高效液相色譜法測定白靈菇中熒光增白劑含量

張春芳 曹秀梅 佟 琦* 楊衛(wèi)軍 張嘉楠 楊趙偉

(1 河北省應(yīng)用化學(xué)重點實驗室 燕山大學(xué)環(huán)境與化學(xué)工程學(xué)院，河北 秦皇島 066004；2 秦皇島市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗中心，河北 秦皇島 066004)

高效液相色譜法測定白靈菇中熒光增白劑含量

張春芳1曹秀梅2佟 琦1*楊衛(wèi)軍2張嘉楠2楊趙偉2

(1 河北省應(yīng)用化學(xué)重點實驗室 燕山大學(xué)環(huán)境與化學(xué)工程學(xué)院，河北 秦皇島 066004；2 秦皇島市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗中心，河北 秦皇島 066004)

建立了用高效液相色譜法同時測定白靈菇中3種熒光增白劑(VBL、CBS、CXT)的方法。試樣用乙醇-水(V/V=1/2)溶液作提取劑，50 ℃條件下水浴靜置提取15 min。采用C18(250 mm×4.6 mm，2.6 μm)為分析柱，以乙酸銨(20 mmol/L)+乙腈[65+35]為流動相洗脫，流速為0.8 mL/min。3種熒光增白劑在0.01～10 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)(r2)均大于0.997；加標(biāo)回收率為79%～90%。方法簡單準(zhǔn)確，線性關(guān)系、重現(xiàn)性及加標(biāo)回收率均滿足分析要求。

白靈菇；熒光增白劑；高效液相色譜

前言

國家食品安全整頓辦發(fā)布的(2010)50號文件中，將熒光增白物質(zhì)列入第四批“食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑”黑名單中。同時公布可能添加的食品品種有雙孢蘑菇、金針菇、白靈菇等[1]。其中，白靈菇又名雪山靈芝，營養(yǎng)豐富，含有氨基酸、無機鹽及維生素等，具有調(diào)節(jié)生理平衡、增強免疫力作用。

熒光增白劑除具有較好的增白作用外，還具有一定的保鮮、防腐功能，并非可食用型食品添加劑，嚴(yán)禁違法添加到食品中。目前，熒光增白劑檢測方法主要有紫外光燈照射法，紫外分光光度法[2]，熒光分光光度法[3-4]，高效液相色譜法[5-9]及液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)法[10-13]等。

本研究采用高效液相色譜分析方法，以市面上最容易購買、價格低廉、增白效果明顯且常被檢出于其它樣品中的三種具有離解性質(zhì)的陰離子型熒光增白劑VBL、CBS、CXT為檢測對象，以乙醇-水為提取溶劑，恒溫水浴靜置提取白靈菇中三種熒光增白劑，操作簡單，可行性較好，并應(yīng)用該方法研究了白靈菇中熒光增白劑的提取條件。

1 實驗部分

1.1儀器、試劑與材料

UltiMate 3000液相色譜(美國Thermo Fisher科技公司)、FA2104型電子天平、恒溫水浴箱，乙腈、甲醇(HPLC級)、乙酸銨(分析純)、無水乙醇(分析純)、熒光增白劑VBL(純度98%)、熒光增白劑CBS(純度99%)、熒光增白劑CXT(純度99%)，實驗用水為超純水，實驗用白靈菇購買于秦皇島市蔬菜市場，自制陽性樣品。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取0.100 0 g熒光增白劑，用乙醇-水(V/V=1/2)溶液溶解并定容于100 mL容量瓶中，配制成1.0 g/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，于4 ℃冰箱中避光保存，備用。

1.3樣品前處理

稱取待測白靈菇樣品5.00 g于50 mL具塞錐形瓶中，加入20 mL乙醇-水(V/V=1/2)溶液，50 ℃水浴靜置提取15 min，流水冷至室溫。取上述溶液過0.22 μm水相濾膜，供液相色譜儀測定。

1.4液相色譜條件

采用Thermo Fisher Accucore C18(250 mm×4.6 mm，2.6 μm)色譜柱；用乙酸銨(20 mmol/L)和乙腈作流動相，V(乙酸銨)∶V(乙腈)=65∶35；流速0.8 mL/min；激發(fā)波長350 nm，發(fā)射波長430 nm；進樣量10 μL；柱溫30 ℃。

2 結(jié)果與討論

2.1色譜圖

在最佳液相色譜運行條件下，3種熒光增白劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的分離色譜圖見圖1。

圖1 3種熒光增白劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖Figure 1 Chromatogram of a standard mixture of the three FWAs.

2.2提取方式選擇

實驗采用水浴靜置、超聲波和空氣振蕩三種方式對白靈菇中3種熒光增白劑的提取效果進行比較，其中水浴靜置提取效果較好。三種提取方式比較見圖2。

圖2 三種提取方式比較圖Figure 2 Comparison of three extraction methods.

