分析PCR檢驗(yàn)法和細(xì)菌培養(yǎng)法用于陰道細(xì)菌檢驗(yàn)的效果

郭秋霞 楊俊歌

分析PCR檢驗(yàn)法和細(xì)菌培養(yǎng)法用于陰道細(xì)菌檢驗(yàn)的效果

郭秋霞 楊俊歌

目的 探討聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢驗(yàn)法和細(xì)菌培養(yǎng)法用于陰道細(xì)菌檢驗(yàn)的臨床效果。方法 選擇某院2015-07—2016-12診治的行陰道細(xì)菌檢驗(yàn)的病例中抽取94例作研究對(duì)象，并在細(xì)菌檢驗(yàn)中分別采用PCR檢驗(yàn)法、細(xì)菌培養(yǎng)法，對(duì)比兩種方法對(duì)陰道細(xì)菌的檢出率以及對(duì)陰道細(xì)菌分布情況的檢驗(yàn)準(zhǔn)確性。結(jié)果 ①PCR檢驗(yàn)法在本次陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中的陽(yáng)性率是88.3%，細(xì)菌培養(yǎng)法在本次陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中的陽(yáng)性率是75.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。②PCR檢驗(yàn)法對(duì)棒狀桿菌、加特納菌檢驗(yàn)準(zhǔn)確性分別是93.1%、91.2%，與細(xì)菌培養(yǎng)法的72.4%、70.6%相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05)，而PCR檢驗(yàn)法和細(xì)菌培養(yǎng)法在腸球菌檢驗(yàn)準(zhǔn)確性中比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 和細(xì)菌培養(yǎng)法相比較，PCR檢驗(yàn)法用于陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中的臨床效果更佳。

PCR檢驗(yàn)法；細(xì)菌培養(yǎng)法；陰道細(xì)菌檢驗(yàn)；檢出率；陰道細(xì)菌分布

陰道炎作為婦科中發(fā)病率相當(dāng)高的炎癥性疾病，早期確診、治療是應(yīng)對(duì)陰道炎的主要手段，而采取何種診斷方式，成為了現(xiàn)階段關(guān)于本病的研究熱點(diǎn)。細(xì)菌培養(yǎng)法作為常規(guī)診斷陰道炎的方式，伴隨研究日益深入，大量臨床研究證實(shí)，細(xì)菌培養(yǎng)法用于陰道炎早期診斷中的檢出率較低，且耗費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)，患者通常需要多次進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)才能確診[1-3]。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢驗(yàn)法作為近年來(lái)用于陰道細(xì)菌檢驗(yàn)的新型手段之一，優(yōu)勢(shì)明顯。本研究為明確PCR檢驗(yàn)法和細(xì)菌培養(yǎng)法用于陰道細(xì)菌檢驗(yàn)的臨床效果，對(duì)94例行陰道細(xì)菌檢驗(yàn)的患者應(yīng)用PCR檢驗(yàn)法、細(xì)菌培養(yǎng)法，現(xiàn)將2種陰道細(xì)菌的檢出率以及陰道細(xì)菌分布情況報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 本組接受陰道細(xì)菌檢驗(yàn)的患者共94例，均在2015-07—2016-12就診，均為育齡期女性。本組患者年齡為30～45歲，平均年齡(33.7±4.6)歲；入院時(shí)均主訴不同程度的陰道瘙癢、白帶分泌增多、異味等臨床表現(xiàn)，符合陰道炎臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；經(jīng)陰道分泌物的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)、免疫學(xué)試驗(yàn)、線索細(xì)胞檢查和細(xì)菌代謝產(chǎn)物測(cè)定等多項(xiàng)檢查證實(shí)：棒狀桿菌29株，加特納菌34株，腸球菌31例；本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)審批通過(guò)。

作者單位：450000 鄭州中醫(yī)骨傷病醫(yī)院檢驗(yàn)科(郭秋霞)；462300 河南漯河市召陵區(qū)人民醫(yī)院(楊俊歌)

