12個(gè)油茶品種的SSR特征指紋鑒別

李海波 丁紅梅 陳友吾 徐 梁 李 楠 胡傳久

(浙江省林業(yè)科學(xué)研究院;浙江省森林資源生物與化學(xué)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室1，杭州 310023)(浙江中醫(yī)藥大學(xué)2，杭州 310053)

12個(gè)油茶品種的SSR特征指紋鑒別

李海波1丁紅梅2陳友吾1徐 梁1李 楠1胡傳久1

(浙江省林業(yè)科學(xué)研究院;浙江省森林資源生物與化學(xué)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室1，杭州 310023)(浙江中醫(yī)藥大學(xué)2，杭州 310053)

為了對普通油茶(Camelliaoleifera)優(yōu)良品種的準(zhǔn)確鑒別開發(fā)一種新的分子識別方法，為油茶優(yōu)良品種資源的保護(hù)提供技術(shù)支持，本研究擬利用SSR熒光標(biāo)記構(gòu)建12個(gè)長林系列油茶品種的SSR特征指紋。14對多態(tài)性SSR引物從12個(gè)油茶品種的14個(gè)SSR位點(diǎn)共擴(kuò)增出62個(gè)多態(tài)性條帶、檢測出77種基因型，平均每個(gè)SSR引物擴(kuò)增出4.4個(gè)多態(tài)性條帶、檢測出5.5種基因型。12個(gè)油茶品種14個(gè)SSR位點(diǎn)的多態(tài)信息含量變化范圍和Dice遺傳相似系數(shù)變異范圍分別為0.08～0.84和0.39～0.90?；?2個(gè)油茶品種在14個(gè)SSR位點(diǎn)的基因型差異，共選出45種SSR特征引物與其對應(yīng)的基因型組合，即SSR特征引物-基因型，可作為11個(gè)油茶品種的SSR特征指紋，為品種鑒別提供分子依據(jù)。本研究也為在更大層面上建立油茶品種的DNA指紋數(shù)據(jù)庫、為油茶品種的輔助選育、以及應(yīng)用于DUS測試提供了技術(shù)思路。

油茶 基因型 品種鑒別 SSR指紋 熒光檢測

普通油茶(Camelliaoleifera)在我國的栽培歷史悠久，具有分布區(qū)域廣、栽培面積大、用途多等特點(diǎn)，并集經(jīng)濟(jì)價(jià)值于一身[1]。油茶是我國南方重要的木本油料樹種，在生態(tài)經(jīng)濟(jì)建設(shè)中占有重要地位。早在上個(gè)世紀(jì)60年代以來，我國林業(yè)育種工作者就開展了油茶品種的選育工作，并取得了重大突破。先后選育出了一批優(yōu)良的單株、無性系和家系等[2]，其中，具有早實(shí)、 豐產(chǎn)和穩(wěn)產(chǎn)特點(diǎn)的油茶優(yōu)良無性系已作為我國油茶生產(chǎn)上最重要的品種資源而廣為推廣應(yīng)用[3]。畝產(chǎn)油量達(dá)到50 kg以上的新品系，成為油茶發(fā)展的主栽品種[4]。近年來，在國家政策的大力扶持下，油茶產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展，油茶品種苗木市場在出現(xiàn)供不應(yīng)求的同時(shí)，也出現(xiàn)了品系混雜、 以假亂真、以次充好的現(xiàn)象。油茶無性系品種的真實(shí)性問題一度成為困擾油茶產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的主要問題之一。

