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    大白豬群中HDAC1基因多態(tài)性與重要經(jīng)濟(jì)性狀的相關(guān)性研究

    2017-11-21 11:22:57李明楊葉澤坤聶光偉毛元良毛慧敏王國水
    豬業(yè)科學(xué) 2017年10期
    關(guān)鍵詞:法系白豬等位基因

    李明楊,葉澤坤,楊 華,聶光偉,毛元良,毛慧敏,王國水,左 波*

    (1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動科動醫(yī)學(xué)院農(nóng)業(yè)部豬遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,武漢 430070;2.湖北省畜禽育種中心,武漢 430072;3.浙江天蓬集團(tuán)有限公司,浙江 江山 324111)

    大白豬群中HDAC1基因多態(tài)性與重要經(jīng)濟(jì)性狀的相關(guān)性研究

    李明楊1,葉澤坤1,楊 華2,聶光偉1,毛元良3,毛慧敏3,王國水3,左 波1*

    (1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動科動醫(yī)學(xué)院農(nóng)業(yè)部豬遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,武漢 430070;2.湖北省畜禽育種中心,武漢 430072;3.浙江天蓬集團(tuán)有限公司,浙江 江山 324111)

    該研究利用PCR-RFLP技術(shù)檢測343頭法系大白豬HDAC1基因酶切位點(diǎn)多態(tài)性,并對乳頭數(shù)、達(dá)100 kg體重日齡、校正背膘厚、初生重和體長等性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。結(jié)果顯示:在法系大白群體中檢測到HDAC1基因3種基因型(分別為AA、AG和GG基因型)的存在。HDAC1基因HinfⅠ位點(diǎn)與大白豬達(dá)100 kg體重日齡顯著相關(guān),G等位基因具有顯著降低達(dá)100 kg體重日齡的遺傳效應(yīng),而GG基因型個體的初生重要高于AA基因型個體,GG基因型個體的生長性能有著明顯優(yōu)勢。

    豬;HDAC1基因;關(guān)聯(lián)分析

    1 前言

    HDACs家族與染色體移位、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、基因沉默、細(xì)胞周期以及細(xì)胞分化增殖、凋亡有關(guān)。組蛋白的各種修飾功能對基因轉(zhuǎn)錄有調(diào)節(jié)作用,而且各種修飾之間相互聯(lián)系,能夠調(diào)控染色質(zhì)調(diào)節(jié)因子的募集[1-2]。

    組蛋白去乙酰化酶1(Histone Deacetylase 1,HDAC1) 是HDACs家族中的一員,存在于人的各種器官中,而在胚胎干細(xì)胞,一些轉(zhuǎn)化細(xì)胞系和高度增生組織中高效表達(dá)[3]。有研究表示,在HDAC家族中多個基因參與成脂分化[4],而HDAC1基因在信號傳導(dǎo)、細(xì)胞繁殖和分化過程中有著重要的作用[5],并且可以調(diào)控與細(xì)胞周期調(diào)控、增殖、分化及凋亡相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄[6]。2002年,Ye等[7]首次在豬群體中研究HDAC1基因與豬部分性狀之間的關(guān)聯(lián)性。2005年劉峰[8]發(fā)現(xiàn)豬HDAC1基因的HinfI酶切位點(diǎn)的多態(tài)性與豬的背膘厚、達(dá)100 kg體重日齡、瘦肉率等性狀顯著相關(guān)。因此,揭示該基因的多態(tài)性及基因型效應(yīng),尋找與豬生長和胴體性狀相關(guān)的遺傳標(biāo)記,為優(yōu)質(zhì)瘦肉型豬的標(biāo)記輔助選擇提供科學(xué)依據(jù)。

    2 材料與方法

    2.1 實(shí)驗(yàn)材料

    法系大白豬343頭(源自浙江開盛生態(tài)農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司),體重在85~135 kg,使用一次性采血器在前腔靜脈處采集血液?;蚪MDNA采用血液基因組DNA中量提取試劑盒(離心柱型)提取,于-80 ℃超低溫冰箱中保存。

