三種網(wǎng)狀纖維染色法的比較

王曉燕 高俊巖

（北京衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，北京 100053）

三種網(wǎng)狀纖維染色法的比較

王曉燕 高俊巖

（北京衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，北京 100053）

目的 對傳統(tǒng)Gomori網(wǎng)狀纖維染色法進(jìn)行改良，對比改良染色方法與傳統(tǒng)染色法的染色效果。方法 收集首都醫(yī)科大學(xué)三博腦科醫(yī)院經(jīng)病理診斷為腦膜瘤的外科手術(shù)切除標(biāo)本20例，進(jìn)行常規(guī)切片，每個(gè)標(biāo)本切片8張，隨機(jī)分為4組，分別用傳統(tǒng)Gomori染色法，改良Gomori染色法1、改良Gomori染色法2進(jìn)行網(wǎng)狀纖維染色，將網(wǎng)狀纖維染色結(jié)果進(jìn)行評分，對比染色效果。結(jié)果 傳統(tǒng)Gomori染色法與改良Gomori染色法2相比，結(jié)果有顯著性差異（p＜0.05）。改良Gomori染色法1與傳統(tǒng)Gomori染色法與改良方法1相比，結(jié)果無顯著性差異（p＞0.05）。結(jié)論 采用浸染的實(shí)驗(yàn)方法，縮短氨銀作用時(shí)間，可以提高網(wǎng)狀纖維染色作用效果。

網(wǎng)狀纖維；染色；比較

網(wǎng)狀纖維是網(wǎng)狀結(jié)締組織內(nèi)的一種纖維，較為纖細(xì)同時(shí)分支非常明顯，可以在網(wǎng)狀細(xì)胞與不同位置的細(xì)胞突之間完成自主穿行，由此可以連通成為一個(gè)固定的網(wǎng)狀支架[1]。網(wǎng)狀蛋白已經(jīng)被公認(rèn)為網(wǎng)狀纖維的最主要功能性成分，同時(shí)也屬于類型較為特殊的膠原蛋白，表層有特殊的膠糖蛋白，可以更加突出是嗜銀性特點(diǎn)。因此還可以將網(wǎng)狀纖維視為一種特殊的嗜銀纖維。通過該種特殊特點(diǎn)的應(yīng)用，可以實(shí)現(xiàn)氨液浸染產(chǎn)生網(wǎng)狀纖維的還原反應(yīng)，產(chǎn)生黑色素[2-3]。傳統(tǒng)G o m o r i染色法與改良G o m o r i染色法2相比，結(jié)果有顯著性差異（p＜0.05）。改良G o m o r i染色法1與傳統(tǒng)G o m o r i染色法與改良方法1相比，結(jié)果無顯著性差異。通過對網(wǎng)狀纖維染色過程中所用試劑和實(shí)驗(yàn)時(shí)間的控制，尋求更好的網(wǎng)狀纖維染色方法，用于網(wǎng)狀纖維實(shí)驗(yàn)教學(xué)和臨床病理診斷，提高網(wǎng)狀纖維染色質(zhì)量[4]。因此，網(wǎng)狀纖維染色在病理診斷中的應(yīng)用非常廣泛，組織中網(wǎng)狀纖維的多少和分布特點(diǎn)能給病理診斷提供重要的參考，纖維的粗細(xì)、疏密或有無斷裂對于判斷病變的性質(zhì)程度及其發(fā)展與轉(zhuǎn)歸具有重要意義[5]。網(wǎng)狀纖維染色較淺可能與作用時(shí)間有關(guān)，可在今后的實(shí)際工作中加以實(shí)踐摸索。改良G o m o r i染色法2縮短了氨銀的作用時(shí)間，從傳統(tǒng)的3 min縮短到40 s，作用方式為浸染而非滴染，染液可以反復(fù)回收使用。染色結(jié)果顯示網(wǎng)狀纖維為黑色，腫瘤內(nèi)部結(jié)構(gòu)清晰，對比鮮明，無背景著色。傳統(tǒng)G o m o r i染色法與改良方法2相比，結(jié)果有顯著性差異（p＜0.05）。通過對網(wǎng)狀纖維染色過程中所用試劑和實(shí)驗(yàn)時(shí)間的控制，尋求更好的網(wǎng)狀纖維染色方法，用于網(wǎng)狀纖維實(shí)驗(yàn)教學(xué)和臨床病理診斷，提高網(wǎng)狀纖維染色質(zhì)量。該文將利用臨床收集的腦膜瘤標(biāo)本，對比傳統(tǒng)G o m o r i染色法，改良G o m o r i染色法1、改良G o m o r i染色法2，確定腦膜瘤最佳的網(wǎng)狀纖維染色方法。