對普通油茶各無性系的識別主要依賴于對其表觀特征的選擇，但是由于許多形態(tài)性狀的鑒定周期長，受環(huán)境影響大，而且隨著無性系數(shù)量的不斷增多，鑒別也愈加困難。況且，用于大面積推廣的油茶芽砧苗尚不具備可用于識別的形態(tài)、 生物學(xué)特征以及經(jīng)濟(jì)性狀[2]。21世紀(jì)以來，分子標(biāo)記技術(shù)包括隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA, RAPD)[5]、簡單重復(fù)序列間區(qū)(inter simple sequence repeat, ISSR)[6]、相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性(sequence-related amplified polymorphism, SRAP)[7]開始陸續(xù)應(yīng)用于油茶的生產(chǎn)技術(shù)研究，為油茶優(yōu)良無性系的品種鑒別與優(yōu)良品系的分子選育提供一種新的技術(shù)手段[2，4,8-11]。簡單重復(fù)序列(Simple sequence repeats，SSR)主要是以2～5個(gè)核苷酸為基本重復(fù)單位的串聯(lián)重復(fù)序列[12]。SSR為共顯性標(biāo)記，能區(qū)分純合子和雜合子，能檢測復(fù)等位基因，且具有多態(tài)性豐富、操作簡單、結(jié)果可靠、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。通過構(gòu)建 SSR 指紋圖譜可以快速、準(zhǔn)確進(jìn)行品種鑒定，已在水稻、小麥、玉米等一些重要作物上得以應(yīng)用[13-15]。因此，探索基于SSR標(biāo)記構(gòu)建油茶品種的特征DNA指紋，不僅可用于油茶品種的真?zhèn)舞b定，為品種的知識產(chǎn)權(quán)保護(hù)提供科學(xué)依據(jù)，也可為油茶新品種的分子輔助選育奠定基礎(chǔ)。截至目前，SSR標(biāo)記在油茶上的應(yīng)用包括SSR-PCR體系的優(yōu)化研究[16]和種質(zhì)資源的遺傳多樣性分析[17-19]。此外，也有山茶屬(Camellia)內(nèi)紅花油茶(C.chekiangoleosa)的SSR標(biāo)記開發(fā)[20]、小果油茶(C.meiocarpa)與普通油茶的種間雜交漸滲的報(bào)道[21]，但鮮有基于SSR標(biāo)記的油茶品種DNA指紋圖譜構(gòu)建及品種鑒別的研究報(bào)道。

通過國家林木品種審定的長林系列油茶品種是經(jīng)過優(yōu)樹選擇、采穗圃觀察和當(dāng)代鑒定的系統(tǒng)程序選育出來的，具有早實(shí)豐產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、出籽率高、含油量高、抗性強(qiáng)、適應(yīng)性廣等特性的優(yōu)良無性系。本研究選用長林系列油茶的12個(gè)品種作為材料，首次通過Illumina轉(zhuǎn)錄組測序(transcriptome sequencing)平臺挖掘出有價(jià)值的SSR標(biāo)記，建立油茶品種的SSR特征指紋，為油茶優(yōu)良無性系的準(zhǔn)確鑒別開發(fā)一種新的分子識別方法，為油茶優(yōu)良品種資源的保護(hù)提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 植物材料

用于本研究的12個(gè)長林系列油茶(C.oleifera)品種無性系來自浙江省林業(yè)科學(xué)研究院在浙江省武義縣俞源鎮(zhèn)鐘蓬村建立的百靈谷油茶幼林基地，分別為：長林3號(CL3)、4號(CL4)、18號(CL18)、21號(CL21)、23號(CL23)、26號(CL26)、27號(CL27)、40號(CL40)、53號(CL53)、55號(CL55)、56號(CL56)、166號(CL166)。12個(gè)油茶優(yōu)良無性系的主要經(jīng)濟(jì)性狀參見林萍等[4]的報(bào)道。在本試驗(yàn)中，對每個(gè)油茶品種均采集3株，取每株3～5個(gè)幼嫩葉片，放置于裝有硅膠的密封袋干燥保存，至完全失水后作為提取基因組DNA的供試材料。

1.2 主要試劑

新型快速植物基因組DNA提取試劑：北京BioTeke公司；PCR擴(kuò)增試劑2TSINGKE Master Mix：北京Tsingke公司。在SSR正向引物上加注的熒光染料是FAM(藍(lán))，SSR引物由北京Tsingke公司合成。毛細(xì)管電泳檢測的內(nèi)標(biāo)試劑：Hi-DiTMFormamide、GeneScanTM-500 LIZ Size Standard，美國Applied Biosystems公司。

1.3 主要儀器與設(shè)備

PCR儀：杭州博日科技有限公司；凝膠電泳儀：美國伯樂公司；凝膠成像系統(tǒng)，美國伯樂公司；NanoDrop 2000分光光度計(jì)，美國熱電公司；DNA分析儀：3730 xl，美國Applied Biosystems公司。

