正交試驗優(yōu)化復方胃炎膠囊中藥材的水提工藝Δ

鄭姣妮，劉玲，何道惠（1.重慶市急救醫(yī)療中心/重慶市第四人民醫(yī)院藥劑科，重慶400014；.四川省中醫(yī)藥研究院分析測試中心，成都610041）

正交試驗優(yōu)化復方胃炎膠囊中藥材的水提工藝Δ

鄭姣妮1＊，劉玲1#，何道惠2（1.重慶市急救醫(yī)療中心/重慶市第四人民醫(yī)院藥劑科，重慶400014；2.四川省中醫(yī)藥研究院分析測試中心，成都610041）

目的：優(yōu)化復方胃炎膠囊中藥材的水提工藝。方法：采用正交試驗，以干膏中芍藥苷含量、丹酚酸B含量與干膏質(zhì)量的綜合評分為評價指標，考察加水量、煎煮時間和煎煮次數(shù)對水提工藝的影響，并進行驗證試驗。結果：優(yōu)化的水提工藝為煎煮3次、每次120 min、每次加10倍量水；驗證試驗中綜合評分平均值為909.19（RSD＝1.84%，n＝3）。結論：優(yōu)化的水提工藝穩(wěn)定、可行，可用于復方胃炎膠囊中各藥材的提取。

復方胃炎膠囊；正交試驗；提取工藝；芍藥苷；丹酚酸B

慢性胃炎是消化系統(tǒng)常見病、多發(fā)病[1]，根據(jù)病理組織學改變和胃的病變部位，再結合可能病因，一般將胃炎分成非萎縮性（以往稱淺表性）、萎縮性和特殊類型3大類[2]。胃炎主要是胃黏膜上皮受到各種致病因子，如藥物、微生物、毒素和膽汁反流等的經(jīng)常、反復侵襲所致，其中幽門螺桿菌（HP）是胃炎的最主要病因，可造成慢性持續(xù)性的炎癥性病變。各類型胃炎雖然病因不同，但病理過程基本相似[3-4]。

復方胃炎膠囊的處方來源于臨床經(jīng)驗方，該方于2011年1月－2011年12月在重慶市急救醫(yī)療中心消化內(nèi)科進行了前期的臨床療效觀察。109例胃炎患者給予復方胃炎膠囊處方的湯劑治療3個月后，92例治愈（治愈率達84.4%），15例好轉(zhuǎn)，2例無明顯療效，總有效率達到98.2%（觀察者為重慶市第四人民醫(yī)院消化科臨床醫(yī)師曾慶貴、臨床藥師鄭姣妮），提示該方對胃炎患者具有治療作用。復方胃炎膠囊處方由白芍、黨參、白術、茯苓、麥冬、丹參、香附、高良姜、甘草9味藥材組成，由于組成藥味較多，服用量大（每次需服用湯劑250 mL，每天需要服用3次），且患者感覺口感不佳，攜帶也不方便。

為解決上述不足，本課題組擬將該方制劑由湯劑改成膠囊。為制訂科學、合理的藥材提取工藝，筆者根據(jù)處方中各藥材的藥理作用及有效成分的理化性質(zhì)，結合中醫(yī)配伍原則及臨床用藥特點，以方中君藥白芍、丹參的有效成分芍藥苷和丹酚酸B[5]含量及干膏質(zhì)量為評價指標，設計正交試驗優(yōu)化復方胃炎膠囊的水提工藝。

1 材料

1.1 儀器

1200高效液相色譜（HPLC）儀（美國Agilent公司）；AUW220D電子分析天平（日本島津儀器制造所）；RE52CS旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；DA-2A真空干燥箱（天津泰斯特儀器有限公司）；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市雙潔實驗儀器廠）。

1.2 藥材、對照品與試劑

白芍、黨參、白術、茯苓、麥冬、丹參、香附、高良姜、甘草（批號分別為：20130309、2013031、20130308、20130401、20130313、20130420、20130218、20130319、20130311）等9味藥材飲片均購自四川省中藥飲片公司，經(jīng)四川省中醫(yī)藥研究院分析測試中心研究員何道惠鑒定為真品；芍藥苷對照品（批號：110736-201136）、丹酚酸B對照品（批號：110719-201133）均來源于中國食品藥品檢定研究院，純度均不低于98%；乙腈、磷酸為色譜純，水為蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 干膏中芍藥苷、丹酚酸B含量的測定

