼吸麻痹而死亡。給藥48h內(nèi)部分小鼠相繼出現(xiàn)中毒死亡，剩余小鼠活動(dòng)量趨于正常，飲水?dāng)z食一般，大小便顏色正常。連續(xù)觀察14d，其余小鼠再無死亡現(xiàn)象。

3.2 LD50值 四數(shù)九里香水提取液急性毒性試驗(yàn)中，1組動(dòng)物(給藥劑量95.20g/kg)的死亡率為90%，5組動(dòng)物(給藥劑量49.70g/kg)死亡率為20%，動(dòng)物死亡率隨著給藥劑量的減少而降低。四數(shù)九里香水提取液LD50值為69.18 g/kg，95%的可信限為63.10～75.86 g/kg。當(dāng)給予75%乙醇提取液215.06g/kg時(shí)，小鼠的死亡率為80%，而給藥劑量降至132.07g/kg時(shí)，小鼠100%存活下來，無中毒跡象。四數(shù)九里香乙醇提取液LD50值為183.44 g/kg，95%的可信限為169.82～199.53g/kg。見表1、2。

表1 四數(shù)九里香水提取液對(duì)小鼠的經(jīng)口攻毒急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

表2 四數(shù)九里香75%乙醇提取液對(duì)小鼠的經(jīng)口攻毒急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

4 討論

4.1 四數(shù)九里香水提取液的急性毒性與藥物濃度的量效關(guān)系分析 從表1可知，本實(shí)驗(yàn)對(duì)四數(shù)九里香水提取液進(jìn)行了5個(gè)劑量組(組間劑量比為1∶0.85)的小鼠經(jīng)口灌胃給藥，當(dāng)給藥劑量從95.20g/kg下降至49.70g/kg時(shí)，動(dòng)物存活率從10%上升至 80%，由此可推測(cè)四數(shù)九里香水提取液的急性毒性與藥物濃度之間存在一定的正比關(guān)系。

4.2 四數(shù)九里香醇提取液的急性毒性與藥物濃度的量效關(guān)系分析 根據(jù)急性毒性預(yù)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析后，對(duì)四數(shù)九里香醇提取液進(jìn)行了4個(gè)劑量組(組間劑量比為1∶0.85)的小鼠經(jīng)口灌胃給藥，當(dāng)給藥劑量組分別為215.06、182.8、155.38 、132.07 g/kg時(shí)，動(dòng)物死亡率由80%依次下降為50%、20%、0%，藥物毒性大大降低，如表2所示。

4.3 四數(shù)九里香兩種不同提取液均具有一定的藥理毒性 通過對(duì)四數(shù)九里香兩種不同提取液的急性毒性試驗(yàn)進(jìn)行比較，結(jié)果顯示無論是水提取液還是醇提取液，均具有一定的藥理毒性，且兩者的動(dòng)物死亡率隨著給藥劑量的增加而升高。

四數(shù)九里香水提取液和醇提取液的LD50值分別為69.18、183.44 g/kg，可見其水提取液的動(dòng)物半數(shù)致死量明顯小于醇提取液，即前者急性毒性大于后者。而水提取液多為非揮發(fā)性成分，75%乙醇提取液含有較多的揮發(fā)性成分，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可推理，四數(shù)九里香的藥理毒性與其揮發(fā)性成分存在一定的量效關(guān)系。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)四數(shù)九里香兩種不同提取液的急性毒性進(jìn)行了的初步探討，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其存在一定程度的藥理毒性。四數(shù)九里香雖為民間常用藥，但應(yīng)避免大劑量使用，以免發(fā)生中毒反應(yīng)。至于四數(shù)九里香不同提取液的毒性作用部位和作用機(jī)制，有待于進(jìn)一步深入研究。

[1]全國(guó)中草藥匯編編寫組.全國(guó)中草藥匯編(上冊(cè))[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1996:10.

[2]龔志強(qiáng)，談遠(yuǎn)鋒，黃敏，等. 不同方法提取四數(shù)九里香揮發(fā)油氣質(zhì)聯(lián)用分析[J]. 湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報(bào)，2014，37(2)：48-50.

[3]牙啟康，盧文杰，陳家源，等．四數(shù)九里香的化學(xué)成分研究[J].廣西科學(xué)，2010，17(4) : 347-348.

[4]黃蓓，毛長(zhǎng)智，庾志斌．四數(shù)九里香水提物抗炎及鎮(zhèn)痛作用研究[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2011，20(14)：32-33.

[5]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:819．

2017-09-13 編輯：梁志慶)

對(duì)來稿內(nèi)容的要求

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3.本刊誠征民族醫(yī)藥、中醫(yī)藥、中西醫(yī)結(jié)合相關(guān)研究文章。

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)自籌經(jīng)費(fèi)科研課題(Z2015646)。

黃小秋(1983-),女，碩士研究生，主管藥師，研究方向?yàn)樗幬锓治?。E-mail:mailhxq@163.com

R285.5

A

1007-8517(2017)21-0033-03