草莓表面典型微生物鑒定、16SrDNA同源性分析及附著能力研究(Ⅱ)

魏 超，郭靈安 ，代曉航，楊文婷

(1. 四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測(cè)試中心，四川 成都 610066；2. 樂山市農(nóng)業(yè)局，四川 樂山 614000)

草莓表面典型微生物鑒定、16SrDNA同源性分析及附著能力研究(Ⅱ)

魏 超1，郭靈安1，代曉航1，楊文婷2

(1. 四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測(cè)試中心，四川 成都 610066；2. 樂山市農(nóng)業(yè)局，四川 樂山 614000)

研究草莓表面微生物分布狀況，分析其附著能力為草莓安全食用提供保障。按照草莓生長的3個(gè)階段進(jìn)行2年度連續(xù)抽樣，對(duì)分離草莓的表面典型微生物進(jìn)行生化分析及16SrDNA測(cè)序鑒定，對(duì)分離種最多的泛菌采用最大簡(jiǎn)約法(MP)進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析，并觀察沙雷菌和泛菌附著能力。 結(jié)果表明，3種典型的沙雷菌屬微生物在草莓表面均有檢出，泛菌屬微生物檢出種類較多，且基因型差異較明顯。在電鏡下，能明顯觀察到泛菌屬泛菌和粘質(zhì)沙雷菌對(duì)草莓表皮的附著，含氯清洗劑和10 %生理鹽水可對(duì)其有效祛除。草莓表面附著多種屬微生物，有效的清洗方法可以清除大部分微生物，此研究為草莓食用的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供理論依據(jù)。

草莓；微生物；同源性；食用安全控制

草莓果肉多汁，營養(yǎng)豐富但容易腐爛，因其糖量高、含水量高并且質(zhì)地柔軟，較易成為微生物的繁殖生長的溫床。草莓表面微生物的大量增殖加快草莓腐爛速度，使草莓很難長久保鮮，同時(shí)草莓表面共生的致病微生物也為草莓的食用安全帶來隱患。

在對(duì)草莓表面微生物的菌落結(jié)構(gòu)的研究中，發(fā)現(xiàn)草莓表面長期分布多種細(xì)菌，以腸桿菌科微生物為主，共生其他致軟腐微生物及其條件致病微生物[1]。沙雷菌屬(Serratia)的細(xì)菌革蘭氏染色陰性直桿菌，無莢膜，無芽孢，通常靠周身鞭毛運(yùn)動(dòng)，兼性厭氧，《伯杰鑒定細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》(Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology)將沙雷菌屬細(xì)菌分為10個(gè)種，并進(jìn)一步明確了生物型，沙雷菌屬在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)過夜可形成直徑為1.5～2.0 mm的菌落，在12～36 ℃培養(yǎng)菌落產(chǎn)靈菌紅素(prodigiosin)和比羧酸(pyrimine)2種不同色素，在培養(yǎng)基上表現(xiàn)為菌落紅色[2]。沙雷菌屬的部分種為條件致病菌多以受到醫(yī)學(xué)界的重視，被認(rèn)為是醫(yī)院內(nèi)感染的重要病原菌。泛菌屬(Pantea)也被成為多源菌屬，菌內(nèi)包括多個(gè)種，一般為革蘭氏染色陰性直桿菌，無莢膜，無芽孢，一些菌株可以形成長鏈或者類似球體的結(jié)合體，被稱為公質(zhì)體(symplasmata)，在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的菌落光滑，半透明，菌落為黃色、淺米色至淡橘黃色[2]，可從植物、種子、水果、及人體(尿液、血液、傷口等)分離得到，有些菌株是植物病原體，有些菌株也可造成人類感染[3-6]。16SrDNA 序列測(cè)定在細(xì)菌鑒定中已廣泛應(yīng)用，利用保守區(qū)域設(shè)計(jì)的通用引物幾乎能與所有種屬靶位點(diǎn)核糖體結(jié)合，對(duì)未知細(xì)菌及特殊細(xì)菌的鑒定具有優(yōu)勢(shì)[7]，在對(duì)草莓表面微生物進(jìn)行整理后，采用16SrDNA 分子檢測(cè)方法對(duì)不同時(shí)期草莓上細(xì)菌的分布情況進(jìn)行調(diào)查，對(duì)出現(xiàn)率高的泛菌和沙雷菌進(jìn)行同源性分析，研究草莓表面微生物種群的的分布關(guān)系，用電鏡等方法對(duì)微生物在草莓的附著進(jìn)行觀察研究，并用常見多種清洗方法對(duì)草莓表面幾種微生物的去除比較。研究草莓表面微生物分布及附著，旨在對(duì)食用草莓表面微生物的風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行分析，為草莓上細(xì)菌污染的干預(yù)方法提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 供試材料 草莓(FragariaananassaDuch.)來源為四川省成都市某草莓無公害種植基，根據(jù)生長階段連續(xù)2年在12月份青果期，2月份冬草莓成熟期及4月份春草莓成熟期各選取5個(gè)批次共30份樣品進(jìn)行微生物篩查。