1 材料和方法

1.1 材料

標(biāo)本取自于首都醫(yī)科大學(xué)病理診斷為腦膜瘤的外科手術(shù)切除標(biāo)本20例，常規(guī)切片，每個(gè)標(biāo)本切片8張。

1.2 試劑配制

①0.5% 酸化高錳酸鉀溶液：0.5% 高錳酸鉀95 m L，3%硫酸5 m L。②2%草酸溶液：草酸2 g，蒸餾水100 m L。

1.3 染色方法

（1）傳統(tǒng) G o m o r i染色：1）切片常規(guī)脫蠟至水，蒸餾水洗；2）0.5%高錳酸鉀5 min，水洗1 min；3）2%草酸漂白2 min，以切片呈白色為度，水洗2 min；4）2.5%硫酸鐵銨媒染2 min；5）蒸餾水充分水洗。6）網(wǎng)狀纖維評分標(biāo)準(zhǔn)：＞75%區(qū)域著色清晰為4分，50%～70%為3分，25%～50%為2分，＜25%為1分，不著色0分；背景著色評分：無色為4分，＜25%區(qū)域有背景著色為3分，25%～50%為2分，50%～75%為1分，＞75%為0分，蒸餾水洗2次；13）蘇木素復(fù)染；14）常規(guī)脫水，透明，封固。（2）改良G o m o r i染色法1：1）切片常規(guī)脫蠟至水，蒸餾水洗；2）1%過碘酸5 min；3）水洗 2 min；4）2.5%硫酸鐵銨媒染 2 min；5）蒸餾水充分水洗；6）G o m o r i氨銀溶液染色3 min，蒸餾水洗3次；7）10%甲醛還原5 min；8）蒸餾水洗2次；9）0.2%氯化金調(diào)色2 min；10）蒸餾水洗2次；11）5%硫代硫酸鈉中固定2 min；12）自來水洗數(shù)分鐘，蒸餾水洗2次；13）蘇木素復(fù)染；14）常規(guī)脫水，透明，封固。（3）改良 G o m o r i染色法 2：1）切片常規(guī)脫蠟至水，蒸餾水洗；2）0.5%高錳酸鉀5 min，水洗1 min；3）2%草酸漂白2 min，以切片呈白色為度，水洗2 min；4）2.5%硫酸鐵銨媒染 2 min；5）蒸餾水充分水洗；6）G o m o r i氨銀溶液染色40 s，蒸餾水洗3次；7）10%甲醛還原5 min；8）蒸餾水洗 2次；9）0.2%氯化金調(diào)色 2 min；10）蒸餾水洗2次；11）5%硫代硫酸鈉中固定2 min；12）自來水洗數(shù)分鐘，蒸餾水洗2次；13）蘇木素復(fù)染；14）常規(guī)脫水，透明，封固。

1.4 觀察方法

光學(xué)顯微鏡下觀察染色效果，根據(jù)網(wǎng)狀纖維著色、背景著色、染色背景進(jìn)行評分。網(wǎng)狀纖維評分標(biāo)準(zhǔn)：＞75%區(qū)域著色清晰為4分，50%～70%為3分，25%～50%為2分，＜25%為1分，不著色0分；背景著色評分：無色為4分，＜25%區(qū)域有背景著色為3分，25%～50%為2分，50%～75%為1分，＞75%為0分；背景污染評分：無色為4分，有1處為3分，2處為2分，3處為1分，≥3處為0分。3項(xiàng)分值相加為該例染色片評分（最高12分），各組總積分/例數(shù)=染色質(zhì)量平均分[6]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用S P S S統(tǒng)計(jì)軟件包對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用單因數(shù)方差分析對各組間評分進(jìn)行比較。

