不同磷酸鈣陶瓷對(duì)兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化相關(guān)基因表達(dá)的影響

王 哲，敖 俊，趙彥禹，張志敏，吳明松，3，李學(xué)英

(1.遵義醫(yī)學(xué)院 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教研室，貴州 遵義 563099；2.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 脊柱外科，貴州 遵義 563099；3.遵義醫(yī)學(xué)院 貴州省高等學(xué)?？谇患膊⊙芯刻厣攸c(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/醫(yī)學(xué)與生物學(xué)研究中心，貴州 遵義 563099)

不同磷酸鈣陶瓷對(duì)兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化相關(guān)基因表達(dá)的影響

王 哲1，敖 俊2，趙彥禹1，張志敏1，吳明松1，3，李學(xué)英1

(1.遵義醫(yī)學(xué)院 醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教研室，貴州 遵義 563099；2.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 脊柱外科，貴州 遵義 563099；3.遵義醫(yī)學(xué)院 貴州省高等學(xué)校口腔疾病研究特色重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/醫(yī)學(xué)與生物學(xué)研究中心，貴州 遵義 563099)

目的比較不同成分磷酸鈣陶瓷材料對(duì)兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)增殖及成骨分化基因表達(dá)的影響。方法將不同相成分的磷酸鈣陶瓷材料分為兩組，分離并培養(yǎng)兔BMSCs分別與之共培養(yǎng)，于第1、3、7天用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，并用FDA/PI染色后觀察細(xì)胞形態(tài)。于第3、7、14天采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)BMSCs的堿性磷酸酶(ALP)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMP-2)、骨唾液酸蛋白(BSP)和轉(zhuǎn)錄因子Osterix的mRNA表達(dá)變化。結(jié)果共培養(yǎng)7d后，兩種材料上BMSCs均快速增殖；共培養(yǎng)14d時(shí)，雙相磷酸鈣陶瓷(BCP)組BMSCs的ALP、BMP-2、BSP和OsterixmRNA表達(dá)均明顯高于羥基磷灰石(HA)組(Plt;0.05)。結(jié)論兩種磷酸鈣材料均能促進(jìn)BMSCs增殖及向成骨方向分化，雙相磷酸鈣陶瓷這一能力強(qiáng)于羥基磷灰石陶瓷，預(yù)示出其更加優(yōu)異的體外成骨誘導(dǎo)潛力。

磷酸鈣陶瓷；骨髓基質(zhì)干細(xì)胞；成骨分化

隨著人口老齡化，由骨質(zhì)疏松、感染、腫瘤等造成的骨缺損，以及運(yùn)動(dòng)和交通事故等帶來(lái)的骨創(chuàng)傷與日俱增，已成為影響人類(lèi)生命健康的重大問(wèn)題。近年對(duì)骨修復(fù)材料的研究中，如何利用材料本身的成分和結(jié)構(gòu)等因素設(shè)計(jì)來(lái)促進(jìn)骨再生是比較熱門(mén)的研究課題[1]，研究證實(shí)，宿主組織會(huì)對(duì)具有不同理化性質(zhì)的骨修復(fù)材料呈現(xiàn)出不同的生物學(xué)反應(yīng)。磷酸鈣陶瓷長(zhǎng)期以來(lái)一直是臨床上使用的十分重要的骨修復(fù)材料，磷酸鈣陶瓷有多種相組成，常用的磷酸鈣包括：羥基磷灰石(hydroxyapatite，HA)，磷酸三鈣(tricalcium phosphate，TCP)，雙相磷酸鈣(biphasic calcium phosphate，BCP)等[2]。骨髓基質(zhì)干細(xì)胞 (bone marrow stromal stem cells ，BMSCs)又稱(chēng)作間充質(zhì)干細(xì)胞，在體外不同分化條件的誘導(dǎo)下，可以形成軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞和脂肪細(xì)胞，是一種多潛能干細(xì)胞[3-5]。在材料的骨誘導(dǎo)作用研究中，研究者將支架材料復(fù)合BMSCs后，可以在非骨環(huán)境下的體內(nèi)[6]及體外[7-8]誘導(dǎo)BMSCs向成骨方向分化。目前對(duì)于磷酸鈣陶瓷不同化學(xué)成分調(diào)控BMSCs向成骨方向分化的研究鮮有報(bào)道，已有的類(lèi)似報(bào)道[9]仍缺乏充足的數(shù)據(jù)。本研究通過(guò)體外分離培養(yǎng)新生家兔BMSCs并作為細(xì)胞模型，考察不同成分磷酸鈣陶瓷對(duì)BMSCs的影響：比較磷酸鈣陶瓷不同化學(xué)成分對(duì)于誘導(dǎo)BMSCs成骨分化的差異，通過(guò)檢測(cè)BMSCs的增殖情況和成骨分化相關(guān)基因的表達(dá)來(lái)探討化學(xué)成分對(duì)于BMSCs成骨分化的影響，為磷酸鈣材料的誘導(dǎo)機(jī)制及臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 動(dòng)物新生家兔3只，體重150～200 g，購(gòu)買(mǎi)自四川省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物專(zhuān)委會(huì)養(yǎng)殖場(chǎng)[生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(川)2013-14]。