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜柱：Phenomenex C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸鹽緩沖溶液，梯度洗脫；檢測波長：230 nm（芍藥苷）、286 nm（丹酚酸B）[6-9]；檢測溫度：室溫；進樣量：10 μL。梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序Tab1 Gradient elution procedure

在上述色譜條件下，取“2.1.2”項下混合對照品溶液、供試品溶液（正交試驗9號樣品）和陰性對照溶液進樣分析。結果丹酚酸B和芍藥苷之間以及二者與相鄰峰之間的分離度均大于1.5。在陰性對照溶液的色譜圖中，在丹酚酸B和芍藥苷相對應的位置上未見相應的色譜峰。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig1 HPLC chromatograms

2.1.2 溶液的制備（1）混合對照品溶液：取芍藥苷、丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加水制備成質(zhì)量濃度分別為50、55 μg/mL的溶液，即得[7-9]。（2）供試品溶液：取“2.2.1”項下水提干膏5 g，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加水35 mL，超聲處理（功率：240 W，頻率：45 kHz）15 min[10]，放冷，加水至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。（3）缺丹參或白芍的陰性對照溶液：按處方量稱取除丹參或白芍之外的其他藥材進行提取，按“（2）”項下方法制備，即得。

2.1.3 檢測限與定量限按信噪比為3計算，本法測得芍藥苷、丹酚酸B的檢測限分別為0.3、0.4μg/mL；按信噪比為10計算，本法測得芍藥苷、丹酚酸B的定量限分別為1.0、1.2μg/mL。

2.1.4 標準曲線的制備精密吸取混合對照品溶液各1、3、5、7、10、15、20 μL進樣分析，測定峰面積。以對照品質(zhì)量濃度為橫坐標（x）、峰面積為縱坐標（y）進行線性回歸，得芍藥苷、丹酚酸B的回歸方程分別為：y＝1 415.5x－0.16（r＝0.999 0）、y＝1 215.2x+1.06（r＝0.998 0）。結果表明，芍藥苷、丹酚酸B檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為4.01～81.03、5.14～102.76μg/mL。

2.1.5 精密度試驗精密吸取混合對照溶液適量，重復進樣測定5次。結果，芍藥苷、丹酚酸B峰面積的RSD分別為1.31%、1.23%（n＝5），表明儀器精密度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗取供試品溶液適量，分別于制備后0、2、4、6、8、24 h時進樣測定。結果，芍藥苷、丹酚酸B峰面積的RSD分別為1.33%、1.21%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.7 重復性試驗取同一批干膏（正交試驗9號樣品）適量，按“2.1.2”項下方法制備成6份供試品溶液，進樣測定。結果，芍藥苷、丹酚酸B含量的RSD分別為1.00%、1.05%（n＝6），表明方法重復性好。

2.1.8 準確度試驗精密稱取已知芍藥苷（4.78 mg/g）、丹酚酸B（6.21 mg/g）含量的干膏樣品5 g，共9份，精密加入相當于樣品中各成分質(zhì)量分數(shù)為80%、100%、120%的芍藥苷、丹酚酸B對照品，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，進樣測定，計算芍藥苷、丹酚酸B含量及加樣回收率。結果，丹酚酸B、芍藥苷的平均加樣回收率分別為99.78%、99.91%，RSD分別為1.28%、0.51%（n＝9），表明方法準確度較好。

2.2 正交試驗優(yōu)化水提工藝

2.2.1 因素、水平與指標的確定根據(jù)前期試驗結果，選擇煎煮次數(shù)（A）、煎煮時間（B）、加水倍數(shù)（C）為試驗因素[10-11]，每個因素選取3個水平；以干膏中芍藥苷含量、丹酚酸B含量、干膏質(zhì)量的綜合評分為指標，設計L9（34）正交試驗篩選水提工藝條件[12-14]。中藥有效成分是中藥復方發(fā)揮治療作用的物質(zhì)基礎，而干膏質(zhì)量可影響制劑的穩(wěn)定性[15]。故將干膏中芍藥苷含量、丹酚酸B含量的權重系數(shù)各設為0.4，干膏質(zhì)量權重系數(shù)設為0.2，計算綜合評分[芍藥苷含量（mg）×40%+丹酚酸B含量（mg）×40%+干膏質(zhì)量×20%，其中各成分的含量指53 g生藥提取后所得干膏中各成分的含量]，因素與水平見表2。

