Array-ELISA檢測六項腫瘤標(biāo)志物診斷結(jié)直腸癌的臨床價值分析

傅桂霞

(青島市第九人民醫(yī)院檢驗科，山東 青島 266002)

Array-ELISA檢測六項腫瘤標(biāo)志物診斷結(jié)直腸癌的臨床價值分析

傅桂霞

(青島市第九人民醫(yī)院檢驗科，山東 青島 266002)

目的探討微陣列酶聯(lián)免疫法(Array-ELISA)檢測六項腫瘤標(biāo)志物診斷結(jié)直腸癌(CRC)的臨床價值。方法選擇49例CRC患者作為CRC組，選擇19例同期進(jìn)行結(jié)直腸手術(shù)的良性病變患者作為良性組，另取同期71例健康體檢者作為對照組。采集3組患者的靜脈血，通過Array-ELISA技術(shù)進(jìn)行六項腫瘤標(biāo)志物(AFP、CEA、PSA、CA125、CA153及CA199)檢測。比較3組血清六項腫瘤標(biāo)志物檢測結(jié)果、CRC組ROC AUC結(jié)果、以及CRC組PRE與6項腫瘤標(biāo)志物的相關(guān)參數(shù)。結(jié)果(1)CRC組血清CEA、AFP、CA199及CA125水平均高于良性組與對照組(P<0.05)。3組PSA與CA153水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。(2)單項檢測中CEA(AUC=0.916,P=0.001)具有最高的診斷價值，Logistic回歸模型建立的PRE面積為0.932，均高于單項指標(biāo)檢測。(3)本組CRC患者中的CEA特異度、靈敏度與準(zhǔn)確率在單項中最高；聯(lián)合檢測中Logistic回歸預(yù)測變量PRE的特異度、靈敏度與準(zhǔn)確率高于CEA(P<0.05)。結(jié)論Array-ELISA對CRC患者六項腫瘤標(biāo)志物均有理想的檢測效果，但單項腫瘤標(biāo)志物的特異度、靈敏度具有一定的局限性，六項指標(biāo)聯(lián)合檢測可以有效提高CRC的檢出率。

Array-ELISA；六項腫瘤標(biāo)志物；結(jié)直腸癌；臨床價值

結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)是臨床最為常見的惡性腫瘤，由于早期無特異性的表現(xiàn)，多數(shù)患者就診時往往已步入晚期，繼而喪失了最佳的治療時機(jī)[1]。因此，盡早采取有效的診斷與治療措施是延長CRC患者生存時間的關(guān)鍵。研究發(fā)現(xiàn)，單項腫瘤標(biāo)志物對CRC的特異性與敏感性具有一定的局限性，而多項腫瘤標(biāo)志物則可以提高CRC的診斷率，且對轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)與術(shù)后療效具有顯著的評價作用[2]。微陣列酶聯(lián)免疫法(Array-ELISA)是生命科學(xué)中的一項高新科技檢測技術(shù)，其技術(shù)平臺主要包括現(xiàn)代微陣列技術(shù)、酶促化學(xué)發(fā)光技術(shù)及低溫電荷耦合器成像技術(shù)。為了進(jìn)一步完善CRC患者的臨床診療方案，本研究采用Array-ELISA法對49例CRC患者進(jìn)行了六項腫瘤標(biāo)志物檢測，并采用ROC曲線與Logistic回歸分析來探討六項腫瘤標(biāo)志物對CRC的臨床診斷價值，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選擇2016年1月至2016年12月本院收治的49例CRC患者作為CRC組，其中男性26例，女性24例；平均年齡(65.2±5.2)歲；選擇同期于本院進(jìn)行結(jié)直腸手術(shù)的19例良性病變患者作為良性組，其中男性10例，女性9例；平均年齡(65.5±5.3)歲。(1)所有患者均經(jīng)組織病理學(xué)檢查證實(shí)；(2)原發(fā)性病變；(3)本次研究內(nèi)容已告知患者或其家屬，并取得其知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)疾??；(2)近期有感染史。另取同期于本院進(jìn)行體檢的71例健康體檢者作為對照組(均無結(jié)直腸疾病史，臨床檢查未見異常)，其中男性36例，女性35例；平均年齡(65.7±5.4)歲。3組研究對象在性別及年齡構(gòu)成比較中差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2檢測方法