1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器和試劑醫(yī)用超凈工作臺(tái)(哈東聯(lián)BCN-13600)，CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱(MCO-15A，日本SANYO公司)，細(xì)胞培養(yǎng)板(美國(guó)Corning公司)，酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo公司)，TCS-SP5激光共聚焦顯微鏡(德國(guó)Leica公司)，CFX96TM熒光定量PCR儀(美國(guó)Bio-Rad公司)。不同相成分的兩組陶瓷材料：HA的成分為：純相HA，BCP的成分為：雙相比例HA/TCP=60/40(四川大學(xué)國(guó)家生物醫(yī)學(xué)材料工程技術(shù)研究中心)，α-MEM低糖培養(yǎng)基(美國(guó)Gibco公司)，0.25%胰蛋白酶(美國(guó)Gibco公司)，胎牛血清(美國(guó)Hyclone公司)，tripsin 0.25% (1X)溶液(美國(guó)Hyclone公司)，iScriptTMcDNA Synthesis kit(美國(guó)Bio-Rad公司)，SsoFastTMEvaGreenSupermix(美國(guó)Bio-Rad公司)。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)將家兔注射30 mg戊巴比托鈉致死，用70%乙醇浸泡10 min，無(wú)菌條件下取脛骨和股骨，將其兩端干骺端切除，顯露骨髓腔，用含10%胎牛血清(FCS)的α-MEM培養(yǎng)基徹底沖洗骨髓腔，無(wú)菌注射器反復(fù)吹打沖出骨髓，使骨髓細(xì)胞充分分散制成單細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)。加含10%FCS 的α-MEM培養(yǎng)基(含青霉素100 U/mL、鏈霉素100 U/mL)，以2×105個(gè)/mL接種于培養(yǎng)皿(規(guī)格：Φ60，下同)中，置于5%CO2、37 ℃飽和濕度培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)基每?jī)商旄鼡Q1次。待細(xì)胞鋪滿(mǎn)培養(yǎng)皿后吸去培養(yǎng)液采用0.25% 胰蛋白酶-0.01 %EDTA消化，以3×105個(gè)/mL細(xì)胞密度接種到培養(yǎng)皿中進(jìn)行傳代培養(yǎng)，取P3代細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 細(xì)胞接種陶瓷樣品均加工為尺寸Φ=13 mm×2 mm的片材，經(jīng)121 ℃水蒸氣滅菌并干燥后，在無(wú)菌操作臺(tái)上裝入到24孔培養(yǎng)板內(nèi)，每組材料3～5個(gè)平行樣；取長(zhǎng)勢(shì)良好的P3代BMSCs，移去上層培養(yǎng)基，經(jīng)胰酶消化后加少量培養(yǎng)基吹打均勻，用α-MEM培養(yǎng)基配成濃度為2×104個(gè)/mL的細(xì)胞懸液；再分別把混勻的細(xì)胞懸液按1mL/孔依次加入到各種材料中。培養(yǎng)板在超靜臺(tái)內(nèi)靜止30 min，然后置于37 ℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)分別培養(yǎng)1、3、7、14 d，每2天更換一次培養(yǎng)液。