表2 因素與水平Tab2 Factors and levels

2.2.2 試驗設計與結果按處方比例稱取藥材53 g，按表2各水平進行煎煮試驗，得濾液，濾液濃縮蒸干，70℃減壓干燥，稱質(zhì)量，得干膏質(zhì)量；按“2.1”項下方法測定干膏中芍藥苷、丹酚酸B的含量，計算綜合評分。試驗設計與結果見表3，方差分析結果見表4。

表3 試驗設計與結果Tab3 Test design and results

表4 方差分析結果Tab4 Results of variance analysis

由表3、表4可知，各因素對提取效果的影響大小順序為A＞B＞C，煎煮次數(shù)有顯著影響。從生產(chǎn)實際及節(jié)約成本等出發(fā)，確定最優(yōu)工藝為A3B2C2，即最優(yōu)方案為煎煮3次、每次120 min、每次加水10倍。

2.3 工藝驗證試驗

按處方比例稱取各藥材共530 g，平行3份，按上述優(yōu)化條件煎煮提取，濾過，合并濾液，濃縮蒸干，稱量；測定芍藥苷含量、丹酚酸B含量和干膏質(zhì)量，并計算綜合評分。結果，綜合評分均值為909.19（RSD＝1.84%），表明優(yōu)化的工藝穩(wěn)定、可行。驗證試驗結果見表5。

表5 驗證試驗結果Tab5 Results of verification test

3 討論

本處方中白芍和丹參為君藥。白芍有效成分主要有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、苯甲酰芍藥苷等，2015年版《中國藥典》（一部）將芍藥苷作為白芍質(zhì)量控制指標。芍藥苷屬于單萜苷類，溶于水，具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒等作用[14]。丹參中有效成分主要有酚酸類和脂溶性二萜類，其中酚酸類主要包括丹酚酸A、B和丹參素，均為水溶性，其中丹酚酸B含量高且檢測方法較成熟[15-16]，具有抗炎、抗氧化、抗癌等作用[17]。芍藥苷和丹酚酸B兩者都有抗炎作用，因此本研究以芍藥苷和丹酚酸B的含量為主要評價指標。

將本方開發(fā)成膠囊劑時，還需進一步對提取后的干膏進行純化處理，尤其是水溶性成分提取得到的干膏量較大，故應進一步采用醇沉處理等方法以去除水不溶性雜質(zhì)。另外，本研究在實驗室中完成，還需進行中試和大生產(chǎn)驗證，并依據(jù)生產(chǎn)實際條件進一步優(yōu)化研究，以滿足生產(chǎn)要求。

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Optimization of Water Extraction Technology for the Medicinal Materials in Compound Gastritis Capsule by Orthogonal Test

ZHENG Jiaoni1，LIU Ling1，HE Daohui2（1.Dept.of Pharmacy，Chongqing Emergency Medical Center/the Forth People’s Hospital of Chongqing，Chongqing 400014，China；2.Analysis and Test Center，Sichuan Research Institute for TCM，Chengdu 610041，China）

OBJECTIVE：To optimize the water extraction technology for the medicinal materials in Compound gastritis capsule.METHODS：Orthogonal test was adopted.Using the comprehensive score of contents of paeoniflorin，salvianolic acid B and weight of dry extract as evaluation index，effects of adding water amount，decoction time and times on water extraction technology were investigated，and verification test was conducted.RESULTS：Optimized water extraction technology was as follows as decocting for 3 times，120 min each time and adding 10-fold water each time.In verification test，average comprehensive score was 909.19（RSD＝1.84%，n＝3）.CONCLUSIONS：Optimized water extraction technology is stable and feasible，and can be used for the water extraction for each medicinal material in Compound gastritis capsule.

Compound gastritis capsule；Orthogonal test；Extraction technology；Paeoniflorin；Salvianolic acid B

R284.2

A

1001-0408（2017）31-4438-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.31.30

重慶市衛(wèi)生局中醫(yī)藥科研計劃項目（No.2012-2-31）

＊主管藥師。研究方向：藥物治療學、新藥研發(fā)。電話：023-63692203。E-mail：zhengjiaoni123@163.com

#通信作者：主任藥師。研究方向：醫(yī)院藥學、新藥研發(fā)。電話：023-63692203。E-mail：nini842@163.com

2017-03-27

2017-07-31）

（編輯：劉萍）