絨葉泡桐提取液對6種細菌抑菌活性的研究

臧愛梅

摘要 本研究采用抑菌圈法用絨葉泡桐葉和花的石油醚、乙醇、丙酮提取液對6種細菌進行了抑菌活性測定。結果表明，泡桐葉和花的乙醇提取液及丙酮提取液對白菜軟腐病菌、獼猴桃潰瘍病菌、水稻白葉枯病菌和金葡萄球菌4種細菌有較好的抑菌效果。其中，泡桐葉的最佳提取溶劑為丙酮，泡桐花的最佳提取溶劑為乙醇。泡桐花和葉的提取液對大腸桿菌和沙門氏桿菌均無抑菌作用；泡桐葉和花的石油醚提取液對6種細菌均無抑菌作用。

關鍵詞 絨葉泡桐；提取物；細菌；抑菌活性

中圖分類號 S792.43 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）21-0112-01

近年來，從植物中探求新的活性先導化合物或新的作用靶標，通過類推合成或生物合理設計新農藥的開發(fā)已成為當前農藥化學和農藥毒理學研究的熱點[1]。1982年，Cercos[2]用醚、乙醇、丙酮3種有機溶劑從毛泡桐果實的外種皮中提取出一種有抗菌活性的物質。這種物質對葡萄球菌和桿狀病毒都有較好的抑制活性，而對酵母菌的抑制活性較小。1994年，Kang等[3]發(fā)現毛泡桐莖的丁醇提取物對葡萄球菌、鏈球菌等細菌有抗菌活性。1999年，Kang[4]等用甲醇對毛泡桐的莖皮進行提取，得到一種對脊髓灰質炎病毒有抗性的物質。由此可見，泡桐在天然產物研發(fā)中有著很大的研究價值和應用價值。為了進一步開發(fā)泡桐，從中尋找具有生物活性的先導化合物，采用不同溶劑對泡桐不同部位進行提取，用粗提液測定其對植物病原菌和動物病原菌的抑菌作用，為新藥劑的開發(fā)奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

將泡桐葉、花置于通風處自然陰干，用粉碎機粉碎成粉末，過20目標準篩，于冰箱中低溫保存，備用。試驗試劑有95%乙醇（分析純）、丙酮（分析純）、石油醚（沸程60～90 ℃）。供試細菌包括大腸桿菌（Escherchia.coli）、金葡萄球菌（Sta-phylococcus aureus）、沙門氏桿菌（Samonella typhimurium）、白菜軟腐病菌（Erwinia.carotovora pv. carotovora）、水稻白葉枯病菌（Xanthomonas.oryzae. pv. oryzae）、獼猴桃潰瘍病菌（Pseud-omonas syringae pv.），以上菌種均由青島農業(yè)大學植物保護學院提供。

1.2 抑菌活性測定方法

采用抑菌圈法[5]用泡桐花和葉的乙醇、丙酮、石油醚提取液對6種細菌進行抑菌活性測定。首先在NA平板表面均勻涂抹供試菌懸濁液200 μL，置于室溫干燥5 min，在每個平板表面周邊距中心25 mm等距離貼3片帶毒濾紙片，1片對照濾紙片。然后將貼好紙片的平板置于31 ℃隔水培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，18～24 h觀察結果。用十字交叉法測量抑菌圈的直徑（包括貼片），并記錄測量數據。

判定標準：以抑菌圈直徑 >7 mm者判為有抑菌作用，抑菌圈≤7 mm者判為無抑菌作用，3次重復試驗均達到有抑菌作用結果者，判為合格。抑菌圈直徑與抑菌效果成正比，抑菌圈越大效果越好。對照應無抑菌圈產生，否則試驗無效。

2 結果與分析

2.1 不同部位不同溶劑泡桐粗提物的抑菌試驗結果

用泡桐花和葉的3種溶劑提取液對6種細菌進行抑菌活性測定（表1）。結果表明，在各溶劑干物質濃度為2 g/mL時，泡桐葉的丙酮提取液和乙醇提取液對白菜軟腐病菌、獼猴桃潰瘍病菌、水稻白葉枯病菌和金葡萄球菌4種細菌的抑菌圈直徑分別為17.83、17.50、17.32、13.75 mm和15.83、13.67、13.50、12.25 mm；泡桐葉的石油醚提取液對6種細菌均無抑菌作用。泡桐葉的丙酮提取液抑菌作用優(yōu)于乙醇提取液，即泡桐葉的最佳提取溶劑為丙酮。