1.1.2 儀器與試劑 微生物培養(yǎng)及生化鑒定：用蛋白質(zhì)緩沖水(BPW)、營養(yǎng)瓊脂平板購于廣東環(huán)凱，微生物鑒定儀器為法國生物梅里埃公司ATB細(xì)菌鑒定儀；鑒定試劑條ID 32 E為法國生物梅里埃公司。高壓滅菌鍋為上海三申，MJX-500 培養(yǎng)箱。

微生物分子鑒定：作引物正向引物(F27):5-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3;反向引物(R1492):5-TACGYTACCTTGTTACGACT-3，測(cè)序?yàn)槌啥紓ソ苌锛夹g(shù)有限公司。 MasterMix 購于成都博瑞克生物技術(shù)有限公司; 微生物裂解液的 Lysis Buffer為 Takara 公司。附著能力研究：顯微鏡L-1800，掃描電子顯微鏡KYKY280-B,

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 微生物分離培養(yǎng) 稱取25 g樣品，用蛋白質(zhì)緩沖水(BPW)1∶10增菌，將增菌液分別置于有氧、厭氧條件下36 ℃培養(yǎng)18～24 h后將增菌液按照一定比例稀釋后涂布于營養(yǎng)瓊脂平板， 36 ℃培養(yǎng)24 h，挑取各平板上不同類型菌落形態(tài)微生物于營養(yǎng)瓊脂平板上反復(fù)經(jīng)典純化。

1.2.2 生化鑒定 營養(yǎng)瓊脂挑取可分離的單菌落，進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢，G-菌使用ID 32 E試劑條。鑒定微生物時(shí)挑取營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)12～24 h微生物菌落至比濁管，振蕩分散，將菌液調(diào)至0.5麥?zhǔn)蠞岫?，由ATB系統(tǒng)自動(dòng)讀取試劑條信息分析并給出最終結(jié)果。

1.2.3 微生物分子試驗(yàn) ①DNA 模板制備。用滅菌槍頭將單菌落挑至50 μl Lysis Buffer裂解液中，混合，沸水浴15 min，10 000 r/ min離心冰浴，取裂解后上清液作為PCR反應(yīng)模板。②PCR 反應(yīng)體系 反應(yīng)體系體積為25 μl，Taqmix(2×) 12.5 μl，上下游引物各1 μl，模板DNA 1 μl，ddH2O補(bǔ)齊，PCR 反應(yīng)條件為:預(yù)變性3 min 94℃，變30 s 94 ℃，退火30 s 55 ℃，延伸2 min 72 ℃，30個(gè)循環(huán)，72 ℃保溫10 min。③測(cè)序及比對(duì)。PCR產(chǎn)物直接提交測(cè)序公司進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果比對(duì)目標(biāo)16srDNA序列進(jìn)行雙向測(cè)序并拼接，并提交NCBI比對(duì)。④系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建。在GeneBank上進(jìn)行比對(duì)，用MAGA6軟件進(jìn)行序列分析，相似程度較高的采用最大簡(jiǎn)約法(Maximum parsimony)進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建。