1.4 方法

1.4.1 油茶基因組DNA的提取及濃度測定

將每個(gè)油茶品種3株經(jīng)硅膠干燥后的幼嫩葉片粉碎，取等量混合后作為基因組DNA的提取樣品。DNA提取方法參照新型快速植物基因組DNA提取試劑的操作說明，提取后的DNA經(jīng)分光光度計(jì)測定濃度，并經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 油茶SSR標(biāo)記來源

根據(jù)課題組前期對長林油茶的Illumina轉(zhuǎn)錄組測序獲得的序列數(shù)據(jù)，共篩選出了9個(gè)具有穩(wěn)定多態(tài)性的EST-SSR標(biāo)記引物；除此之外，根據(jù)彭嬋等[17]、Jia等[18]、Wen等[20]和黃勇[21]報(bào)道的54對茶屬SSR引物，共篩選出了5個(gè)具有穩(wěn)定多態(tài)性的SSR標(biāo)記引物(表1)。

1.4.3 SSR-PCR分析

1.4.4 毛細(xì)管電泳檢測

內(nèi)標(biāo)配制：取10 mL Hi-Di和80 μL GeneS-canTM-500 LIZ Size Standard混勻，離心，以每孔10L分裝于96孔內(nèi)標(biāo)板，離心。將SSR-PCR產(chǎn)物電泳，根據(jù)電泳膠圖做一定稀釋(最低可檢測標(biāo)準(zhǔn)為0.1 ng/L)，離心。取稀釋產(chǎn)物0.5L加入到分配好的內(nèi)標(biāo)板中，混勻，離心，放入PCR儀，于96 ℃變性5 min。20℃下迅速冷凍2 min，離心。置入DNA分析儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測。用Data Collection 3.0軟件收集數(shù)據(jù)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

用GeneMapper 4.1軟件對Data Collection 3.0軟件收集的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。軟件系統(tǒng)將根據(jù)目標(biāo)峰的位置與同一泳道中的內(nèi)標(biāo)GeneScanTM-500 LIZ Size Standard進(jìn)行比較，直接給出目標(biāo)SSR片段的準(zhǔn)確數(shù)值(bp)。純合位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X/X， 其中X為該等位變異的數(shù)值大?。浑s合位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X/Y，其中X、Y為該位點(diǎn)2個(gè)不同等位變異的數(shù)值大小。

SSR多態(tài)性分析評價(jià)采用以下參數(shù)：總條帶數(shù)、多態(tài)性條帶數(shù)、多態(tài)率，以及多態(tài)性信息含量(Polymorphic information content，PIC)。PIC的計(jì)算公式[22]為：PICi=1-∑Pij2，式中：PICi指分子標(biāo)記i的多態(tài)性信息量，Pij指i標(biāo)記中第j個(gè)類型所發(fā)生的頻率。

表1 用于本研究的油茶多態(tài)性SSR引物

遺傳關(guān)系分析：對于每個(gè)檢測位點(diǎn)，具有相同數(shù)值的SSR標(biāo)記記為1，無該數(shù)值的SSR標(biāo)記記為0，構(gòu)成0/1原始數(shù)據(jù)矩陣。利用 NTSYS-pc2.10e軟件進(jìn)行遺傳多樣性分析，使用軟件中的SimQual程序計(jì)算樣品間的Dice遺傳相似系數(shù)，用SAHN程序進(jìn)行UPGMA(非加權(quán)成對算術(shù)平均法)聚類分析，通過Tree plot模塊生成聚類圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 油茶SSR標(biāo)記多態(tài)性分析

14對SSR引物在12個(gè)油茶品種中共擴(kuò)增出67個(gè)條帶，擴(kuò)增片段大小為96～273 bp，每對引物擴(kuò)增出的條帶數(shù)為2～9個(gè)，平均為4.8個(gè)。67個(gè)條帶中的62個(gè)為多態(tài)性條帶，平均每對引物擴(kuò)增出4.4個(gè)多態(tài)性條帶。綜合多態(tài)率為92.5%，每個(gè)引物的平均多態(tài)率為91.7%。多態(tài)信息量(Polymorphic information content，PIC)為0.08～0.84，平均為0.53(表2)。