2 結(jié)果

傳統(tǒng)G o m o r i染色法（圖1）染色結(jié)果顯示結(jié)構(gòu)對比清晰，網(wǎng)狀纖維呈現(xiàn)黑色，但有明顯背景著色，而改良方法2（圖2）網(wǎng)狀纖維為黑色，結(jié)構(gòu)清晰，對比鮮明，無背景著色[7]。傳統(tǒng)G o m o r i染色法與改良方法2相比，結(jié)果有顯著性差異（p＜0.05）。改良方法1（圖1）背景干凈，結(jié)構(gòu)對比清晰網(wǎng)狀纖維染色為黑色，但是顏色略淺，傳統(tǒng)G o m o r i染色法與改良方法1相比，結(jié)果無顯著性差異（見表1）

表1 腦膜瘤組織三種網(wǎng)狀纖維Gomori染色質(zhì)量對比

3 結(jié)論與討論

圖1 腦膜瘤組織傳統(tǒng)Gomori染色法

圖2 改良Gomori染色法1

圖3 改良Gomori染色法2

我院病理檢驗(yàn)技術(shù)教學(xué)和臨床病理實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)狀纖維染色常用G o m o r i法，傳統(tǒng)的G o m o r i染色法一般需經(jīng)過氧化、漂白、媒染、浸銀、還原、調(diào)色、固定幾個(gè)步驟完成。傳統(tǒng)G o m o r i染色法進(jìn)行改良，采集首都醫(yī)科大學(xué)病理診斷為腦膜瘤的外科手術(shù)切除標(biāo)本，常規(guī)切片，進(jìn)行網(wǎng)狀纖維染色。改良G o m o r i染色法1用過碘酸取代了高錳酸鉀氧化作用和草酸的漂白作用，實(shí)驗(yàn)時(shí)間為5 min，此法可縮短3～5 min實(shí)驗(yàn)時(shí)間，簡化了實(shí)驗(yàn)步驟，染色結(jié)果顯示瘤體內(nèi)部結(jié)構(gòu)對比清晰，漂白一般使用草酸，利用草酸的還原作用，使切片成為白色。媒染一般使用硫酸鐵銨，硫酸鐵銨可以提高網(wǎng)狀纖維對銀鹽的親和力，提高網(wǎng)狀纖維和背景的對比度。浸銀一般使用氨銀溶液，此步驟為關(guān)鍵環(huán)節(jié)，氨銀溶液的配置以及氨銀液染色時(shí)間是關(guān)鍵。配制氨銀溶液時(shí)，玻璃器皿必須十分清潔，而且需雙蒸水，禁用自來水。甲醛是還原劑，能把結(jié)合在網(wǎng)狀纖維上的氨銀絡(luò)合物還原成棕黑色的金屬銀鍍在網(wǎng)狀纖維表面。甲醛的還原時(shí)間要嚴(yán)格控制不能過短也不能過長否則染色效果不佳。氯化金起到調(diào)色作用，調(diào)色時(shí)間一般為1～2 min。最后用硫代硫酸鈉進(jìn)行固定，硫代硫酸鈉能清除未被甲醛還原和未與氯化金作用的銀，使切片著色固定清晰持久[8，9]。該文對傳統(tǒng)G o m o r i染色法進(jìn)行改良，采集首都醫(yī)科大學(xué)病理診斷為腦膜瘤的外科手術(shù)切除標(biāo)本，常規(guī)切片，進(jìn)行網(wǎng)狀纖維染色。改良G o m o r i染色法1用過碘酸取代了高錳酸鉀氧化作用和草酸的漂白作用，實(shí)驗(yàn)時(shí)間為5 min，此法可縮短3～5 min實(shí)驗(yàn)時(shí)間，簡化了實(shí)驗(yàn)步驟，染色結(jié)果顯示瘤體內(nèi)部結(jié)構(gòu)對比清晰，背景干凈，網(wǎng)狀纖維染色為黑色，但是相對于傳統(tǒng)G o m o r i染色法顏色較淺，通過網(wǎng)狀纖維著色、背景著色、背景污染物進(jìn)行評分，與傳統(tǒng)G o m o r i染色法比較，無顯著差異。網(wǎng)狀纖維染色較淺可能與作用時(shí)間有關(guān)，可在今后的實(shí)際工作中加以實(shí)踐摸索。改良G o m o r i染色法2縮短了氨銀的作用時(shí)間，從傳統(tǒng)的3 min縮短到40 s，作用方式為浸染而非滴染，染液可以反復(fù)回收使用。染色結(jié)果顯示網(wǎng)狀纖維為黑色，腫瘤內(nèi)部結(jié)構(gòu)清晰，對比鮮明，無背景著色。傳統(tǒng)G o m o r i染色法與改良方法2相比，結(jié)果有顯著性差異（p＜0.05）。綜上所述，通過對網(wǎng)狀纖維染色過程中所用試劑和實(shí)驗(yàn)時(shí)間的控制，尋求更好的網(wǎng)狀纖維染色方法，用于網(wǎng)狀纖維實(shí)驗(yàn)教學(xué)和臨床病理診斷，提高網(wǎng)狀纖維染色質(zhì)量。