1.2.4 草莓表面微生物附著及清洗試驗(yàn) 對(duì)生化檢測(cè)同屬種類最多的泛菌屬泛菌及沙雷菌屬粘質(zhì)沙雷菌進(jìn)行附著和清洗試驗(yàn)，選取分離微生物編號(hào)為7Y2和SW8進(jìn)行靶微生物添加性試驗(yàn)。7Y2，SW8在營養(yǎng)瓊脂平板上表現(xiàn)為明顯的菌落黃色和菌落紅色的生物學(xué)特征，較其它同屬微生物更易分辨，36 ℃培養(yǎng)24 h顯微觀察其菌落形態(tài)；挑取營菌落至無菌生理鹽水，振蕩分散，將菌液調(diào)至0.5麥?zhǔn)蠞岫?菌體約為1.5×108個(gè)/mL),分別取10、1、0.1 mL于150 mL無菌生理鹽水中，將草莓浸泡10 min，無菌表面烘干，電子掃描顯微鏡觀察微生物附著情況；模擬日常清洗手段，進(jìn)行3項(xiàng)平行試驗(yàn)，處理分別為：①自來水連續(xù)沖洗10 min；②10 % NaCl溶液浸泡10 min； ③機(jī)清洗劑洗潔精濃度為1 %浸泡5 min，自來水沖洗5 min和④空白對(duì)照，處理后的草莓進(jìn)行泛菌和粘質(zhì)沙雷菌檢測(cè)。

泛菌檢測(cè)方法為：取待試樣品于無菌均質(zhì)袋均質(zhì)，按照1∶10，1∶100，1∶1000比例用無菌生理鹽水將樣品稀釋到合理區(qū)間，取1 mL稀釋液涂布于營養(yǎng)瓊脂平板，36 ℃培養(yǎng)24 h后，對(duì)黃色菌落分離純化36 ℃培養(yǎng)24 h，接種ID 32 E試劑條36 ℃培養(yǎng)24 h后讀取鑒定結(jié)果，結(jié)果為泛菌且ID %>95 %記為陽性結(jié)果每個(gè)稀釋度設(shè)3組重復(fù)。粘質(zhì)沙雷菌檢測(cè)方法為取待試樣品于無菌均質(zhì)袋均質(zhì)，按照1∶10，1∶100, 1∶1000比例用無菌生理鹽水將樣品稀釋到合理區(qū)間，取1 mL稀釋液涂布于營養(yǎng)瓊脂平板，36 ℃培養(yǎng)24 h后，對(duì)紅色菌落分離純化36 ℃培養(yǎng)24 h，接種ID 32 E試劑條36 ℃培養(yǎng)24 h后讀取鑒定結(jié)果，結(jié)果為沙雷菌且ID %>95 %記為陽性結(jié)果。每樣品設(shè)3個(gè)平行，根據(jù)泊松分布原理計(jì)算結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 草莓表面典型微生物的分離鑒定

采用1.2.1方法對(duì)草莓表面上的細(xì)菌進(jìn)行分離，對(duì)出種類最高的3屬共15種微生物進(jìn)行鑒定，其中泛菌屬8種、假單胞菌屬4種、沙雷菌屬3種，鑒定結(jié)果見表1，生化圖譜見表2，生化鑒定結(jié)果 16SrDNA分子鑒定結(jié)果基本一致，其中*表示微生物自動(dòng)鑒定儀數(shù)據(jù)庫中種編號(hào)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明分離種類最多的是泛菌屬微生物，泛菌屬微生物為多源菌屬，具有生態(tài)學(xué)的廣泛性，但生化反應(yīng)結(jié)果表明分離的8種泛菌屬微生物在19個(gè)生化反應(yīng)中表現(xiàn)一致，分離的泛菌屬微生物均能分解d-葡萄糖，d-麥芽糖，d-海藻糖，L-鼠李糖和蔗糖等左旋糖類物質(zhì)，為泛菌屬微生物典型生物學(xué)性狀；但肌醇、α-麥芽糖、d-甘露醇、丙二酸鹽、d-山梨醇、α-半乳糖苷酶和d-阿拉伯醇等生化反應(yīng)中差壓較大，為同屬不同種類微生物的差異性。草莓中基本分離得到典型沙雷菌屬典型種微生物，分別為液化沙雷菌、粘質(zhì)沙雷菌、氣味沙雷菌，其中粘質(zhì)沙雷菌為沙雷菌屬微生物的模式種，3種微生物在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上都表現(xiàn)為明顯的紅色菌落且在生化反應(yīng)中表現(xiàn)沙雷菌屬微生物典型生物學(xué)特征。假單胞菌屬微生物在32個(gè)生化反應(yīng)中陽性表現(xiàn)率低，但鑒定的3種微生物均在丙二酸鹽反應(yīng)中表現(xiàn)陽性，其中鑒定為熒光假單胞菌生化反應(yīng)中ID %較低為可疑生化譜，但分子鑒定結(jié)果為熒光假單胞菌99 %置信結(jié)果(表3)。