1.2 研究方法

1.2.1 陰道分泌物采集方法 使用無(wú)菌棉簽，在患者陰道后穹窿部位蘸取陰道分泌物，隨后將陰道分泌物置入無(wú)菌鹽水內(nèi)貯存，留待陰道細(xì)菌檢驗(yàn)。

1.2.2 PCR檢驗(yàn)法 取1 000 μL陰道分泌物與生理鹽水混合液，予以15 min的離心處理，離心速度為12 000轉(zhuǎn)/min，棄掉上層清液后，將剩余組織裂解液置入60℃水中10 min，取出后再次實(shí)施15 min的離心處理，12 000轉(zhuǎn)/min，并將所獲取的上清液用于DNA模板制作中。檢驗(yàn)人員應(yīng)注意，選用陰性作參考研究，其中不加模板DNA，并在擴(kuò)增模板DNA時(shí)，應(yīng)在其中置入引物、緩沖對(duì)等，置入PCR儀中予以循環(huán)處理。

1.2.3 細(xì)菌培養(yǎng)法 取出陰道分泌物與生理鹽水的混合液置入培養(yǎng)基內(nèi)，并在CO2孵箱內(nèi)堅(jiān)持培養(yǎng)3 d。培養(yǎng)基內(nèi)長(zhǎng)成了菌落后，挑選露滴狀、灰色、光滑、半透明樣的細(xì)菌予以生化鑒定。

1.3 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)PCR檢驗(yàn)法、細(xì)菌培養(yǎng)法在本次陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中的陽(yáng)性率；統(tǒng)計(jì)PCR檢驗(yàn)法、細(xì)菌培養(yǎng)法在本次陰道細(xì)菌分布檢驗(yàn)中的準(zhǔn)確性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件輸入本組研究所得數(shù)據(jù)：對(duì)計(jì)數(shù)資料使用例數(shù)(n)表示，組間率(%)對(duì)比使用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05即對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PCR檢驗(yàn)法、細(xì)菌培養(yǎng)法在本次陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中的陽(yáng)性率比較 PCR檢驗(yàn)法在本次陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中的陽(yáng)性率是88.3%，細(xì)菌培養(yǎng)法在本次陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中的陽(yáng)性率是75.5%，對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表1)。

表1 PCR檢驗(yàn)法、細(xì)菌培養(yǎng)法在本次陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中的陽(yáng)性率比較(n)

2.2 PCR檢驗(yàn)法、細(xì)菌培養(yǎng)法在本次陰道細(xì)菌分布檢驗(yàn)中的準(zhǔn)確性比較 PCR檢驗(yàn)法對(duì)棒狀桿菌、加特納菌檢驗(yàn)準(zhǔn)確性分別是93.1%、91.2%，與細(xì)菌培養(yǎng)法的72.4%、70.6%相比均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05)，而PCR檢驗(yàn)法和細(xì)菌培養(yǎng)法在腸球菌檢驗(yàn)準(zhǔn)確性中比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05，表2)。

表2 PCR檢驗(yàn)法、細(xì)菌培養(yǎng)法在本次陰道細(xì)菌分布檢驗(yàn)中的準(zhǔn)確性比較[n(%)]

