燈盞花乙素聯(lián)合硝普鈉對(duì)大鼠離體冠狀動(dòng)脈血管環(huán)的影響

張永輝+王學(xué)昌+陳晨+劉蓉春+周莉+楊為民

【摘要】目的 探討燈盞花乙素（Scutellarin，SCU）對(duì)硝普鈉（sodiumnitroprusside，SNP）舒張冠狀動(dòng)脈效應(yīng)的影響。方法 制備冠狀動(dòng)脈血管環(huán)，分為對(duì)照組，觀察組，應(yīng)用Myograph血管張力分析系統(tǒng)測(cè)定血管環(huán)的張力變化。對(duì)照組采用累積劑量法加入硝普鈉；觀察組用500 ?M的燈盞花乙素孵育15 min后，累積劑量法加入硝普鈉。研究對(duì)照組和觀察組對(duì)60 mmol/L高鉀溶液誘導(dǎo)血管收縮的舒張效應(yīng)。并制備缺血再灌注血管環(huán)模型。結(jié)果 在正常血管環(huán)上，觀察組Emax明顯低于對(duì)照組（P<0.05）；在缺血再灌注模型血管環(huán)上，觀察組EC50顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。結(jié)論 SCU增加了SNP對(duì)冠狀動(dòng)脈的舒張效應(yīng)。

【關(guān)鍵詞】燈盞花乙素；硝普鈉；冠狀動(dòng)脈；血管張力

【中圖分類號(hào)】R914 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2017.14..03

【Abstract】Objective To determine the effects of SNPon constrictions of isolated coronary artery rings when combined with SCU.Methods Isolated coronary artery rings were mounted in a Multi Myograph system. The control group was treated with cumulative dose of SNP，the observation group was pre-incubation with 500?M SCUfor 15 minutes. Normol and IR rings were pre-contraction with 60 mmol/L KCl to obtain their dose-response curves.Results The observation group have significant vasodilation with lower Emax on normol arteries，（P<0.001）and lower EC50 on IR arteries，（P<0.05）.Conclusion SCU increased the vasodilation function of SNP on coronary arteries.

【Key words】Scutellarin；Sodium nitroprusside；Coronary artery；Vasodilation

高血壓急癥是在某些誘因作用下，血壓急劇升高，病情急劇惡化，同時(shí)伴有急性心肌梗死、急性腦卒中、不穩(wěn)定性心絞痛等缺血性心腦血管病變[1]，甚至危及患者生命，必須及時(shí)處理。臨床用藥選擇，要求起效快、藥力強(qiáng)，同時(shí)不會(huì)對(duì)心率、心臟和腦部血流量造成不利影響。硝普鈉屬于血管擴(kuò)張藥物，作用機(jī)制是擴(kuò)張動(dòng)脈和靜脈的平滑肌，降低周圍血管阻力，而且對(duì)患者的心肌收縮沒有影響，常用于高血壓急癥迅速控制血壓。

燈盞花乙素（Scutellarin，SCU） 是從中藥燈盞花中提取的主要成分燈盞花素的活性成分，主要用于心腦血管疾病及高黏血癥的治療[2-3]。目前證據(jù)表明[4]，與單用西藥相比，聯(lián)合燈盞花乙素對(duì)心血管疾病的治療有較好的療效。本文就硝普鈉聯(lián)合燈盞花乙素與單用硝普鈉對(duì)大鼠離體冠脈血管環(huán)張力的影響進(jìn)行比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Sprague-Dawley大鼠，體重200～250 g，雌雄兼用，許可證號(hào)：SYXK（陜）2007-003，購(gòu)自西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 藥品和試劑

SNP批號(hào)：13755-38-9（Sigma公司）；燈盞花乙素：昆明龍津藥業(yè)有限公司（99%）；其余試劑為市售國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 設(shè)備

SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；HJ-3數(shù)顯磁力加熱攪拌器，金壇市丹瑞儀器廠；AL104電子天平，Mettler Toledo公司；QL-902旋渦振蕩混勻器，海門市其林貝爾儀器制造有限公司；HHS112恒溫水浴鍋，江蘇省醫(yī)療器械廠；可調(diào)節(jié)容量移液器，上?？迫A實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)有限公司；CQ-120超聲波清洗機(jī)，上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)器械廠；Motic SMZ168-TL解剖顯微鏡，麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司；維納斯眼科剪，江蘇蘇科醫(yī)療器械有限公司；WA3010顯微鑷，上海醫(yī)療器械集團(tuán)；PH計(jì)，Mettler Toledo公司；Wire Myograph System DMT ，Danish Myo Technology Co；Powerlab數(shù)據(jù)記錄和分析系統(tǒng)，澳大利亞Adinstruments公司。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 主要試劑及藥物的配制

MOPS-PSS液（1L）含：NaCl8.18 g、KCl0.35 g、MOPS0.42 g、Na2HPO4·12H2O 0.43 g、Na2-EDTA·2H2O 0.007 g，臨用前取Glucose·H2O 1.1 g， MgSO4·7H2O 0.30 g、CaCl2 0.18 g，再加水至1000 mL，預(yù)熱至37℃，調(diào)pH至7.4。

MOPS-KPSS液（1L）含60 mmol鉀：NaCl4.95 g、KCl4.48 g、MOPS0.42 g、Na2HPO4·12H2O 0.43 g、Na2-EDTA·2H2O 0.007 g，臨用前取Glucose·H2O 1.1 g， MgSO4·7H2O 0.30 g、CaCl2 0.18 g，再加水至1000 mL，預(yù)熱至37℃，調(diào)pH至7.4。endprint

燈盞花乙素（99%），臨用前適量雙蒸水溶解配置成10 mM溶液。

SNP：臨用前以適量雙蒸水溶解至100 mM，再依次用雙蒸水稀釋配制成系列濃度：7 mM、2 mM、700 ?M、200 ?M、70 ?M、20 ?M、7 ?M、2 ?M、1 ?M，避光保存。

1.4.2 受試血管環(huán)制備

大鼠斷頭處死后，迅速取出心臟置于4℃MOPS-PSS液中.體式解剖顯微鏡下，用維納斯剪小心剝離冠狀動(dòng)脈周圍組織，剪成1 mm長(zhǎng)度的血管環(huán)，制備正常血管環(huán)。把未剝離周圍組織的冠狀動(dòng)脈放入事先通入N2的無(wú)糖MOPS-PSS液的密閉容器中，并持續(xù)通入N2 1h后取出，剝離周圍組織，剪成1 mm長(zhǎng)度的血管環(huán)，制備缺血再灌注血管環(huán)模型。

1.4.3 受試血管環(huán)平衡

體式解剖顯微鏡下，用2根60 m的金屬絲穿過血管環(huán)，分別掛置于DMT浴槽中，浴槽中盛MOPS-PSS液5 mL，恒溫37℃并且持續(xù)通通入95%O2和5%CO2的混合氣體，以模擬機(jī)體內(nèi)環(huán)境。待血管環(huán)全部置于DMT上后，調(diào)節(jié)微調(diào)裝置，預(yù)先給基礎(chǔ)張力1 mN.每隔15 min更換浴槽內(nèi)MOPS-PSS工作液，平衡60 min后更換成60 mmol/L高鉀溶液，高鉀溶液能夠使冠狀動(dòng)脈收縮，待張力穩(wěn)定至一平臺(tái)期，以MOPS-PSS液充分洗凈（4次，每次間隔5 min）至張力恢復(fù)基線水平，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)兩次。前后兩次高鉀刺激后血管收縮幅度相差不超過10%進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)[5]。

1.4.4 燈盞花乙素對(duì)受試血管環(huán)的影響

冠狀動(dòng)脈平衡并檢測(cè)血管環(huán)活性合格后，加入10 mM SCU 250 ?L，即以濃度500 ?M 孵育血管環(huán)15 min，加入60 mM K+收縮血管，待收縮達(dá)到最大值且平衡后每隔5 min累加濃度法加入受試藥硝普鈉，對(duì)照組加入相應(yīng)體積的溶媒。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以“x±s”表示，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 燈盞花乙素對(duì)大鼠離體正常冠脈和模擬缺血再灌注冠脈的作用