表1 微生物生化鑒定結(jié)果

表2 草莓微生物鑒定圖譜

注：ID 32 E 試劑條：LIP 酯酶，βNAG β氮乙酰葡萄糖胺，MAL d-麥芽糖，GLU d-葡萄糖，SAC 蔗糖，GAT d-半乳糖酸鹽同化，URE 尿素酶，AHD 精氨酸雙水解酶，INO 肌醇，aMAL a-麥芽糖，CEL d-纖維二糖，βGAL 半乳糖苷酶，AspA L-天門冬素芳胺酶，TRE d-海藻糖，aGLU a-葡萄糖苷酶，LARA L-阿拉伯糖，ODC 鳥氨酸脫羧酶，IND 吲哚，MAN d-甘露醇，RP 酚紅，5KG 5酮基·葡萄糖酸鈉，LARL L-阿拉伯醇，LDC 賴氨酸脫羧酶，βGLU β-葡萄糖苷酶，MNT 丙二酸鹽，SOR d-山梨醇，βGUR β葡萄糖醛縮酶，ADO 側(cè)金盞花醇，RHA L-鼠李糖，aGAL a-半乳糖苷酶，DARL D-阿拉伯醇, PLE 古老糖。

Note: Reagent Strips ID 32 E: LIP Esterase, βNAG β-Nitrogen acetyl glucosamine, MAL d-Maltose, SAC sucrose, GAT d- Galactose formate assimilation，URE Urease，AHD Arginine dihydrolase，INO Inositol，aMAL a-Maltose，CEL d-Cellobiose，βGAL β-Galactosidase，AspA L-Asparagine aminotransferase，TRE d- Trehalose，aGLU a- Glucosidase，LARA L-Arabinose，ODC Ornithine decarboxylase，IND Indole，MAN d- Mannitol，RP Phenol red，5KG 5 Keto sodium gluconate，LARL L- Arab alcohol，LDC Lysine decarboxylase，βGLU β- Glucosidase，MNT Malonate，SOR d- Sorbitol，βGUR β-glucose aldolase，ADO Amurensis alcohol，RHA L- Rhamnose，aGAL a- Galactosidase，DARL D- arabitol.Reagent Strips ID 32 GN:：FUC L- Fucose,SAC Sucrose,SOR D-sorbitol,MAL Maltose,ARA L-arabinose,ITA Itaconic acid,PROP Propionate,SUB Suberate,CAP Caprate,MNT Malonate,VALT Valerate,ACE Acetate,CIT Citrate,LAT DL-lactate, HIS Histidine,ALA L-alanine,5KG Keto sodium gluconate,3OBU 3 - hydroxy - butyrate,GLYG Glycogen,POBE 4 - hydroxy - benzoate,mOBG 3 - hydroxy - ben.

表3 微生物測(cè)序比對(duì)結(jié)果

圖1 泛菌屬系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.1 Phylogenetic tree of Pantoea

2.2 典型微生物16SrDNA同源性分分析

對(duì)分離種類最多且種間差距較明顯的泛菌屬微生物進(jìn)行16srDNA同源性分析，采用最大簡(jiǎn)約法(Maximum parsimony)，構(gòu)建生物的系統(tǒng)發(fā)育樹，并分析生物物種之間的演化關(guān)系。系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果見圖1。由系統(tǒng)發(fā)育樹可以看出泛菌屬微生物分子間差異也較明顯，泛菌屬微生物為多源菌屬，具有生態(tài)學(xué)的廣泛性和生物學(xué)的廣泛性[2]，從系統(tǒng)發(fā)育樹的樹形上來看8種泛菌屬微雖然在同一譜系但基因差異較明顯從而佐證泛菌屬微生物在生物存在具有一定的廣泛性。

