PRRSV與PCV2雙重感染引發(fā)副豬嗜血桿菌感染病例的診斷

張愛瓊 ，梁海英，曾智勇＊，湯德元，王 彬，黃 濤，徐 國(guó)，葉百川，咸 文，何小莉

(貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025）

PRRSV與PCV2雙重感染引發(fā)副豬嗜血桿菌感染病例的診斷

張愛瓊 ，梁海英，曾智勇＊，湯德元，王 彬，黃 濤，徐 國(guó)，葉百川，咸 文，何小莉

(貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025）

豬圓環(huán)病毒病是指以圓環(huán)病毒2型（PCV2）為主要病原引起的斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、母豬繁殖障礙、豬呼吸道疾病綜合征（PRDC）、豬皮炎和腎?。≒DNS）的一系列疾病的總稱[1]。其臨床癥狀主要為體質(zhì)下降、消瘦、生長(zhǎng)緩慢、腹瀉、呼吸困難、母豬繁殖障礙[2]。該病可導(dǎo)致豬群的免疫抑制，從而繼發(fā)細(xì)菌性感染[3]。豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）俗稱豬藍(lán)耳病，是由繁殖與呼吸綜合征病毒引起的一種高度接觸性傳染病，母豬感染導(dǎo)致發(fā)熱、厭食、流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎，仔豬感染出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)疾病，仔豬發(fā)病率可高達(dá)100%，死亡率超過50%[4]。副豬嗜血桿菌病又稱多發(fā)性纖維素性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎，常常在PCV2和PRRSV發(fā)生時(shí)以繼發(fā)感染的形式出現(xiàn)[5]。

近年來(lái)，PCV2和PRRSV混合感染的情況在養(yǎng)豬業(yè)越來(lái)越普遍[6-8]。王慧等[9]在2010—2011年期間，對(duì)豫魯?shù)貐^(qū)的170份病料進(jìn)行病原檢測(cè)時(shí)，發(fā)現(xiàn)發(fā)病豬存在多種混合感染，其雙重感染中PCV2和PRRSV的感染最為嚴(yán)重，總感染率達(dá)到33.33%，其中哺乳仔豬和育肥豬的感染率分別為42.10%和50%。PCV2和PRRSV雙重感染常引起嚴(yán)重的免疫抑制，并繼發(fā)嚴(yán)重的細(xì)菌性感染，臨床表現(xiàn)主要為呼吸系統(tǒng)障礙，病豬出現(xiàn)被毛粗亂、腹瀉、消瘦等病癥，給疫病的診治帶來(lái)很大的困難，同時(shí)也給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

2017年7 月，貴州六枝特區(qū)某新建豬場(chǎng)，在對(duì)引進(jìn)保育豬進(jìn)行疫苗免疫后，部分保育豬陸續(xù)出現(xiàn)腹瀉，咳喘，消瘦最終死亡。為確診病因，故將2只極度消瘦的腹瀉病豬送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)將檢測(cè)診斷結(jié)果報(bào)告如下，以供參考。

1 臨床及發(fā)病特征

據(jù)述，該新建豬場(chǎng)于2017年5月份，共引進(jìn)240頭保育豬，隔離觀察1個(gè)月后，先后按程序進(jìn)行了豬瘟（CSFV）、豬偽狂犬（PRV）和豬口蹄疫疫苗免疫。在疫苗免疫2周后，部分保育豬陸續(xù)出現(xiàn)精神委靡、采食量下降、腹瀉、咳喘、消瘦、體溫升高和被毛粗亂等臨床癥狀，因腹瀉、消瘦死亡保育豬已達(dá)80余頭，采用多種抗生素藥物治療未見有效。

2 病理解剖特征

2只送檢的病豬極度消瘦，解剖可見腹股溝淋巴結(jié)和頜下淋巴結(jié)腫大、出血，呈褐色；肺臟與胸腔粘連，表面可見纖維素性滲出物，肺尖葉、膈葉部分實(shí)變；心包積液，呈典型的“絨毛心”特征（圖1）；結(jié)腸可見大量白色的豬結(jié)節(jié)蟲（圖2），其中一只豬脾臟大面積壞死（圖3）；腎臟有瘀斑和點(diǎn)狀出血，其他臟器病變特征不明顯。

圖1 典型的“絨毛心”?

圖2 結(jié)腸可見大量白色的豬結(jié)節(jié)蟲

圖3 脾臟大面積壞死

3 診斷

通過對(duì)送檢豬的發(fā)病情況、臨床癥狀和剖檢病理變化觀察，初步診斷送檢豬存在豬結(jié)節(jié)蟲、副豬嗜血桿菌以及病毒的混合感染。根據(jù)送樣要求，對(duì)病豬組織樣品進(jìn)行了CSFV、PRRSV、PRV和PCV2等病毒的RT-PCR/PCR檢測(cè)。

