HPLC測定短葶山麥冬藥材中短葶山麥冬皂苷C

●林鵬飛 馮鳳桃 宋涵 王海燕

HPLC測定短葶山麥冬藥材中短葶山麥冬皂苷C

●林鵬飛 馮鳳桃 宋涵 王海燕

目的采用HPLC 法測定短葶山麥冬藥材中短亭山麥冬皂苷C含量。方法：色譜柱為Hypersil BDS C18 (250 mm × 4. 6 mm，5 μm)，甲醇-0.1%磷酸二氫鉀溶液（用10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8.0）（77:23）為流動(dòng)相，柱溫為15℃，檢測波長203nm。結(jié)果：短亭山麥冬皂苷C在濃度為10.95μg/mL-175.19μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為101.6%，RSD = 1.03%(n = 6)。結(jié)論：所用方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可控制短葶山麥冬藥材的質(zhì)量。

短葶山麥冬；短葶山麥冬皂苷C；高效液相檢測法

短葶山麥冬Liriopemuscari(Decne.)Bailey為百合科山麥冬屬植物, 此屬植物包括8個(gè)種(1個(gè)變種)[1], 其中短葶山麥冬和湖北山麥冬一同收載于中國藥典2010 年版山麥冬項(xiàng)下[2]。短葶山麥冬主要分布在福建泉州市洛江區(qū)及莆田市仙游等地, 其具有養(yǎng)陰生津、潤肺清心的作用, 含有多糖和多種魯斯可皂苷, 其中短葶山麥冬皂苷C含量較多, 也是重要的活性成分, 現(xiàn)代研究表明[3～5], 短葶山麥冬皂苷C具有良好的免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗腫瘤、抗疲勞等作用。目前, 中國藥典收載的山麥冬(短葶山麥冬和湖北山麥冬), 它們的藥用部位是塊根, 大量的須根資源被棄之。本文建立了HPLC法, 測定短葶山麥冬中短葶山麥冬皂苷C含量。所建立的方法可以為短葶山麥冬的質(zhì)量控制研究提供一些有用的參考。

1 儀器、試藥和樣品

Agilent 1260 高效液相色譜儀；DAD檢測器；Agilent色譜數(shù)據(jù)工作站。

短葶山麥冬皂苷C對照品購于上海詩丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司。

2 溶液制備

2.1 對照品溶液的制備

取短葶山麥冬皂苷C對照品適量，精密稱定，加50%甲醇溶液溶解并定量稀釋制成每1mL約含短葶山麥冬皂苷C 50μg的溶液，即得。

2.2 供試品溶液的制備

取短葶山麥冬須根、塊根粉末(過3號篩)約1 g, 精密稱定,加乙醇50ml，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）15分鐘，取出，補(bǔ)足重量，放冷至室溫，過濾，精密量取續(xù)濾液25 mL, 減壓回收溶劑,殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ萦?0 mL量瓶中, 搖勻, 即得。

3 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.1%磷酸二氫鉀溶液（用10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8.0）（77:23）為流動(dòng)相，柱溫為15℃，流速1ml/min，檢測波長203nm。理論板數(shù)按短葶山麥冬皂苷C計(jì)應(yīng)不低于2000。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各40μL，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得,對照品及樣品色譜圖見圖1。

圖1 對照品(A)、短葶山麥冬塊根樣品(B)色譜圖

4 線性關(guān)系考察

取短葶山麥冬皂苷C對照品適量，精密稱定，用50%甲醇溶解，定容。配制成質(zhì)量濃度分別為每1mL含短葶山麥冬皂苷C 175.19μg的溶液。分別依次將其稀釋一倍，稀釋4次，得到5個(gè)濃度的對照品溶液短葶山麥 冬 皂 苷 C 175.19μg/mL、87.60μg/mL、43.80μg/mL、21.90μg/mL、10.95μg/mL的溶液。將以上共五個(gè)濃度的對照品進(jìn)樣分析，按“3”項(xiàng)上述色譜條件測定短葶山麥冬皂苷C峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），樣品濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)（X），得短葶山麥冬皂苷C回歸方程為y = 14.799x-44.41。本方法線性相關(guān)系數(shù)為r=0.9993，表明本方法短葶山麥冬皂苷C在10.95μg/mL-175.19μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

5 精密度試驗(yàn)

取“ 2.1”項(xiàng)下的對照品溶液，分別精密吸取同一對照品溶液40μL，連續(xù)測定6次，按“3”項(xiàng)上述色譜條件測定短葶山麥冬皂苷C的峰面積，本方法儀器精密度RSD=0.34%，RSD值小于2%，表明本方法精密度良好。

