RP—HPLC檢測不同pH條件下毛訶子中單寧酸等4種多酚化合物含量變化

馬定乾+陳平+華杰+左曉霜+范源

摘要：目的 應用RP-HPLC法分析在不同的 pH 溶液中，毛訶子中Tannins、GA、β-PGG及Corilagin的含量變化。方法 將毛訶子粉末分別采取回流提取方法的產(chǎn)物加入 pH 為2-7緩沖液，用反相高效液相色譜測定單寧酸、沒食子酸、β-PGG 及柯里拉京的含量并分析。結(jié)果 毛訶子中單寧酸含量隨pH增大而增加；沒食子酸含量隨pH增大而變化不明顯；β-PGG含量隨pH增大而減小；柯里拉京含量隨pH增大而減小。結(jié)論 通過研究不同pH條件下毛訶子中的Tannins、GA、β-PGG 及Corilagin的含量變化，可為毛訶子中相關成分的質(zhì)控提供一定理論參考。

關鍵詞：毛訶子；單寧酸；沒食子酸；β-PGG；柯里拉京；RP-HPLC

中圖分類號：R9272 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2017）10-0072-04

Determination of Content Changes of Four Tannin Polyphenolic Compounds in Fructus

Terminaliae Billericae by RP-HPLC under Different pH Conditions

MA Ding-gan， CHEN Ping， HUA Jie， ZUO Xiao-shuang， FAN Yuan

（Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650500， China）

【Abstract】Objective： To analyze the contents of tannins， agllic acid， β-PGG and corilagin in Fructus Terminaliae Billericae in different pH solutions by using RP-HPLC Methods： The products extracted from Terminaliae Billericae powder by reflux extraction were joined with 2 to 7 pH buffer solution and the contents of tannic acid， gallic acid， β-PGG and corilagin were determined and analyzed by RP-HPLC Results：The content of tannic acid increased with the increase of pH The content of gallic acid changed unapparently with the increase of pH The content of β-PGG decreased with the increase of pH The content of corilagin decreased with the increase of pH Conclusion： By studying the content changes of tannins， GA， β-PGG and corilagin in Fructus Terminaliae Billericae under different pH conditions， we can provide some theoretical reference for the quality control of related components in Fructus Terminaliae Billericae

【Key words】Fructus Terminaliae Billericae， tannic acid， agllic acid， β-PGG， corilagin， RP-HPLC

毛訶子（terminaliae belliricae fructus）系藏族習用藥材，主產(chǎn)于云南、西藏地區(qū)。為使君子科植物毗黎勒Terminalia bellirica（Gaertn）Roxb的干燥成熟果實[1]。始載于《唐本草》，具有發(fā)表透疹，清熱解毒，升舉陽氣等功效。現(xiàn)代藥理學研究表明，毛訶子具有抗氧化性、治療CCl4引起的肝損傷、降低膽固醇作用、抗菌作用及降低由四氧嘧啶引起的糖尿病大鼠的血糖等作用。毛訶子所含化學成分有鞣質(zhì)類、三萜類、強心苷類、木質(zhì)素類及多糖類等。單寧酸類物質(zhì)為毛訶子主要抗氧化、抗腫瘤、抗菌等藥理作用的主要活性成分之一[2，4-8]。

Bharathi等[3]研究發(fā)現(xiàn)，毛訶子中的單寧類物質(zhì)為單寧酸（Tannins）、沒食子酸（Gallic acid，GA）、鞣花酸（Ellagic acid）、沒食子酸甲酯（Methyl gallate）、柯里拉京（Corilagin）以及1，2，4，6-五?；咸烟牵?，2，3，4，6-penta-O-galloylβ-D-glucos，β-PGG）。

毛訶子作為滇藏地區(qū)常用藥材，有很高的藥用價值，目前對于毛訶子中以上幾種物質(zhì)的含量隨pH變化的研究的報道較少。本實驗欲通過對不同pH條件下毛訶子中單寧酸、沒食子酸、β-PGG及柯里拉京含量進行測定，為云南地區(qū)毛訶子資源開發(fā)、質(zhì)量標準設定及工業(yè)運用提供一定的理論參考。

1 材料與方法

11 實驗材料與試劑 毛訶子干燥果實（購自安國市旭芳中藥材經(jīng)營有限公司），單寧酸標準品（購自成都邁斯克醫(yī)藥科技有限公司，批號：130721），沒食子酸標準品（購自云南昆明中檢所，批號：110831-201204），β-PGG標準品（購自成都普瑞法科技開發(fā)有限公司，批號：14021908），柯里拉京標準品（成都普瑞法科技開發(fā)有限公司，批號：14021908），甲醇（分析純）磷酸（分析純），甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），純凈水。endprint