在晨起空腹?fàn)顟B(tài)下，采集3組患者的靜脈血3 mL，放置20 min后，離心5 min，控制室溫在1 800×g，使血清分離，對腫瘤標(biāo)志物[糖類抗原 125(CA125)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特異性抗原(PSA)、糖類抗原 199(CA199)、甲胎蛋白(AFP)和糖類抗原153 (CA153)]進(jìn)行檢測。(1)試劑與儀器：ECLIA分析儀由德國羅氏公司提供，均配置原廠校準(zhǔn)品、試劑與質(zhì)控物。Array-ELISA六項腫瘤標(biāo)志物檢測試劑盒由北京華大吉比愛生物技術(shù)有限公司提供。(2)Array-ELISA原理：采用雙抗體夾心試劑盒，以微陣列形式將CA153、CEA、AFP、CA199、CA125及PSA特異性抗體組織排布在微孔板內(nèi)，其中加入待檢測血漿標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品，待發(fā)生反應(yīng)后洗滌，添加酶標(biāo)抗體工作液給予持續(xù)性溫育反應(yīng)，完成反應(yīng)后再次洗滌，最后添加發(fā)光液，根據(jù)待測標(biāo)志物的濃度來增加發(fā)光信號。通過生物芯片閱讀設(shè)備準(zhǔn)確采集與處理微孔板內(nèi)微陣列信號、圖像，結(jié)合數(shù)據(jù)處理軟件，獲取到六項腫瘤標(biāo)志物標(biāo)本內(nèi)的定量數(shù)據(jù)結(jié)果。(3)Array-ELISA檢測步驟：將六項腫瘤標(biāo)志物標(biāo)本、50 μL待測標(biāo)本及質(zhì)控品依次加入微孔板內(nèi)；第1次溫育；采用封口膜將其封口，并振蕩45 min，溫度控制在37 ℃；5次洗液洗板，拍干；之后加入50 μL酶標(biāo)抗體工作液，第2次溫育；再予5次洗板，拍干；最后在每個孔內(nèi)加入發(fā)光液A與B混合物40 μL，馬上放入到生物芯片閱讀設(shè)備內(nèi)進(jìn)行檢測。

1.3觀察指標(biāo)

(1)觀察3組血清六項腫瘤標(biāo)志物檢測結(jié)果。參照試劑參考指標(biāo)：CA153<31.3 U/mL、CA199<37 U/mL、CA125<35 U/mL、CEA0.00～5.00 ng/mL、AFP 0.00～7.00 ng/mL、PSA 0.00～4.00 ng/mL，<參考指標(biāo)為陰性，≥參考指標(biāo)為陽性。(2)觀察CRC組的ROC AUC結(jié)果。以AFP、CEA、PSA、CA125、CA153及CA199為檢驗變量，將診斷結(jié)果作為狀態(tài)變量進(jìn)行ROC曲線分析。(3)觀察CRC組PRE與六項腫瘤標(biāo)志物的相關(guān)參數(shù)。通過Forward condition法實(shí)施Binary Logistic回歸分析[3]，去除無用變量，分析其余變化，得到CRC的概率預(yù)測方程，即P=1/[1+e-(-1.253+0.068AFP+0.033CA199-0.065CA154-0.018CA125)]，計算出個體預(yù)測值的變量PRE，并以似然比檢測Logistic回歸模型。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析

通過SPSS15.0對六項腫瘤標(biāo)志物的數(shù)據(jù)分布情況進(jìn)行狀態(tài)檢驗，非正態(tài)分布以Mann Whitney U及Kruskal-Wallis檢驗，正態(tài)分布以方差分析；計數(shù)資料、特異性與敏感性對比以χ2檢驗。采用Logistic回歸選擇變量，建立回歸方程與新變量，各項單項指標(biāo)與新變量進(jìn)行ROC曲線分析。