2.3 微生物附著與清洗試驗(yàn)

編號(hào)為7Y2和SW8的泛菌屬泛菌及沙雷菌屬粘質(zhì)沙雷菌營養(yǎng)瓊脂36 ℃培養(yǎng)24 h條件下革蘭氏染色100倍觀察圖見圖2；微生物添加附著草莓表面的掃描電鏡觀察圖見圖3。由圖2可以看出，微生物在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)條件下，保持短桿菌的菌落形態(tài)。由圖3可以看出泛菌和粘質(zhì)沙雷菌可以吸附在草莓外表皮，并且粘附緊密。

附著與清洗試驗(yàn)結(jié)果見表4，處理①～④分別為①自來水連續(xù)沖洗10 min，② 10 %NaCl溶液浸泡10 min，③有機(jī)清洗劑洗潔精濃度為1 %浸泡5 min，自來水沖洗5 min和④空白對(duì)照。由清洗試驗(yàn)可以看出，清洗可以有效的降低草莓上泛菌和沙雷菌的數(shù)量值，鹽水浸泡清洗對(duì)微生物的降低作用最為明顯，有機(jī)清洗劑中添加有殺菌作用的物質(zhì)，對(duì)2種微生物的減低作用也較明顯，相較之下清水沖洗對(duì)微生物的附著降低數(shù)量較小，這與草莓漿果的表皮構(gòu)成有關(guān)，微生物的菌毛性結(jié)構(gòu)與草莓表面種子形成的凹凸結(jié)構(gòu)可以幫助微生物的附著。

圖2 泛菌和粘質(zhì)沙雷菌在100倍顯微鏡菌體形態(tài) Fig.2 Bacterial modality of Serratia marcescens and Pantoea spp. in the 100× microscope

圖3 泛菌和粘質(zhì)沙雷菌草莓表面的附著Fig.3 Adhesion of Serratia marcescens and Pantoea spp. to the surface of strawberry

表4 草莓泛菌和粘質(zhì)沙雷菌的附著與清洗

3 結(jié) 論

3.1 草莓表面微生物種類的多樣性

試驗(yàn)在莓表面上的細(xì)菌進(jìn)行分離3屬共15種微生物，其中泛菌屬8種、假單胞菌屬4種、沙雷菌屬3種。且生化檢測(cè)結(jié)果和分子鑒定結(jié)果基本一致，由微生物16srDNA構(gòu)建由系統(tǒng)發(fā)育樹可以看出泛菌屬微生物分子間差異也較明顯，泛菌屬微生物為多源菌屬，具有生態(tài)學(xué)的廣泛性和生物學(xué)的廣泛性。

3.2 微生物附著與清洗

對(duì)出現(xiàn)草莓表面出現(xiàn)率較高的幾種微生物進(jìn)行了顯微觀察和電鏡試驗(yàn)，表明泛菌和粘質(zhì)沙雷菌可以吸附在草莓外表皮，并且粘附緊密。根據(jù)微生物的生化性質(zhì)建立了草莓表面清洗計(jì)數(shù)試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果表明鹽水浸泡清洗對(duì)微生物的降低作用最為明顯，有機(jī)清洗劑中添加有殺菌作用的物質(zhì)，對(duì)泛菌和粘質(zhì)沙雷菌的減低作用也較明顯，試驗(yàn)驗(yàn)證與微生物的菌毛性結(jié)構(gòu)與草莓表面種子形成的凹凸結(jié)構(gòu)可以幫助微生物的附著，是微生物較難清洗的主要原因。