2.3提取時間和溫度的選擇

稱取陽性白靈菇試樣5.00 g于50 mL具塞錐形瓶中，加入20 mL乙醇-水(V/V=1/2)溶液，50 ℃水浴靜置提取，探討不同提取時間(10、15、20、25 min)對白靈菇中3種熒光增白劑提取的影響。時間為15 min時達到最佳提取效果，15 min后隨著時間的延長，試樣中其它基質(zhì)不斷析出，對目標(biāo)物質(zhì)造成影響。不同提取時間對3種熒光增白劑的影響見圖3。

圖3 時間對3種熒光增白劑的影響Figure 3 Effects of extraction times on three FWAs.

稱取陽性白靈菇試樣5.00 g于50 mL具塞錐形瓶中，加入20 mL乙醇-水(V/V=1/2)溶液，分別于不同溫度(30、40、50、60 ℃)下水浴靜置提取15 min，探討最佳提取溫度。結(jié)果表明：溫度為50 ℃時提取效果最佳。提取溫度對3種熒光增白劑提取結(jié)果影響見圖4。

圖4 溫度對3種熒光增白劑的影響Figure 4 Effects of extraction temperatures on three FWAs.

2.4提取劑的選擇

保持其它條件不變，配制不同比例的乙醇:水溶液(V∶V=1/2、1/4、1/6及1/8，mL/mL)，反復(fù)實驗，當(dāng)V乙醇∶V水=1∶2時，效果最佳。不同比例乙醇水溶液對3種熒光增白劑提取見圖5。

圖5 乙醇-水溶液對3種熒光增白劑的提取量Figure 5 Extraction amount of three FWAs with ethanol containing different concentration water.

2.5固液比的選擇

保持其它條件不變，不同固液比(5∶10、5∶20、5∶25、5∶30，g/mL)條件下提取，提取液分別定容于50 mL容量瓶中。當(dāng)固液比為5∶20時，提取效果最佳。固液比例對3種熒光增白劑提取影響結(jié)果見圖6。

圖6 提取溶劑體積對3種熒光 增白劑的影響Figure 6 Effects of extraction solvent volumes on three FWAs.

2.6工作曲線和檢出限

適量移取三種熒光增白劑標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，配成熒光增白劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，逐級稀釋，以熒光增白劑的色譜峰面積為縱坐標(biāo)y(counts)，對應(yīng)的濃度為橫坐標(biāo)x(μg/mL)，進行線性回歸。得到3種熒光增白劑線性方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限(LOD)及定量限(LOQ)見表1。

2.7方法加標(biāo)回收和精密度實驗

加標(biāo)回收實驗中選取3個添加水平，每個添加水平進行6次重復(fù)實驗，所得方法加標(biāo)回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)見表2。由表2可知，3種熒光增白劑的加標(biāo)回收率在79%～90%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.5%～4.3%，方法的準(zhǔn)確度和精密度達到檢測白靈菇中熒光增白劑的要求。

表1 3種熒光增白劑的線性關(guān)系、儀器檢出限及方法定量限Table 1 Linear relationships，limits of detection and limits of quantification of the analytes/(μg·mL-1)

表2 3種熒光增白劑的加標(biāo)回收率和精密度實驗Table 2 Recovery and precisions of the analytesspiked in a blank sample(n=6)

3 結(jié)論

建立了白靈菇中3種熒光增白劑的高效液相色譜分析方法，同時對提取條件進行研究，該方法簡單準(zhǔn)確，線性關(guān)系、重現(xiàn)性及加標(biāo)回收率均滿足分析要求。利用此方法進行了白靈菇中3種熒光增白劑的提取條件實驗，乙醇-水(V/V=1/2)溶液與50 ℃水浴靜置提取是效率較高的提取條件。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部. 關(guān)于公布食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單(第四批)[EB/OL].[2010-03].http//www.jdzx.net.cn/article/40288ce4062bb60401062bb60cef0015/2011/4/2c90948e2f8abdc1012f8b28d12f0006.html.

[2] 劉榮琴,高磊紅,王未肖,等.紫外分光光度法測定食品包裝用紙中的熒光增白劑[J].廣州化工(GuangzhouChemicalIndustry), 2013, 41(15): 135-137.

[3] 蔣定國,陳立松,溫小龍,等.熒光分光光度法測定紙質(zhì)食品包裝材料中的熒光增白劑[J]. 中國食品衛(wèi)生雜志(ChineseJournalofFoodHygiene), 2014, 26(1): 50-53.

[4] 陶文玲,陳征,夏鵬,等.大理市售生活紙制用品中熒光增白劑污染狀況監(jiān)測分析[J].大理學(xué)院學(xué)報(JournalofDaliUniversity), 2014, 13(8): 55-56.