表2 供試油茶品種的SSR標(biāo)記擴(kuò)增結(jié)果

2.2 基于SSR標(biāo)記的的遺傳關(guān)系分析

基于14對SSR引物擴(kuò)增出的67個(gè)條帶對12個(gè)油茶品種的聚類結(jié)果顯示(圖1)，12個(gè)油茶品種沒有形成明顯的具有規(guī)律性的成組分類，表明12個(gè)油茶品種間的遺傳背景復(fù)雜，遺傳差異較大。從聚類圖上可以看出，12個(gè)油茶品種在Dice遺傳相似系數(shù)大約為0.43時(shí)聚在一起，在大約0.59時(shí)可分聚為7個(gè)組，分別為長林3號與56號，21號與166號，4號、27號與40號，23號與55號，以及三個(gè)單組包括長林53號、18號和26號。從Dice遺傳相似系數(shù)來看，12個(gè)油茶品種的Dice遺傳相似系數(shù)變異范圍在0.39(長林3號與26號)至0.90(長林27號與40號)之間，這與聚類圖顯示的長林27號與40號在0.90時(shí)聚為一組、長林3號與26號各自位于聚類圖的頂部與底部具一致性，表明長林27號與40號的遺傳差異最小，親緣關(guān)系最為接近；而長林3號與26號的遺傳差異最大，親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。

圖1 基于SSR標(biāo)記構(gòu)建的12個(gè)油茶品種聚類樹狀圖

2.3 油茶SSR位點(diǎn)的基因型差異分析

表3顯示，14個(gè)SSR引物對在12個(gè)供試油茶品種的14個(gè)SSR位點(diǎn)共檢測出了77種不同的基因型，每對引物檢測出2～10種基因型，最低的為引物Co3、Co51、Co66和Co84，最高的為引物CoUg10161，平均為5.5種。在77種基因型中，純合型為33種，雜合型為44種。此外，12個(gè)油茶品種在不同SSR位點(diǎn)表現(xiàn)出的基因型數(shù)量存在較大差異。例如，在Co3位點(diǎn)，12個(gè)油茶品種僅有2種基因型；在Co41位點(diǎn)，有5種基因型；而在CoUg10161引物位點(diǎn)，有10種基因型。

SSR位點(diǎn)上豐富的基因型差異為油茶品種鑒別提供了可能，特別是某個(gè)油茶品種在一些SSR引物位點(diǎn)所特有的基因型。表3顯示，除長林40號油茶外，其他11個(gè)油茶品種在14個(gè)SSR位點(diǎn)上均表現(xiàn)出特有基因型。例如，在Co3位點(diǎn)，長林26號表現(xiàn)出特有基因型138/141；在Co53位點(diǎn)，長林18號和166號分別表現(xiàn)出特有基因型267/273和267/270；在CoUg10161位點(diǎn)，長林3號、18號、21號、23號、26號、53號、55號、56號和166號分別表現(xiàn)出特有基因型196/196、186/186、186/196、188/188、190/190、190/192、188/190、190/200和196/208。不同油茶品種在14個(gè)SSR位點(diǎn)的基因型差異，尤其是特有基因型的發(fā)現(xiàn)為油茶品種SSR指紋圖譜的建立提供了有價(jià)值的數(shù)據(jù)。

2.4 油茶品種的SSR特征指紋與品種鑒定

基于12個(gè)油茶品種在SSR位點(diǎn)的基因型差異，進(jìn)一步比較、選出每個(gè)油茶品種的特征引物與其對應(yīng)的基因型，即特征引物-基因型，如CoUg10161-196/196、TUGMS17-218/242、CK55-182/200等，可作為各個(gè)油茶品種的SSR特征指紋，為品種鑒別提供分子依據(jù)(表4)。表4顯示，除長林40號油茶品種缺乏特征引物-基因型外，其他11個(gè)品種共有45種不同的特征引物-基因型，即45種SSR特征指紋。而且，這11個(gè)油茶品種具有不同的SSR特征指紋數(shù)，依次為：長林23號=53號=56號(6種指紋)>長林21號=26號=166號(5種)>長林18號=55號(4種)>長林3號(2種)>長林4號=27號(1種)。從特征引物在12個(gè)油茶品種間檢測出的特異基因型的數(shù)量來看，依次為：CoUg10161(9種)>TUGMS17(7種)>CK55(6種)>Co81= Co74(5種)>CK03(4種)>TUGMS28(3種)>Co41= Co53(2種)>Co62=C53(1種)。這表明不同SSR引物對油茶品種鑒別的貢獻(xiàn)大小不同。因此，基于本研究開發(fā)的SSR特征指紋，在實(shí)際應(yīng)用中可以優(yōu)先選用多態(tài)性高、貢獻(xiàn)大的特征引物，以提高鑒別效率。同時(shí)，每個(gè)油茶品種的多個(gè)SSR特征指紋均可以用于鑒別，以提高鑒別的可靠性。