    2.2 PCR擴(kuò)增

    本實(shí)驗(yàn)主要利用PCR-RFLP技術(shù)進(jìn)行基因分型,所用引物由上海生工生物工程有限公司合成,引物序列見表1。PCR反應(yīng)體系為10 μl:2×Es Taq Master Mix( 含 染 料 )5.0 μl;ddH2O 4.0 μl;Sense primer(10 μM) 0.25 μl;Antisense primer(10 μM)0.25 μl;DNA 0.5 μl。HDAC1基因反應(yīng)程序:94 ℃,5 min;35個循環(huán)(30 s-95 ℃,30 s-55 ℃,30 s-72 ℃);72 ℃,5 min;25 ℃,1 min。

    2.3 PCR-RFLP分析

    HDAC1基因用限制性內(nèi)切酶HinfI進(jìn)行酶切。酶切反應(yīng)體系為:PCR 產(chǎn) 物 10.0 μl,10×FastDigest Green buffer 2.0 μl, 內(nèi) 切 酶 0.5 μl,ddH2O 7.5 μl。37 ℃消化 1 h。酶切產(chǎn)物分別用2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測分型,并拍照保存圖片。

    2.4 統(tǒng)計(jì)分析

    本實(shí)驗(yàn)所采用模型為:Tijkl=μ+Gi+Fj+Sk+Pl+eijklm,Tijkl為性狀表型值,μ為平均值,Gi為基因型效應(yīng)(包括基因加性效應(yīng)和顯性效應(yīng));Fj、Sk、Pl為固定效應(yīng),分別為家系、性別、批次,eijklm為殘差效應(yīng)。采用SAS軟件GLM模型自編程序完成,同時采用reg程序計(jì)算基因加性效應(yīng)和顯性效應(yīng),并進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 HDAC1基因的PCR-HinfIRFLP多態(tài)性檢測

    本研究用于檢測HDAC1基因多態(tài)性的擴(kuò)增片段產(chǎn)物長度為333 bp,見圖1。利用HinfI內(nèi)切酶酶切后產(chǎn)生 219 bp,190 bp,114 bp 和 29 bp片段,根據(jù)條帶類型的不同共檢測到3種基因型,分別命名為AA基因 型(219 bp+114 bp)、AG基 因 型(219 bp+190 bp+114 bp+29 bp)和GG基因型(190 bp+114 bp+29 bp)?;蚍中徒Y(jié)果見圖2。

    表1 擴(kuò)增目的基因所用的引物

    表2 大白豬群中HDAC1基因型頻率和等位基因頻率

    表3 HDAC1基因HinfI多態(tài)性與大白豬性狀間的關(guān)聯(lián)分析

    圖1 HDAC1基因PCR凝膠電泳結(jié)果

    圖2 HDAC1基因PCR-HinfⅠ-RFLP酶切分型結(jié)果

    3.2 HDAC1基因在大白豬中的基因頻率分布及與生長和胴體性狀的關(guān)聯(lián)分析

    3.2.1 HDAC1基因在大白豬群體中的基因頻率分布

    利用PCR-RFLP技術(shù)對HDAC1基因多態(tài)性進(jìn)行檢測,在法系大白豬中檢測到3種基因型,對各基因型頻率進(jìn)行統(tǒng)計(jì),結(jié)果如表2所示。

    由表2得出,HDAC1基因的A等位基因和G等位基因的頻率相差很大,G等位基因在法系大白豬群體中的分布頻率顯著高于A等位基因,G等位基因是優(yōu)勢等位基因。Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)結(jié)果顯示,HDAC1基因在法系大白豬群體中偏離哈迪一溫伯格平衡狀態(tài) (P<0.05)。