4 討 論

4.1 草莓表面微生物種類的多樣性

綜合對(duì)草莓表面典型微生物的研究，表面收集的微生物種類較多，其原因由于草莓質(zhì)地柔軟且含糖量高，且種植過程中較易暴露在高微生物介質(zhì)中。草莓是富營養(yǎng)作物，植過程中有機(jī)肥主要來源于豬糞、雞糞、牛糞，其中含有大量的致病微生物；在草莓的采摘運(yùn)輸環(huán)節(jié)，其的自然屬性決定其具有易受微生物侵染而腐爛變質(zhì)的特點(diǎn)，操作過程若造成產(chǎn)品受外部擠壓或受到機(jī)械損傷，傷處也極易受到空間微生物侵染。本研究中沙雷菌屬多種典型微生物在不同時(shí)期的草莓上檢出，泛菌屬多個(gè)種微生物在草莓表面均有附著，可以看出部分對(duì)營養(yǎng)要求不是特別高，且生殖環(huán)境要求不嚴(yán)苛的微生物均可在草莓上附著或寄生。危害識(shí)別是風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的一部分，是指對(duì)可能存在于特定的一種或一類食品中能引起有害健康的包括生物因素的識(shí)別[8]。對(duì)于草莓食用安全的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估而言，草莓表面微生物種類的多樣性是其危害識(shí)別的重點(diǎn)和難點(diǎn)。

4.2 草莓微生物的食用安全控制

草莓為漿果，顆粒籽鑲嵌在果實(shí)表面，清洗過程中易出現(xiàn)在微觀疏水區(qū)，微生物表面鞭毛蛋白幫助其附著在草莓表面[9]，本實(shí)驗(yàn)研究可得清洗可以清除草莓表面部分微生物，有效的清洗方法可以大量去除部分微生物但不能將其表面的微生物全部清除。本實(shí)驗(yàn)研究的微生物雖非致病微生物，但部分為條件致病微生物，且微生物可通過遺傳物質(zhì)交換(例如，結(jié)合、傳導(dǎo)、轉(zhuǎn)化)獲取新的基因，基因水平的轉(zhuǎn)移被認(rèn)為是毒素基因轉(zhuǎn)移到其他新的細(xì)菌菌株的途徑之一[10]。微生物的污染存在于生產(chǎn)和銷售的各個(gè)環(huán)節(jié)，除了加強(qiáng)草莓表面微生物的附著控制的研究，相關(guān)部門也應(yīng)該建立相關(guān)的農(nóng)產(chǎn)品使用安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估機(jī)制，對(duì)易染且不易清洗果蔬微生物進(jìn)行預(yù)警，為食果蔬食用安全提供指導(dǎo)。

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(責(zé)任編輯 陳 虹)

ResearchonHomologyandAdhesionofTypicalMicroorganismsonSurfaceofStrawberry(Ⅱ)

WEI Chao1, GUO Ling-an1, DAI Xiao-hang2, YANG Wen-ting2

(1.Sichuan Academy of Agricultural Analysis and Testing Center, Sichuan Chengdu 610066, China；2.Leshan Municipal Bureau of Agriculture, Sichuan Leshan 614000, China)

The distribution of microorganisms on the surface of strawberry and their adhesion were studied to provide protection for the safe consumption of strawberry. Strawberry was continuously sampled within two years according to its three growing stages, the biochemical identification and 16SrDNA sequencing identification of the microorganisms on the surface of the sampled strawberry were conducted. Most isolatedPantoeaby Maximum Parsimony (MP) phylogenetic analysis was conducted, and the adhesions ofSerratiaspp. andPantoeaspp. also were observed.The result showed that three typicalSerratiaspp. on the surface of strawberry were detected, and there were many kinds ofPantoeaspp. with obviously different genotypes. Under the electron microscope, the adhesions ofPantoeaspp. andSerratiamarcescenson the surface of strawberry were clearly observed, which could be effectively eliminated by Chlorine-containing detergent and 10 % saline.Most of microorganisms existing on the surface of strawberry could be removed by effective cleaning methods. This research would provide theory basis for the risk assessment of the consumption of strawberry.

Strawberry; Microorganism; Enteropathogenic bacteria; Hazard analysis critical control

1001-4829(2017)3-0650-06

10.16213/j.cnki.scjas.2017.3.030

S668.4

A

2016-03-20

四川省財(cái)政創(chuàng)新能力提升工程項(xiàng)目(2013XXXK-022)；四川省重要技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)研究項(xiàng)目(ZYBZ 2013-40)；國家農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估重大專項(xiàng)(GJFP201601302)

魏 超(1985-)，女，黑龍江哈爾濱人，助理研究員，微生物相關(guān)檢測(cè)及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，E-mail:cc123qqq@163.com。