表3 12個(gè)供試油茶品種的基因型

表4 12個(gè)供試油茶品種的SSR特征指紋(特征引物-基因型)

對于長林40號品種，由于缺乏特征引物-基因型，可以采用二對引物或二對以上的SSR引物的聯(lián)合使用來鑒別。根據(jù)表3顯示的基因型差異，可以聯(lián)合使用引物Co62和CK03，根據(jù)二對引物在長林40號品種檢測的基因型Co62-209/212和CK03-135/141來鑒別長林40號品種；也可以聯(lián)合使用引物CK55和TUGMS28，根據(jù)它們檢測的基因型CK55-198/200和TUGMS28-164/186來鑒別長林40號品種。

3 討論

目前，我國林業(yè)工作者選育出的普通油茶良種都是從實(shí)生群體中選育而來，群體中遺傳基因交流頻繁，具有高度雜合性，而且生殖周期較長，沒有自交、 雜交的純系[23]，這也使得油茶的遺傳背景相對復(fù)雜，遺傳多樣性豐富。此外，普通油茶的倍性較為復(fù)雜，一個(gè)SSR位點(diǎn)可能檢測到多個(gè)等位基因[21]。本研究結(jié)果不僅進(jìn)一步支持了我國油茶品種具有高度雜合的遺傳背景，也提示這14個(gè)多態(tài)性SSR標(biāo)記可以用于更多的普通油茶品種，以揭示種內(nèi)更為豐富的基因型差異而用于品種鑒別，也可用于普通油茶遺傳多樣性分析、遺傳圖譜構(gòu)建以及山茶屬(Camellia)內(nèi)物種間的遺傳關(guān)系研究。

SSR熒光標(biāo)記是基于DNA測序儀為平臺的檢測方法，克服了傳統(tǒng)銀染法聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測的不足，具有快速、高效、精確、靈敏等技術(shù)優(yōu)勢。該技術(shù)在小麥[24]、玉米[25]、煙草[26]、水稻[27]、高粱[28]等物種上的應(yīng)用得出在同一檢測成本上，熒光標(biāo)記技術(shù)檢測效率遠(yuǎn)高于銀染法，更適用于高通量材料的指紋圖譜構(gòu)建和品種鑒定研究。本研究采用SSR熒光標(biāo)記毛細(xì)管電泳檢測方法，直接以堿基數(shù)目(bp)確定了12個(gè)油茶品種在14個(gè)SSR位點(diǎn)的基因型，基于基因型差異建立了可用于11個(gè)品種鑒別的特征SSR指紋，數(shù)據(jù)更為精確可靠，證明了SSR熒光標(biāo)記用于油茶品種指紋圖譜構(gòu)建和品種鑒定的可行性。

獲得多態(tài)性高的SSR引物是SSR指紋鑒別的必要保證。多態(tài)性信息含量(PIC)值的高低和等位變異的數(shù)量是衡量SSR引物多態(tài)性的基本指標(biāo)。與彭嬋等[17]、Jia等[18]和張恩慧等[19]的研究相比，本研究所采用的14個(gè)多態(tài)性SSR引物的PIC值和基因型數(shù)量的變化幅度均較大，且PIC值偏低(0.08～0.84，平均0.53)，基因型數(shù)量較高(2～10種，平均5.5種)。這是由于所采用SSR引物的多態(tài)性高低存在較大差異，因而對油茶品種SSR指紋鑒別的貢獻(xiàn)大小不一。因此，在SSR指紋鑒別中，不僅需要開發(fā)出更多、多態(tài)性更高的SSR引物，獲得單個(gè)品種(例如本研究的11個(gè)品種)特征引物-基因型，同時(shí)也要采用不同的引物組合才能完成多個(gè)品種的相互鑒別，正如本研究利用Co62和CK03組合、和CK55和TUGMS28組合來鑒別長林40號品種。