泡桐花的丙酮和乙醇提取液對白菜軟腐病菌、獼猴桃潰瘍病菌、水稻白葉枯病菌和金葡萄球菌4種細菌的抑菌圈直徑分別為14.00、10.50、11.00、8.83 mm和15.17、13.50、13.00、12.50 mm；泡桐花的石油醚提取液對6種細菌均無抑菌作用。泡桐花的乙醇提取液抑菌效果優(yōu)于丙酮提取液，所以，泡桐花的最佳提取溶劑為乙醇。泡桐葉、花的3種溶劑提取液對大腸桿菌和沙門氏桿菌均無抑菌作用。

2.2 不同溶劑不同濃度泡桐粗提物的抑菌試驗結果

用丙酮提取液和乙醇提取液對4種有活性的細菌進行不同濃度的抑菌活性試驗（表2）。結果表明，泡桐葉的丙酮提取液稀釋不同倍數后，隨著稀釋倍數增大，其對4種病菌的抑菌圈愈來愈小。10倍稀釋液對4種菌均無抑制作用。

不同溶劑不同濃度泡桐粗提物的抑菌試驗結果表明，泡桐葉、花的提取液對白菜軟腐病菌的抑菌效果最好。粗提物的抑菌效果與其濃度成正相關，同一部位同一溶劑的提取物濃度越大，對同一種菌的抑菌效果越明顯；濃度越小，抑菌效果越差。

3 結論與討論

用泡桐葉和花的乙醇、丙酮和石油醚提取液對3種植物病原菌和3種動物病原菌同時進行了抑菌活性測定，結果表明，泡桐葉的乙醇提取液和丙酮提取液以及泡桐花的乙醇和丙酮提取液對白菜軟腐病菌、獼猴桃潰瘍病菌、水稻白葉枯病菌和金葡萄球菌4種細菌均有抑制作用，其中對白菜軟腐病菌的抑菌效果最為顯著。這也是泡桐提取液對植物病原細菌的首次報道，也是本研究的創(chuàng)新點。

泡桐葉的丙酮提取液抑菌作用優(yōu)于其乙醇提取液，即泡桐葉的最佳提取溶劑為丙酮；泡桐花的乙醇提取液抑菌效果優(yōu)于其丙酮提取液，即泡桐花的最佳提取溶劑為乙醇。

Kang等從泡桐分離得到一種呋喃醌酮，對Hela癌細胞有抑制作用。陜西省畜牧獸醫(yī)研究所和中國農業(yè)大學動物醫(yī)學院試驗證明泡桐花黃酮具有一定的抗菌譜，增強動物機體免疫功能，抑菌作用顯著[6]。為了進一步開發(fā)泡桐，從中尋找具有生物活性的先導化合物，本研究以泡桐作為試驗材料，對其農用抑菌生物活性進行初步研究，旨在為開發(fā)新的仿生農用殺菌劑尋找先導化合物打下基礎。

4 參考文獻

[1] 吳新安，花日茂，岳永德，等.幾種中草藥提取物對生物病原菌的抗菌活性研究[J].安徽農業(yè)大學學報，2002，29（4）：330-332.

[2] CERCOS A P.Antimicrobial antivity of the epicarp of the fruits of Paul-ownia tomentosa[J].Rev Argent Microbial，1982，14（2）：111-113.

[3] KANG K H，JANG S K，KIM B K.et al.Antibacterial phenylpropanoid glycosides from Paulownia tomentosa Steud [J].Arch Pharm Res，1994，17（6）：470-474.

[4] KANG K H，HUH H，KIM B K，et al.An antiviral furanquinone from Paulownia tomentosa Steud[J].Phytother Res，1999，13（7）：624-629.

[5] 王桂亭，王皞，宋艷艷，等.無花果葉提取物抑菌作用的實驗研究[J].中國消毒學雜志，2005，22（4）：374-376.

[6] 付明哲，盧興民，陸剛，等.泡桐花黃酮抗菌作用及對免疫機能的影響[J].中國獸醫(yī)雜志，1999，25（5）：46-47.endprint