12 實驗儀器 Agilent1200 型高效液相色譜儀（VWD 檢測器）DFY-600搖擺式高速萬能粉碎機，D2KW-D電熱恒溫水浴鍋，SK250HP型超聲清洗機（上海科導），分析天平，pH計（OHAUS/奧豪斯，型號STARTER3100/F）。

13 方法

131 樣品制備 稱取1 g毛訶子粉末，加入30 mL上述混合溶液，70℃水浴條件下回流30 min，過濾濃縮得到浸膏，將浸膏分為6等份，分別加入10 mL pH為2，3，4，5，6，7的緩沖溶液溶解，即得到供試樣品。

132 色譜條件 色譜柱C18柱（46×250 mm，5 um，Digma）；Tannins 甲醇-水（80：20）為流動相；流速為1 mL/min；檢測波長為275 nm；柱溫：25℃；GA 甲醇-02%磷酸（5：95）為流動相；流速為1 mL/min；檢測波長為273 nm；柱溫：25℃；β-PGG 梯度0 min乙腈-01%磷酸（10：90）；15 min乙腈-01%磷酸（25：75）流動相洗脫分析25 min；流速為1 mL/min；檢測波長為281 nm；柱溫：25℃；Corilagin 梯度0 min乙腈-01%磷酸（5：95）；10 min乙腈-01%磷酸（10：90）；15 min乙腈-01%磷酸（13：87）；20 min乙腈-01%磷酸（15：85）；30 min乙腈-01%磷酸（17：83）流動相洗脫分析30 min；流速為08 mL/min；檢測波長為220 nm；柱溫：25℃。

133 標準曲線的制作及供試品含量的測定 各個對照品按上述色譜條件分別按進樣量1 μL，3 μL，5 μL，7 μL，9 μL，11 μL進樣，得到單寧酸的峰面積（Y）及進樣量所對應單寧酸的含量（X）的線性回歸，分別在023-253μg；006-066μg；022-242μg；02-22μg范圍內(nèi)線性關系良好，得到方程 Y=1706X-3196，r=0994；Y=2248X+ 6816，r=0999；Y=2248X+ 6816，r=0999；Y=2820X+1375，r=999。按上述色譜條件將不同pH的供試液分別進樣10μL，得到峰面積，代入回歸方程計算出不同pH條件下相應化合物的含量。

134 穩(wěn)定性、精密度及重復性考察 實驗分別對以上四個標準對照液進行了精密度實驗及0 h、1 h、2 h、4 h、6 h和8 h的穩(wěn)定性實驗，Tannins、GA、β-PGG及Corilagin標準對照溶液的精密度實驗RSD分別為6333%，0152%，4450%，3680%，表明儀器精密度良好。以上四種化合物標準對照溶液的8h穩(wěn)定性實驗RSD為2696%，2850%，4460%，4490%，表明Tannins、GA、β-PGG及Corilagin標準液1 h-8 h穩(wěn)定性良好。

2 結(jié)果

不同pH條件下毛訶子中單寧酸，沒食子酸，β-PGG及柯里拉京含量（如表1、表2、表3、表4）。

不同pH條件下毛訶子中單寧酸沒食子酸，β-PGG及柯里拉京變化趨勢（圖1，圖2，圖3，圖4）。

3 結(jié)論

本實驗研究了不同pH條件下毛訶子中Tannins、GA、β-PGG及Corilagin的含量變化結(jié)果表明Tannins含量隨pH的增大而增大，原因可能是在酸性條件下分解，隨著pH升高，其分解減少；GA含量隨pH升高而變化不明顯；β-PGG含量隨著pH增大含量減小，原因可能是Tannins分解越來越少導致的其含量減少；Corilagin含量隨著pH的變化先增大后減小，可能是Tannins分解減少以及自身分解的原因。

毛訶子作為主產(chǎn)于云南的常用藏方三果湯其中的一味，具有潛在而大的價值。在2010版《中國藥典》一部中對毛訶子在質(zhì)控方面用浸出物測定法項下的冷浸法測定，沒有根據(jù)具體成分規(guī)定質(zhì)控。本實驗對不同pH條件下毛訶子中Tannins、GA、β-PGG及Corilagin含量變化進行了研究，或許可以為毛訶子中相關成分的質(zhì)控、提取加工以及養(yǎng)護提供一定理論參考。

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