[1] 染英杰，凌啟波，張威.臨床病理學(xué)技術(shù)[M].第1版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：97-102.

[2] 韓慶偉，張?jiān)?特殊染色網(wǎng)狀纖維在病理診斷中的應(yīng)用[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2007，14（11）：1420.

[3] 李淑蓮，李麗娟，董祥梅.網(wǎng)狀纖維染色改良新方法[J].牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，32（3）：61-62.

[4] 金玉蘭，田澄，石少輝，等.網(wǎng)狀纖維和α- 平滑肌肌動蛋白/ED-1免疫組織化學(xué)雙重染色方法[J].中華病理學(xué)雜志，2007，36（3）：210-211.

[5] 田玉旺，李琳，朱紅艷，等.提高網(wǎng)狀纖維染色質(zhì)量的技術(shù)探討[J].中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2012，21（3）：316-318.

[6] 朱育連，黃海建，熊喜生，等.改良Gomori網(wǎng)狀纖維染色減少背景染色的體會[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2011，27（11）：1254-1255.

[7] 楊世峰，程國平.介紹一種網(wǎng)狀纖維染色改良法[J].解剖學(xué)雜志，2010，33（1）：132-133.

[8] Kuter DJ，Bain B，Mufti G，Bagg A，Hasserjian RP. Bone marrow fibrosis：pathophysiology and clinical significance of increased bone marrow stromal fibres[J].Br J Haematol，2007，139（3）：351-362.

[9] 王炳海，方慶全，葉關(guān)華.提高網(wǎng)狀纖維染色病理實(shí)驗(yàn)教學(xué)質(zhì)量的探討[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，34（7）：1029-1030.

The Comparation of Three Reticular Fiber Staining

Wang Xiaoyan Gao Junyan
（Beijing Health Vocational College，Beijing 100053，China）

Objective To compare the effect of three reticular fiber staining through improving the methods of reticular fiber staining. Methods The specimens of 20 meningeal tumour were collected from Sanbo Brain Hospital Capital Medical University. The specimens then were made into 160 regular histological section (20*8) which were divided into three groups: traditional Gomori reticular fiber staining group, improved Gomori reticular fiber staining 1 group, Gomori reticular fiber staining 2 group. The effect of reticular fiber staining was observed and graded then all the data were analyzed by the software SPSS statistically. Results Compared with traditional Gomori reticular fiber staining group, improved Gomori reticular fiber staining 2 group has better effect（p＜0.05）.There was no significant difference between Gomori reticular fiber staining 1 group and traditional Gomori fiber reticular staining group（p＞0.05）. Conclusion The effect of fiber was improved by dipping and shortening the time in silver nitrate.

reticular fiber；staining；comparation

北京衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院院級課題基金資助項(xiàng)目（編號ZY2015—03）

王曉燕，碩士，講師，研究方向：心血管病理生理、網(wǎng)狀纖維染色。