1.2.3 細(xì)胞增殖測(cè)定采用四唑鹽比色試驗(yàn)(MTT)對(duì)不同材料表面的細(xì)胞增殖情況進(jìn)行檢測(cè)。采用24孔板進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每組材料設(shè)計(jì)5個(gè)復(fù)孔，接種細(xì)胞共培養(yǎng)1、3、7 d后，向孔板內(nèi)加入0.5 mg/mL MTT(200 μL/孔)，37 ℃下孵育4 h后棄去上清液，用PBS輕柔沖洗后，將材料轉(zhuǎn)移到新的24孔板內(nèi)，加入二甲基亞砜振蕩使藍(lán)色結(jié)晶產(chǎn)物溶解，然后在酶標(biāo)儀上于490 nm波長(zhǎng)下測(cè)定溶液的吸光度。

1.2.4 細(xì)胞形態(tài)觀察通過(guò)熒光素(fluorescein diacetate，F(xiàn)DA)和碘化丙碇(propidium iodide，PI)染色，激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞在材料表面的形態(tài)和生長(zhǎng)情況。采用24孔板進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每組材料設(shè)計(jì)3個(gè)復(fù)孔，BMSCs與材料共培養(yǎng)1、3、7 d后，每種材料取出一片，用PBS 輕柔沖洗后，裝入新的24孔板中。每孔中加入1 mL PBS溶液，以及FDA/PI各1 μL 進(jìn)行染色，2 min后，在激光共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。

1.2.5 Real-time PCR檢測(cè)采用24孔板進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每組材料設(shè)計(jì)5個(gè)復(fù)孔，共培養(yǎng)3、7、14 d后，利用trizol提取每片材料上黏附細(xì)胞的總RNA，其操作步驟按照試劑盒中的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。將每種材料的3個(gè)平行樣的總RNA收集在一起，利用iScriptcDNA Synthesis Kit將每種材料的1 mg RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，PCR儀擴(kuò)增。取等量的cDNA進(jìn)行RT-qPCR反應(yīng)以對(duì)成骨相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)行分析。RT-qPCR在六色梯度實(shí)時(shí)定量PCR儀上進(jìn)行，試劑盒為SsoFastTMEvaGreen?Supermix。本文中檢測(cè)如下幾個(gè)基因：堿性磷酸酶基因(alkalinephosphatase，ALP)，骨形態(tài)發(fā)生蛋白基因(Bonemorphogeneticprotein2，BMP-2)，骨唾液酸蛋白基因(Bonesialoprotein，BSP)，轉(zhuǎn)錄因子Osterix和GAPDH基因，其引物序列見(jiàn)表1，由上海生工合成。各mRNA的表達(dá)水平表示為閾值(CT)，用2-△△Ct值法來(lái)計(jì)算相對(duì)表達(dá)量，看家基因GAPDH的表達(dá)作為內(nèi)參來(lái)歸一化結(jié)果。

表1 PCR引物序列

基因名稱(chēng) 引物序列(5'-3')基因庫(kù)序列號(hào)GAPDH上游ATCACTGCCAC-CCAGAAGACNM_001082253.1下游GTGAGTTTCCCGT-TCAGCTCBMP-2上游CTTGGAGGAGAAGCAAG-GTGNM_001082650下游AGTTACGAGCAAAGGCCT-GAALP上游TGGACCTCGTGGACATCTGENSOCUG00000004447下游CAGGAGTTCAGTGCGGTTCBSP上游AAACCACTGCCGCT-GAATATGENSOCUG00000001046下游TCCTGACCCTCGTAGCCCTCOsterix上游GCTGGTGTTTGCTCAGGT-GGENSOCUG00000003811下游CTTCTGTGGCAAGCGGT-TCA