60 mmol/L高鉀誘導(dǎo)血管收縮，待收縮達(dá)到最大值且平衡后累每隔5 min加入受試藥硝普鈉，使?jié)舛壤鄯e為0.001 ?M、0.003 ?M、0.01 ?M、0.03 ?M、0.1 ?M、0.3 ?M、1 ?M、3 ?M、10 ?M，對(duì)照組加入相應(yīng)體積的溶媒。結(jié)果觀察組Emax（16.75±2.13%）明顯低于對(duì)照組Emax（50.42±9.75%），由于對(duì)照組硝普鈉濃度的增加反而血管舒張效應(yīng)減弱，由于硝普鈉舒張效應(yīng)無(wú)法維持，對(duì)照組EC50值無(wú)法擬合。見表1、表2、圖1。

2.2 燈盞花乙素對(duì)大鼠缺血再灌注冠狀動(dòng)脈的舒張作用

在模擬缺血再灌注的血管環(huán)上，觀察組EC50（0.13±0.03）?M明顯低于對(duì)照組（0.39±0.20）?M，觀察組和對(duì)照組Emax分別為（24.83±5.44）%、（44.92±6.46）%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表3、表4、圖2

3 討 論

燈盞花乙素是燈盞花素的有效成分，研究表明，燈盞花乙素能夠擴(kuò)張微小血管，改善微循環(huán)，抗血小板聚集，降低血液粘度[6-7]，對(duì)心腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用[8]。因此，廣泛應(yīng)用于缺血性心腦血管疾病的治療。有實(shí)驗(yàn)證實(shí)燈盞花能夠舒張大鼠離體心臟冠狀動(dòng)脈[9]。

燈盞花素通過多種效應(yīng)發(fā)揮內(nèi)皮保護(hù)作用[10]，進(jìn)而擴(kuò)張血管。另有研究表明，在常規(guī)西藥治療的基礎(chǔ)上，加用燈盞花乙素治療缺血性心血管病效果明顯[4，11-12]，可以通過激活JAK2/STAT3信號(hào)通路對(duì)心肌缺血再灌注損傷起保護(hù)作用[13]。

結(jié)果顯示，燈盞花乙素能夠增加硝普鈉對(duì)高鉀誘導(dǎo)的冠狀動(dòng)脈血管環(huán)的舒張效應(yīng)，燈盞花乙素孵育后的血管環(huán)Emax為（16.75±2.13）%，明顯低于對(duì)照組（50.42±9.75）%。在缺血再灌注血管環(huán)模型上，燈盞花乙素孵育后的EC50（0.13±0.03）?M明顯低于對(duì)照組（0.39±0.20）?M。Emax反映了冠脈的舒張程度，Emax數(shù)值小，表明對(duì)冠脈舒張效應(yīng)明顯。實(shí)驗(yàn)中，燈盞花乙素孵育后的血管環(huán)，Emax明顯低于對(duì)照組。燈盞花乙素在擴(kuò)血管藥物基礎(chǔ)上可有效舒張離體大鼠冠狀動(dòng)脈，并維持穩(wěn)定的有效舒張效應(yīng)。這與燈盞花乙素?cái)U(kuò)張血管、改善循環(huán)作用密切有關(guān)。在缺血再灌注動(dòng)脈環(huán)模型上，燈盞花乙素孵育后的EC50明顯低于對(duì)照組，表明燈盞花乙素對(duì)缺血再灌注冠脈有保護(hù)作用，與類似文獻(xiàn)報(bào)道一致[13]。但燈盞花乙素孵育組的Emax與對(duì)照組無(wú)明顯差異，可能是由于缺血再灌注可導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙，而硝普鈉可以改善存在功能障礙的血管環(huán)的內(nèi)皮功能[14]，而對(duì)功能正常的血管內(nèi)皮無(wú)保護(hù)作用。結(jié)合實(shí)驗(yàn)及相關(guān)文獻(xiàn)，SCU增強(qiáng)SNP的舒血管效應(yīng)，可能與保護(hù)血管內(nèi)皮有關(guān)，但參與內(nèi)皮保護(hù)的機(jī)制尚有待于進(jìn)一步研究。

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