DUS(特異性Distinctness、一致性Uniformity、穩(wěn)定性Stability)測試是植物新品種保護(hù)的技術(shù)基礎(chǔ)和授權(quán)的科學(xué)依據(jù)。國際植物新品種保護(hù)聯(lián)盟(UPOV)已將SSR標(biāo)記作為DNA指紋數(shù)據(jù)庫構(gòu)建的推薦標(biāo)記之一。國內(nèi)外已有不少將SSR標(biāo)記用于玉米[29-30]、小麥[31]、水稻[32]、油菜[33]、多花黑麥草[34]、棉花[35]、茶樹[36]等DNA指紋數(shù)據(jù)庫構(gòu)建的報(bào)道，但迄今將SSR分子標(biāo)記應(yīng)用于油茶DUS測試的研究還未見報(bào)道。因此在本研究基礎(chǔ)上，今后工作的重點(diǎn)是將SSR分子標(biāo)記技術(shù)拓展到油茶品種分子標(biāo)記DUS測試指南的研制和油茶品種DNA指紋數(shù)據(jù)庫的構(gòu)建，為油茶新品種申請、測試與鑒定提供補(bǔ)充依據(jù)。

開發(fā)出一套油茶品種的高效分子鑒別技術(shù)，無論在科研服務(wù)層面上對于油茶品種鑒別、保護(hù)油茶品種知識產(chǎn)權(quán)，還是在產(chǎn)業(yè)層面上對于油茶產(chǎn)業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展，均提供了一種有價(jià)值的技術(shù)支撐。本研究表明利用SSR熒光標(biāo)記技術(shù)可以獲得油茶品種在SSR位點(diǎn)的特征指紋，可彌補(bǔ)在油茶芽砧苗期不具備可識別特性的不足，從而用于對油茶品種的輔助鑒別，從根本上保證油茶種苗的質(zhì)量。

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Identification of 12 Superior Cultivars ofCamelliaoleiferaby Using Simple Sequence Repeat Feature Indexes

Li Haibo1Ding Hongmei2Chen Youwu1Xu Liang1Li Nan1Hu Chuanjiu1

(Zhejiang Academy of Forestry Zhejiang Provincial Key Laboratory of Biological and Chemical Utilization of Forest Resource1, Hangzhou 310023) (Zhejiang Chinese Medical University2, Hangzhou 310053)

In order to develop a novel molecular recognition method for the identification of oil tea (Camelliaoleifera) superior cultivars and provide technical support for the protection of superior resources, the SSR feature indexes for 12 Changlin series superior cultivars ofC.oleiferawere constructed by using SSR fluorescence labeling in the present study. With 14 pairs of polymorphic SSR primers, a total of 62 polymorphic bands were amplified and 77 genotypes were detected from the 14 SSR loci in the studied 12 superior cultivars ofC.oleifera. For each SSR primer, the average number of polymorphic bands and genotypes were 4.4 and 5.5, respectively. The range of polymorphism information content (PIC) and genetic similarity byDicecoefficients at 14 SSR loci in the 12 cultivars were 0.08～0.84 and 0.39～0.90, respectively. Based on the genotypic difference at the 14 SSR loci, a total of 45 pairs of SSR characteristic primers together with its corresponding genotype (SSR characteristic primer pairs-genotype) were selected as SSR characteristic fingerprints for the molecular recognition of 11 Changlin series superior cultivars ofC.oleifera. This study also provided the technical ideas for establishing DNA fingerprint database ofC.oleiferaon a higher level, for the molecular breeding of superior cultivars ofC.oleifera, and for DUS (distinctness, uniformity and stability) testing ofC.oleifera.

Camelliaoleifera, genotype, cultivar identification, SSR fingerprints, fluorescence detection

S722.3

A

1003-0174(2017)10-0171-08

時(shí)間：2017-10-20 13:24:01

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.2864.TS.20171020.1324.002.html

浙江省科研院所扶持專項(xiàng)(2014F30002,2013F5 0012),浙江省重大科技專項(xiàng)(2010C02005-1)

2017-03-18

李海波，男，1969年出生，研究員，林木遺傳育種

胡傳久，男，1982年出生，副研究員，經(jīng)濟(jì)林栽培