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞增殖情況 共培養(yǎng)1 d后，細(xì)胞在兩種材料上的生長(zhǎng)情況沒(méi)有明顯的差異。從第1天到第3天，BMSCs在HA上有較快的增殖，同它相比，在BCP上細(xì)胞的增殖較慢。從第3天到第7天，在BCP上的BMSCs表現(xiàn)出了較高的增殖速率，HA組的細(xì)胞雖然也在增殖，但增殖速率和1、3 d的相比已不及BCP組陶瓷材料(Plt;0.05)?？傮w看來(lái)，細(xì)胞在兩種材料上都表現(xiàn)出了較快的增殖。

組間比較，*P lt; 0.05。 圖1 體外共培養(yǎng)1、3、7 d后MSCs在不同材料表面的MTT結(jié)果

2.2 細(xì)胞形態(tài)觀察 取同一培養(yǎng)時(shí)間的平行樣進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察在細(xì)胞接種到材料上共培養(yǎng)1 d后，有部分細(xì)胞未貼壁而死亡，呈較小的圓形，被PI染料著色為紅色(見(jiàn)圖2B)，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞開(kāi)始在材料表面增殖，照片中幾乎找不到代表死細(xì)胞的紅色亮點(diǎn)，BMSCs呈梭形、星形或完全鋪展開(kāi)來(lái)，綠色熒光顯示出其良好的活力，說(shuō)明兩種材料都具有良好的生物相容性，到7 d后BCP組上生長(zhǎng)的細(xì)胞明顯比HA組鋪展更開(kāi)，細(xì)胞密度更大(見(jiàn)圖2F)，與2.1中結(jié)果相互應(yīng)證。從照片中還可看出，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，兩種材料上的活細(xì)胞數(shù)量都不斷增加，這也顯示出BMSCs在磷酸鈣陶瓷的表面增殖情況非常好。

2.3 BMSCs成骨分化相關(guān)基因表達(dá)不同材料表面BMSCs體外培養(yǎng)3、7、14 d后成骨分化相關(guān)基因(BMP-2，ALP，BSP和Osterix)的表達(dá)結(jié)果如圖3所示。從圖3中可以看出，ALP在兩中材料上均在3d時(shí)有一個(gè)較高水平的表達(dá)，隨后下調(diào)并維持一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的水平，且ALP在BCP上的表達(dá)水平均高于HA組(Plt; 0.05)(見(jiàn)圖3A)。BMP-2在兩種材料上的表達(dá)水平差別非常明顯，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的結(jié)果均顯示出BCP組遠(yuǎn)高于HA組的表達(dá)水平(Plt; 0.05)(見(jiàn)圖3B)。BSP的表達(dá)與BMP-2有相似的變化趨勢(shì)，BSP在BCP上的表達(dá)在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)均遠(yuǎn)高于在HA上的表達(dá)(Plt; 0.05)(見(jiàn)圖3C)。Osterix在兩種材料上mRNA的表達(dá)變化趨勢(shì)正好相反，在HA上是3 d時(shí)高表達(dá)，隨后下調(diào)；而在BCP上則是7 d時(shí)表達(dá)下調(diào)，隨后明顯上調(diào)，14 d時(shí)表達(dá)水平明顯高于3 d和7 d時(shí)的結(jié)果；在第14天時(shí)BCP組表達(dá)水平顯著高于HA組(Plt; 0.05)(見(jiàn)圖3D)?？傮w來(lái)說(shuō)，4種成骨分化相關(guān)基因在BCP上的表達(dá)特別是在共培養(yǎng)的中后期階段均高于HA組。

A、C、E為BMSCs與HA共培養(yǎng)，其中A：1 d；C：3 d；E：7 d。B、D、F為BMSCs與BCP共培養(yǎng)，其中B：1 d；D：3 d；F：7 d。圖2 BMSCs分別與HA和BCP共培養(yǎng)后的激光共聚焦顯微鏡照片

A：ALP；B：BMP-2；C：BSP；D：Osterix，組間比較，* Plt;0.05。圖3 BMSCs分別與HA和BCP共培養(yǎng)3、7、14 d后的成骨分化相關(guān)基因表達(dá)