2 結(jié)果

2.1 3組血清六項腫瘤標(biāo)志物檢測結(jié)果對比

CRC組血清CEA、AFP、CA199及CA125水平均高于良性組與對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。3組PSA與CA153水平對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2 CRC組ROC AUC評價

單項檢測中，CEA(AUC=0.916,P=0.001)具有最高的診斷價值，CA153(AUC 0.576)與PSA(AUC=0.553)ROC曲線幾乎成對角線，診斷價值較低；Logistic回歸模型建立的PRE面積為0.932，均高于單項指標(biāo)檢測。見表2。

表1 3組血清六項腫瘤標(biāo)志物檢測結(jié)果對比

*P<0.05，與良性組比較；#P<0.05，與對照組比較。

表2 CRC組ROC AUC評價

2.3 CRC組PRE與6項腫瘤標(biāo)志物相關(guān)參數(shù)評價

本組CRC患者中的CEA特異度、靈敏度與準(zhǔn)確率在單項中最高；聯(lián)合檢測中Logistic回歸預(yù)測變量PRE的特異度、靈敏度與準(zhǔn)確率高于CEA(P<0.05)。見表3。

表3 CRC組PRE與6項腫瘤標(biāo)志物相關(guān)參數(shù)評價

*P<0.05，與CEA比較。

3 討論

近年來，隨著醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)的不斷發(fā)展與完善，CRC患者除了采用影像學(xué)與病理學(xué)診斷外，血清腫瘤標(biāo)志物檢測也得到了臨床的廣泛關(guān)注[4]。腫瘤標(biāo)志物又稱為腫瘤標(biāo)記物，是惡性腫瘤細(xì)胞中的特征性存在，或由惡性腫瘤細(xì)胞異常形成的物質(zhì)，或是宿主對腫瘤刺激反應(yīng)而形成的物質(zhì)，可作為評價腫瘤發(fā)生、進(jìn)展、判斷抗腫瘤治療效果的一類物質(zhì)。腫瘤標(biāo)志物主要存在于腫瘤患者體液、血液、組織及排泄物內(nèi)，可以通過生物學(xué)、免疫學(xué)及化學(xué)方法檢測到[5-6]。然而，研究發(fā)現(xiàn)，單個腫瘤標(biāo)志物的特異性與敏感性有限，所以國際上普遍采用多項標(biāo)志物聯(lián)合方案進(jìn)行檢驗，以便保證診療質(zhì)量[7]。目前，臨床主要采用酶免疫分析、放射免疫分析、時間分辨熒光免疫分析、化學(xué)發(fā)光免疫分析、生物芯片技術(shù)及ECLIA技術(shù)進(jìn)行腫瘤標(biāo)志物檢驗[8]。上述傳統(tǒng)檢測方法各具有優(yōu)勢，所以在較長一段時間，各項方式以互補(bǔ)方式應(yīng)用。