[5] 焦艷娜,丁利,朱紹華,等.高效液相色譜-熒光檢測法測定食品接觸材料塑料制品中熒光增白劑[J].色譜(ChineseJournalofChromatography), 2013, 31(1): 83-87.

[6] SHU W C, DING W H. Determination of fluorescent whitening agents in laundry detergents and surface waters by solid-phase extraction and ion pair high performance liquid chromatography[J].JournalofChromatographyA, 2005, 1088(2): 218-223.

[7] 魏峰,吳松,于晞,等.高效液相色譜法測定一次性衛(wèi)生用品中熒光增白劑[J].色譜(ChineseJournalofChromatography), 2015,33(2):158-163.

[8] 呂春華,季鑫鶴,史穎珠,等.高效液相色譜法測定化妝品中5種熒光增白劑[J].理化檢驗-化學(xué)分冊(PhysicalTestingandChemicalAnalysisPartB:ChemicalAnalysis),2015,51(5): 609-613.

[9] 湯娟,丁友超,齊琰,等.高效液相色譜/熒光檢測法測定紡織品中7種陰離子熒光增白劑[J]. 分析測試學(xué)報(JournalofInstrumentalAnalysis),2014,33(9):1032-1037.

[10] 杜志峰,洗燕萍,劉付建,等.液相色譜-高分辨飛行時間質(zhì)譜法測定食品接觸紙包裝材料中的7種熒光增白劑[J].分析化學(xué)(ChineseJournalofAnalyticalChemistry),2014,42(5): 636-642.

[11] CHEN H C, DING W H. Hot-water and solid phase extraction of fluorescent whitening agents in paper materials and infant clothes followed by unequivocal determination with ion-pair Chromatography-tandem mass spectrometry[J].JournalofChromatographyA,2006,1108(2): 202-207.

[12] RAO R N, VENKATESWARLU N, KHALID S, et al. LC-PDA and LC-ESI-MS separation and determination of process related substances arising from stilbenetype fluorescent whitening agents. Application to monitoring of their photodegradation products in industrial effluents and aqueous environmental systems[J].JournalofSeparationScience,2005,28(5):443-452.

[13] 杜志峰,洗燕萍,劉付建,等. LC-MS/MS法測定發(fā)泡塑料餐具中5種熒光增白劑[J].現(xiàn)代食品科技(ModernFoodScience&Technology),2013,29(12):3014-3018.

DeterminationofFluorescentWhiteningAgentsinMushroombyHPLC

ZHANG Chunfang1，CAO Xiumei2，TONG Qi1*，YANG Weijun2，ZHANG Jianan2, YANG Zhaowei2

(1.HebeiKeyLaboratoryofAppliedChemistry，CollegeofEnvironmentalandChemicalEngineering,YanshanUniversity，Qinhuangdao,Hebei066004,China；2.QualitySafetySupervisionandInspectionCenterofAgriculturalProductinQinhuangdao，Qinhuangdao,Hebei066004,China)

A method for the determination of three fluorescent whitening agents (FWAs) (VBL, CBS, CXT) in mushroom by high performance liquid chromatography was developed. The sample was extracted with ethanol-water (V/V=1/2) solution by static extraction of water for 15 min at 50 ℃. The HPLC method was performed on a column of Thermo Fisher Accucore C18 (250 mm×4.6 mm, 2.6 μm) with elution using 20 mmol/L ammonium acetate (65%) and acetonitrile (35%) as the mobile phases with the flow rate of 0.8 mL/min. The target analytes showed good linearity in the range of 0.01—10 μg/mL with the correlation coefficients (r2) greater than 0.997. The recoveries were in the range between 79%—90%.

mushroom; fluorescent whitening agents(FWAs); high performance liquid chromatography(HPLC)

10.3969/j.issn.2095-1035.2017.03.002

O657.7+2；TH833

A

2095-1035(2017)03-0004-04

2017-03-01

2017-04-10

河北省高層次人才資助項目(A2016002037)資助

張春芳，女，在讀研究生，主要從事分析化學(xué)、色譜分析技術(shù)在食品及環(huán)境樣品檢測中的應(yīng)用研究。E-mail: 18931902786@163.com

*通信作者：佟琦，女，副研究員，主要從事分析化學(xué)、色譜分析技術(shù)研究。E-mail: tongqi@ysu.edu.cn

本文引用格式：張春芳,曹秀梅,佟 琦,等. 高效液相色譜法測定白靈菇中熒光增白劑含量[J].中國無機分析化學(xué),2017,7(3):4-7. ZHANG Chunfang，CAO Xiumei，TONG Qi,et al. Determination of Fluorescent Whitening Agents in Mushroom by HPLC [J].Chinese Journal of Inorganic Analytical Chemistry, 2017,7(3):4-7.