3 討論

研究證實(shí)，BMSCs在適宜的環(huán)境[10]下不僅可以分化為間充質(zhì)組織，還可以分化成神經(jīng)系統(tǒng)、上皮組織等[11-12]，如何誘導(dǎo)干細(xì)胞定向分化是干細(xì)胞應(yīng)用基礎(chǔ)研究的重點(diǎn)方向之一。向成骨細(xì)胞分化是BMSCs的重要潛能，同樣是骨組織誘導(dǎo)再生的基礎(chǔ)，通過(guò)材料成分和結(jié)構(gòu)等設(shè)計(jì)手段來(lái)有效刺激BMSCs向成骨細(xì)胞分化在骨再生和骨組織工程學(xué)中具有重要價(jià)值[1]。研究發(fā)現(xiàn)，BMSCs分化為成骨細(xì)胞一般要經(jīng)過(guò)細(xì)胞增殖、細(xì)胞外基質(zhì)成熟和基質(zhì)礦化三個(gè)階段。因此要使得BMSCs向成骨細(xì)胞分化，支架材料必須要能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖，還要為細(xì)胞增殖提供一個(gè)合適的空間。在細(xì)胞增殖結(jié)果中，兩種材料上BMSCs均有較快的增殖速率，尤其是從第3天到第7天的生長(zhǎng)，激光共聚焦照片也證實(shí)了這一點(diǎn)，從照片中可以看到，第7天時(shí)細(xì)胞已經(jīng)鋪滿(mǎn)整個(gè)孔隙表面，并逐漸向孔內(nèi)生長(zhǎng)，提示磷酸鈣陶瓷材料良好的細(xì)胞相容性，為細(xì)胞后續(xù)的增殖分化奠定了良好的基礎(chǔ)。

研究發(fā)現(xiàn)，BMSCs在向成骨細(xì)胞分化過(guò)程中表達(dá)多種特異性基因，如ALP、BMP-2、BSP和Osterix等。ALP是一種成骨細(xì)胞的功能性酶，在成熟的成骨細(xì)胞內(nèi)高度表達(dá)，在鈣鹽沉積過(guò)程中起重要作用，其表達(dá)水平的高低是衡量BMSCs向成骨細(xì)胞分化的重要指標(biāo)之一，通常被認(rèn)為是成骨細(xì)胞分化的早期標(biāo)志[13-15]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果中ALP的表達(dá)在兩組材料中的情況最大的區(qū)別是：在BCP組的細(xì)胞ALP表達(dá)水平均比HA組高，說(shuō)明BMSCs對(duì)BCP陶瓷的反應(yīng)十分迅速，細(xì)胞早期即進(jìn)入分化階段。骨形態(tài)發(fā)生蛋白基因BMP-2是另一種重要的成骨相關(guān)基因，具有刺激成骨的作用，它能誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞的前體細(xì)胞進(jìn)而分化成成骨細(xì)胞，能增加ALP 的活性和膠原的合成[16]。本實(shí)驗(yàn)中BMP-2在HA組表達(dá)水平都不高，而在BCP組一開(kāi)始就有較高表達(dá)水平，這說(shuō)明了雙相成分能積極促進(jìn)BMSCs朝成骨方向分化；BCP組在早期就具有很高的表達(dá)量，說(shuō)明BMP-2的調(diào)控機(jī)制已經(jīng)啟動(dòng)，目前普遍認(rèn)為BCP材料的骨誘導(dǎo)性高于HA，原因之一可能就是BCP調(diào)控細(xì)胞早期即進(jìn)入分化階段，這與ALP的結(jié)果提示相符。BSP是骨基質(zhì)中主要的非膠原蛋白之一，主要表達(dá)于成熟成骨細(xì)胞，是成骨分化的晚期標(biāo)志物[17]。本研究結(jié)果顯示，BSP的表達(dá)趨勢(shì)與BMP-2類(lèi)似，BCP組在早期就具有很高的表達(dá)量，而且高表達(dá)水平一直持續(xù)到中后期，提示BCP不但調(diào)控細(xì)胞早期即進(jìn)入分化階段，且穩(wěn)定持續(xù)促進(jìn)骨細(xì)胞生成乃至骨形成。對(duì)于轉(zhuǎn)錄因子Osterix，研究結(jié)果顯示，其在第14天時(shí)BCP材料上的BMSCs顯著上調(diào)了Osterix的表達(dá)水平，是HA組表達(dá)水平的數(shù)倍，增強(qiáng)了干細(xì)胞的成骨分化能力[18-19]。因此，無(wú)論是BMSCs早期向成骨方向分化的啟動(dòng)，還是中晚期成骨分化的持續(xù)進(jìn)行，BCP組都顯示出更顯著的誘導(dǎo)性，預(yù)示其良好骨誘導(dǎo)性的分子生物學(xué)機(jī)制。