    3.2.2 HDAC1基因多態(tài)性與法系大白豬生長及胴體性狀的關(guān)聯(lián)分析

    對HDAC1基因多態(tài)性位點(diǎn)的不同基因型與大白豬生長及胴體性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析,結(jié)果分別如表3所示。由表3可以得出,HDAC1基因HinfI位點(diǎn)多態(tài)性與法系大白豬的達(dá)100 kg體重日齡性狀顯著相關(guān),其中GG基因型個體要顯著(P<0.05)低于AA基因型個體。而GG基因型個體的初生重性狀要高于AA基因型個體,但沒有達(dá)到顯著水平,說明GG基因型對于豬生長性能具有明顯的優(yōu)勢。另外,AA基因型個體的活體背膘厚要低于AG和GG基因型個體,但沒有達(dá)到顯著水平。

    4 討論

    4.1 大白豬HDAC1基因的多態(tài)性

    本研究中,HDAC1基因HinfI酶切位點(diǎn)在大白豬群體中都有AA、AG、GG三種基因型的分布。其中,HDAC1基因HinfI酶切位點(diǎn)在大白豬中GG(0.87)基因型頻率要高于AA(0.02)基因型頻率,G等位基因?yàn)閮?yōu)勢等位基因,而在劉峰[8]和柳小春[9]的研究中,在大白豬群體中并沒有檢測到AA基因型,但是在杜洛克群體中AA基因型頻率要高于GG基因型頻率。

    4.2 HDAC1基因?qū)Υ蟀棕i各性狀的遺傳效應(yīng)

    在劉峰[8]和柳小春等[9]的研究中得出,HDAC1基因GG基因型個體具有較高的生長速度和較低的活體背膘厚。而在本研究中,GG基因型個體達(dá)100 kg體重日齡要少于AA基因型個體,且達(dá)到顯著水平,這與以前的研究結(jié)果一致,說明G等位基因具有增加生長性能的正效應(yīng),但是GG基因型的活體背膘厚要高于AA基因型個體,這與前者研究結(jié)果不符,其原因可能是由于品種、選育工作和環(huán)境等一些因素的不同,進(jìn)而對群體的遺傳機(jī)制造成一定的影響。

    本實(shí)驗(yàn)還需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量,并且在不同群體品種,尤其是地方品種和杜洛克品種進(jìn)行分析驗(yàn)證。另外,HDAC1基因與豬的一些其他胴體、肉質(zhì)性狀顯著相關(guān),Ye等[7]的研究中指出HDAC1基因與豬的后腿重、肩部脂肪重等性狀顯著相關(guān);劉峰[8]發(fā)現(xiàn)HDAC1基因與豬的瘦肉率、脂肪率等性狀顯著相關(guān)。所以,還需檢測與肉質(zhì)性狀之間的相關(guān)性,為HDAC1基因在豬遺傳育種上的研究提供更多的理論依據(jù)。

    [1] KIM K C,GENG L,HUANG S.Inactivation of a histone methyltransferase by mutations in human cancers[J].Cancer research,2003,63(22):7619-7623.

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    [8] 劉峰.HDAC1基因、PIT-1基因與豬部分經(jīng)濟(jì)性狀相關(guān)性研究[D].長沙:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué),2005.

    [9] 柳小春,肖調(diào)義,何偉光,等.豬生長及胴體性狀3個相關(guān)基因座遺傳效應(yīng)[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué) ,2009,42(2):742-747.

    本項(xiàng)目受國家科技支撐計(jì)劃(項(xiàng)目編號:2014BAD20B01)和“863”計(jì)劃(2013AA102502)、湖北省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新中心創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)資助。

    李明楊(1992-),男,河北衡水人,動物遺傳育種碩士,主要從事動物遺傳育種與繁殖方面的研究,E-mail:907166871@qq.com

    左波,華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動科動醫(yī)學(xué)院教授,博士生導(dǎo)師,研究方向:豬遺傳育種,E-mail:zuobo@mail.hzau.edu.cn

    2017-08-24)

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