6 重復(fù)性試驗(yàn)取短葶山麥冬須根樣品1 共6 份, 每份1 g, 精密稱定, 依“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶，按3項(xiàng)上述色譜條件測定短葶山麥冬皂苷C的含量，外標(biāo)法計(jì)算短葶山麥冬皂苷C的含量，結(jié)果表明本方法重復(fù)性RSD=0.73%，RSD值小于3%，表明本方法重復(fù)性良好。

7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，分別在0h、2.5h、5h、7.5h、10h、12.5h小時(shí)進(jìn)樣，按“3”項(xiàng)上述色譜條件測定短葶山麥冬皂苷C的峰面積。樣品溶液在12.5小時(shí)內(nèi)樣品溶液RSD=0.63%，RSD值小于2%，結(jié)果顯示樣品溶液穩(wěn)定性良好。

8 加樣回收率試驗(yàn)

取已測知短葶山麥冬皂苷C含量(0.1137%)的短葶山麥冬須根樣品6份, 每份0.5 g，精密稱定，分別加入0.5491mg·mL-1的對照品溶液0.5mL，揮干溶劑，依“2.2”項(xiàng)下方法制備供試溶液, 進(jìn)樣測定, 計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率(n=6)為101.64%，RSD=1.03%，本方法回收率良好。

9 樣品測定

取不同批次短葶山麥冬的塊根樣品，依“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液, 在“3”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定, 以外標(biāo)法計(jì)算各樣品中短葶山麥冬皂苷C含量。結(jié)果3批塊根樣品中短葶山麥冬皂苷C含量分別為0.0537%, 0.0642%, 0.0597%。

10 討論

以往文獻(xiàn)中報(bào)道短葶山麥冬須根中的短葶山麥冬皂苷C和其他多個(gè)組分在紫外檢測器中無吸收[6]，但在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)短葶山麥冬在皂苷C存在末端吸收, 故本實(shí)驗(yàn)選擇紫外檢測器，選擇203nm波長下進(jìn)行測定短葶山麥冬中短葶山麥冬皂苷C含量，有較好的響應(yīng)值，且可以排查其他雜質(zhì)的干擾。本方法克服了以往難以用紫外檢測器測定短葶山麥冬須根中的短葶山麥冬皂苷C含量，為短葶山麥冬藥材的質(zhì)量控制提供很好的幫助。

(作者單位：福建省閩東力捷迅藥業(yè)有限公司)

[1]余伯陽, 徐國鈞.中藥麥冬資源的利用研究[J].中草藥, 1995,26(4):205.

[2]ChP(中國藥典).2015. (一部):26.

[3]Wu Feihua, Cao Jingsong, Jiang Jieyun, etal. Ruscogen in glycoside(Lm-3) isolated from Liriopemuscari improves liver injury by dysfunctioningl iver-infiltrating lymphocytes[J].J Pharm Pharmacol,2001,53(5):681.

[4]LiuJianli, ChenTing, YuBoyang, etal.Ruscogenin glycoside(Lm-3)isolated from Liriopemuscari inhibits lymphocy teadhesion to extra cellularmatrix. JPharm Pharmacol, 2002,54(7):959.

[5]余伯陽, 殷霞, 榮祖元, 短葶山麥冬皂苷C的藥理活性研究[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 1994, 25(5):286.

[6]狄天云,王剛力,林瑞超,劉麗芳[J].PLC-ELSD法測定短葶山麥冬中短葶山麥冬皂苷C的含量,藥物分析雜志.2011, 31(1):127-130.

Determination of Liriope muscari baily saponins C from Liriope muscari(Decne.)Bailey by HPLC

LIN Peng–fei1?,WANG Hai-yan1，SONG Han1，F(xiàn)ENG Feng-tao1
（1.Rejuvenation Pharmacy co,Ningde,Fujian,350002 P. R.china)

OBJECTIVE To determination the Liriope muscari baily saponins C from Liriope muscari(Decne.)Bailey by HPLC. METHODS HPLC method was adapted, with Hypersil BDS C18 (250 mm × 4. 6 mm，5 μm) as analytical column. The mobile phase consisted of methanol-0.1% potassium dihydrogen phosphate solution (adjusted to pH 8.0 with 10% sodium hydroxide solution) (77:23) with theflow rate of 1. 0 mL·min-1and the column temperature of 15 ℃ . RESULTS The method displayed good linearity within the concentration ranges of 10.95 -175.19μg/mL with average recovery of 101.6 % and RSD of 1.03% ( n =6). CONCLUSION This method is simple，accurate，repeatable and suitable for the determination of Liriope muscari(Decne.)Bailey.

Liriope muscari(Decne.)Bailey;Determination of Liriope muscari baily saponins C; HPLC