綜上所述，對(duì)誘導(dǎo)BMSCs向成骨分化的化學(xué)成分因素研究表明，BMSCs在BCP成分的多孔磷酸鈣陶瓷上有較高的增殖速率和良好的細(xì)胞形態(tài)，對(duì)成骨相關(guān)基因表達(dá)的研究表明，BCP上調(diào)了BMSCs中關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄因子Osterix的表達(dá)，同時(shí)，各個(gè)階段的ALP、BMP-2、BSP在BMSCs中的表達(dá)也在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)被增強(qiáng)，表明了BMSCs與磷酸鈣陶瓷共培養(yǎng)后被誘導(dǎo)向成骨分化，且BCP比HA具有更快的體外誘導(dǎo)效果。

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[收稿2017-05-17;修回2017-07-21]

(編輯：譚秀榮)

Effectsofdifferentcalciumphosphateceramicsonproliferationandosteogenicdifferentiationrelatedgeneexpressionofrabbitbonemarrowstromalcells

WangZhe1,AoJun2,ZhaoYanyu1,ZhangZhimin1,WuMingsong1,3,LiXueying1

(1.Department of Medical Genetics,Zunyi Medical University,Zunyi Guizhou 563099,China; 2.Department of Orthopaedics,Affiliated Hospital of Zunyi Medical University,Zunyi Guizhou 563099,China; 3.Special Key Laboratory of Oral Diseases Research,Higher Education Institutions of Guizhou Province,Research Center of Medicine and Biology,Zunyi Medical University,Zunyi Guizhou 563099,China)

ObjectiveTo compare the effects of different components of calcium phosphate ceramics on proliferation and osteogenic differentiation of rabbit bone marrow stromal cells (BMSCs).MethodsThe calcium phosphate ceramics with different phases were divided into two groups,BMSCs were isolated and cultured with ceramics.Cell proliferation was detected at day 1,3 and 7 and cell morphology was observed by FDA/PI staining.Real-time PCR was applied to detect the changes of expressions of alkaline phosphatase (ALP),bone morphogenetic protein (BMP-2),bone sialoprotein (BSP) and transcription factorOsterixat day 3,7 and 14.ResultsAfter 7 days of co-culture,BMSCs on two kinds of materials had good morphology and wellproliferation.At 14d of co-culture,the mRNA expression ofALP,BMP-2,BSPandOsterixinbiphasic calcium phosphate ceramics group were significantly higher than those in HA group (Plt; 0.05).ConclusionBoth BCP and HA could promote the proliferation and osteogenic differentiation of BMSCs.The osteogenic differentiation ability of BCP is superior to that of HA to indicate its osteoinductive activityinvitro.

Calcium phosphate ceramics; bone marrow stromal cell; osteogenic differentiation

遵義醫(yī)學(xué)院博士啟動(dòng)基金資助項(xiàng)目(NO：F-703)；遵義醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)-臨床合作項(xiàng)目(NO：F-790)。

李學(xué)英，女，碩士，教授，研究方向：腫瘤分子生物學(xué)，E-mail:leexueying4722@163.com。

R318.08

A

1000-2715(2017)05-0510-06