3 討論

現(xiàn)階段，多項(xiàng)研究證實(shí)，白帶檢查結(jié)果能夠在很大程度上反映女性健康狀態(tài)，因而女性一旦出現(xiàn)白帶分泌物增多癥狀，應(yīng)立即就醫(yī)，并予以高度重視，為早期診斷、準(zhǔn)確治療婦科病提供相應(yīng)依據(jù)[5-6]。近幾年來(lái)，伴隨國(guó)內(nèi)女性工作壓力加大、生活節(jié)奏加快、飲食生活習(xí)慣改變，女性陰道病發(fā)生率呈現(xiàn)出逐年升高的趨勢(shì)，其中以陰道炎發(fā)生率最高[7]。據(jù)報(bào)道，陰道炎作為女性多發(fā)病，與患者陰道中寄生菌群失衡相關(guān)[8]。一般而言，女性陰道中的寄生菌群互相平衡，細(xì)菌分泌各種物質(zhì)可維持陰道中環(huán)境穩(wěn)定。一旦陰道菌群失衡，陰道桿菌、陰道上皮細(xì)胞等維持菌群平衡的最重要細(xì)菌可大量死亡，致病菌可快速增殖，并在繁殖期間消耗大量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，致使陰道上皮細(xì)胞失去其應(yīng)有代謝功能，并引發(fā)陰道內(nèi)酸堿水平紊亂。陰道上皮細(xì)胞喪失了屏障保護(hù)功能，可引發(fā)炎癥，表現(xiàn)為白帶增多、外陰瘙癢等。

陰道炎的產(chǎn)生、進(jìn)展均較遲緩，許多陰道炎患者在發(fā)病初期無(wú)明顯癥狀，而一旦出現(xiàn)明顯臨床表現(xiàn)時(shí)，已經(jīng)進(jìn)展成盆腔、腹部疾病。據(jù)報(bào)道[9]，若陰道炎長(zhǎng)期反復(fù)發(fā)作，可導(dǎo)致患者不孕。鑒于此，探尋一種可早期判斷女性是否存在感染、確定致病菌種的方法，成為陰道細(xì)菌檢驗(yàn)的研究熱點(diǎn)。細(xì)菌培養(yǎng)法在女性陰道菌群檢測(cè)中應(yīng)用效果良好，然而該檢驗(yàn)方法中檢驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)、設(shè)備要求高、檢出率低等弊端日益暴露。PCR檢驗(yàn)法作為近年來(lái)廣泛應(yīng)用于陰道細(xì)菌檢驗(yàn)的新型檢測(cè)技術(shù)，可歸納為熒光定量檢測(cè)方法，是一種融合了DNA雜交特異性、RCP敏感性優(yōu)勢(shì)的檢驗(yàn)技術(shù)，具有精度準(zhǔn)、檢出率高等優(yōu)勢(shì)。經(jīng)分析，PCR檢驗(yàn)法的操作過(guò)程簡(jiǎn)單，對(duì)設(shè)備要求不高，并能在檢驗(yàn)中做到“無(wú)菌操作”要求，避免了細(xì)菌感染，從而防止檢驗(yàn)結(jié)果異常。同時(shí)，PCR檢驗(yàn)法的檢驗(yàn)時(shí)間較短，能夠快速獲得檢驗(yàn)結(jié)果，避免患者多次、重復(fù)檢驗(yàn)，減少了其在陰道細(xì)菌檢驗(yàn)過(guò)程中花費(fèi)的時(shí)間與精力。據(jù)報(bào)道[10]，PCR檢驗(yàn)法具有操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、特異性良好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，是最適宜用于陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中的分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)。而相較于PCR檢驗(yàn)法，細(xì)菌培養(yǎng)法雖然理論知識(shí)簡(jiǎn)單，但耗時(shí)長(zhǎng)，且容易在檢驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)細(xì)菌污染，影響檢驗(yàn)結(jié)果。

本研究結(jié)果提示，PCR檢驗(yàn)法在本次陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中的陽(yáng)性率是88.3%，高于細(xì)菌培養(yǎng)法，且其對(duì)棒狀桿菌、加特納菌檢驗(yàn)準(zhǔn)確性也高于細(xì)菌培養(yǎng)法，可見(jiàn)PCR檢驗(yàn)法用于陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中的臨床效果優(yōu)于細(xì)菌培養(yǎng)法。

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2017-05-11)

1005-619X(2017)10-1087-02

10.13517/j.cnki.ccm.2017.10.034