現(xiàn)階段，醫(yī)學(xué)界所發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)志物約100余種，而選擇正確的標(biāo)志物組合對腫瘤診斷具有至關(guān)重要的作用[9]。美國癌癥學(xué)會、美國臨床生化學(xué)會等研究發(fā)現(xiàn)，六項腫瘤標(biāo)志物PSA、CEA、AFP、CA199、CA125及CA153是評價腫瘤最為明確、穩(wěn)定及敏感度高的標(biāo)志物，幾乎可以適用于任何常見的腫瘤，對臨床診斷與評價抗腫瘤治療效果具有重要的意義[10-11]。CEA是檢測CRC最為靈敏的指標(biāo)，但因單項檢測存在一定的假陰性與假陽性，所以臨床易發(fā)生漏診。多項研究指出，為了有效降低誤診與漏診的發(fā)生概率，采用多個腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測來提高診斷CRC診斷的準(zhǔn)確率與靈敏度十分必要[12-13]。Array-ELISA試劑盒可以對六項腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行檢測，不僅縮短了檢測時間，且一次性檢出，控制了單項檢測的成本[14]。Array-ELISA的檢測原則是在相互無影響的基礎(chǔ)上，將腫瘤標(biāo)志物抗體等多類特異性生物活性物以固定的微陣列方式排列在每個微孔板板孔中，當(dāng)血漿內(nèi)抗原/抗體特異性結(jié)合于包被抗體/抗原后，再結(jié)合于酶標(biāo)抗體而形成免疫復(fù)合物，添加發(fā)光液，由生物芯片分析，繼而獲取到多項定量檢測指標(biāo)。本研究采用Array-ELISA技術(shù)對CRC患者的六項腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示CRC組血清CEA、AFP、CA199及CA125水平均高于良性組與對照組(P<0.05)。3組PSA與CA153水平對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。同時，本研究采用Logistic回歸分析，擬合最佳回歸曲線與ROC曲線，觀察六項腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合診斷CRC的效果，以及特異度、靈敏度及準(zhǔn)確率。結(jié)果提示，單項檢測中CEA(AUC=0.916,P=0.001)具有最高的診斷價值，說明CEA是CRC診斷的最佳單項標(biāo)志物，這與部分研究結(jié)果相符[15]。采用聯(lián)合檢測時，Logistic回歸分析所得出的預(yù)測變量PRE面積為0.932，均高于單項指標(biāo)檢測。此結(jié)果可見，聯(lián)合檢測能夠有效提高CRC的診斷效能。此外，本組CRC患者中的CEA特異度、靈敏度與準(zhǔn)確率在單項中最高，聯(lián)合檢測中Logistic回歸預(yù)測變量PRE的特異度、靈敏度與準(zhǔn)確率高于CEA(P<0.05)，進(jìn)一步說明聯(lián)合檢測利于CRC的檢出。

總之，Array-ELISA對CRC患者六項腫瘤標(biāo)志物均有理想的檢測效果，但單項腫瘤標(biāo)志物診斷CRC的特異度、靈敏度具有一定的局限性，六項指標(biāo)聯(lián)合檢測可以有效提高CRC的檢出率。臨床可以通過六項腫瘤標(biāo)志物結(jié)合影像學(xué)及個體情況對CRC患者進(jìn)行綜合評價，以便提高診療效果。

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ClinicalvalueofArray-ELISAindetectingsixtumormarkersindiagnosisofcolorectalcancer

FU Gui-xia

(DepartmentofLaboratory,QingdaoNinthPeople’sHospital,Qingdao266002,Shandong,China)

Objective：To evaluate the clinical value of Array-ELISA in the detection of six tumor markers in colorectal cancer (CRC).Methods49 cases of CRC patients as CRC group,19 cases of benign lesions were selected for colorectal surgery as the benign group,71 healthy subjects another same medical examination as the control group.The venous blood of three groups of patients was collected,and six tumor markers (AFP,CEA,PSA,CA125,CA153 and CA199) were detected by Array-ELISA technique.The serum markers of six tumor markers,the results of CRC,ROC and AUC in the three groups were observed and compared,and the parameters related to PRE and 6 tumor markers in group CRC were observed.ResultsThe serum CEA,CRC,CA199 and CA125 levels in CRC group were higher than those of benign group and control group (P<0.05).There was no significant difference between the three groups of PSA and CA153 (P>0.05).The single detection of CEA (AUC=0.916,P=0.001) had the highest diagnostic value of the Logistic regression model to establish the area for the PRE 0.932,were higher than the single index detection.The patients with CRC CEA in specificity,sensitivity and accuracy was the highest in the individual,combined detection in Logistic regression prediction variable PRE specificity,sensitivity and accuracy was higher than that of CEA (P<0.05).ConclusionArray-ELISA marker detection effect has the ideal of CRC patients with six tumor,but single tumor marker specificity and sensitivity has certain limitations,combined detection of six indexes can effectively improve the detection rate of CRC.

Array-ELISA;Six tumor markers;Colorectal cancer;Clinical value

10.3969/j.issn.1005-3697.2017.05.038

2017-05-14

傅桂霞(1971-)，女，主管檢驗師。E-mail：fuguixia71@126.com

時間： 2017-10-10 02∶28

http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20171010.0228.078.html

1005-3697(2017)05-0781-04

R735.3

A

(學(xué)術(shù)編輯廖濤)

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