適量采集2頭送檢病豬心、肝、脾、肺、腎等混合組織1份，反復(fù)研磨凍融3次后12 000 r/ min離心10 min，取上清，應(yīng)用MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0核酸提取試劑盒提取核酸，分別進(jìn)行CSFV、PRRSV、PRV和PCV2的 檢 測(cè)。CSFV和PRRSV反應(yīng)體系（50.0 μL）：2×1 Step Buffer 25.0 μL， 模 板9.0 μL， 上 下 游 引 物 各 1.0μL，Prime Script 1 Step Enzyme Mix 2.0 μL，RNase Free H2O 12.0 μL，反應(yīng)程 序 為 50 ℃ 40 min ；95 ℃ 5 min ；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，37個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min 。PRV 和PCV2反應(yīng) 體 系 為（50.0 μL）：2×Taq酶25.0 μL，ddH2O 14.0 μL， 上 下 游引物各 1.0 μL，模板 9.0 μL。PRV反應(yīng)程序?yàn)?：94 ℃ 5 min ；94 ℃ 30 s，63 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，38個(gè) 循 環(huán)；72 ℃ 10 min。PCV2反 應(yīng) 程 序 為：94 ℃ 5 min ；94 ℃ 1 min，57 ℃ 40 s，72 ℃ 2 min，38 個(gè)循環(huán) ；72 ℃ 10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果如圖4所示，PRRSV、PCV2均為陽(yáng)性，CSFV、PRV均為陰性。

圖4 病原檢測(cè)結(jié)果

4 討論

根據(jù)PCR/RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明，送檢病豬存在PCV2和PRRSV雙重感染，臨床發(fā)病特征、病理剖檢病變表明送檢豬繼發(fā)有副豬嗜血桿菌感染和豬結(jié)節(jié)蟲感染。PCV2感染可引起PMWS，多發(fā)生于5～12周齡的仔豬，初期表現(xiàn)為消化功能降低而后出現(xiàn)食欲不振、被毛粗亂無(wú)光澤、貧血、皮膚蒼白或黃染，同時(shí)出現(xiàn)呼吸和消化系統(tǒng)癥狀，表現(xiàn)為咳嗽和腹瀉[10]。PRRSV感染豬后一般表現(xiàn)為呼吸困難、沉郁，飼料轉(zhuǎn)化率下降，四肢的內(nèi)側(cè)以及腹部的皮膚呈現(xiàn)出藍(lán)紫色等，在發(fā)病的初期，急性病豬的體溫會(huì)迅速升高，且精神委靡不振，而斷奶仔豬表現(xiàn)更為明顯，發(fā)育極其不良，被毛粗糙。PCV2和PRRSV均是免疫抑制性病原，能導(dǎo)致豬體產(chǎn)生免疫抑制、干擾和破壞豬體對(duì)其他病原體的抵抗能力，破壞免疫細(xì)胞，降低豬體的免疫力，從而引起多種病毒或細(xì)菌的混合感染，如PPV、附紅細(xì)胞體和副豬嗜血桿菌等[11]，造成復(fù)雜臨床癥狀，使臨床診斷和治療更加困難。副豬嗜血桿菌病主要引起肺、心包、腹腔和四肢關(guān)節(jié)漿膜的纖維素性炎癥，臨床上主要表現(xiàn)咳嗽、呼吸困難、消瘦、跛行、被毛粗亂[12]，在養(yǎng)豬過程出現(xiàn)PCV2、PRRSV和CSFV等病毒感染及飼養(yǎng)管理不當(dāng)?shù)纫蛩鼐烧T發(fā)該病的發(fā)生。豬結(jié)節(jié)蟲病是由結(jié)節(jié)蟲寄生在豬的結(jié)腸、盲腸內(nèi)所引起，感染嚴(yán)重時(shí)常見腹瀉，黏膜脫落，豬只極度消瘦，發(fā)育遲緩。本次送檢病豬就存在PCV2、PRRSV、副豬嗜血桿菌和豬結(jié)節(jié)蟲感染多種病原混合感染的情況。

對(duì)于該豬場(chǎng)PCV2和PRRSV雙重感染繼發(fā)副豬嗜血桿菌和豬結(jié)節(jié)蟲感染的情況，應(yīng)科學(xué)地按照免疫程序，做好PCV2和PRRSV的疫苗免疫接種和抗體監(jiān)測(cè)工作，控制PCV2和PRRSV的感染及蔓延，以降低危害。為預(yù)防繼發(fā)副豬嗜血桿菌和其他細(xì)菌的感染，應(yīng)降低豬群飼養(yǎng)密度、減少溫差等的環(huán)境應(yīng)激因素，注重藥物保健，在飼料中添加適量的抗菌藥物。對(duì)于豬結(jié)節(jié)蟲可采用左旋咪唑、硫苯咪唑、伊維菌素、阿維菌素等抗寄生蟲藥物進(jìn)行治療，定期做好驅(qū)蟲工作。戈登民等[13]2009年對(duì)PCV2與細(xì)菌混合感染采用自擬中藥復(fù)方黃芪25 g、當(dāng)歸10 g、淫羊藿10 g、生地15 g、白芍15 g、板藍(lán)根20 g、蒲公英30 g、紫草10 g、丹參10 g、薤白10 g、瓜蔞10 g、葶藶子15 g、黃芩10 g進(jìn)行治療，發(fā)現(xiàn)使用該中藥復(fù)方具有療程短，療效確切，治愈率高的特點(diǎn)。針對(duì)PRRS，目前市場(chǎng)上尚無(wú)特效藥，只能通過預(yù)防來(lái)減少其帶來(lái)的危害，適當(dāng)使用抗菌藥物以控制豬群的細(xì)菌性繼發(fā)感染，哺乳仔豬在斷奶前后，可在飼料中添加適量的黃芪多糖和抗菌藥物，以提高豬自身抵抗力預(yù)防豬藍(lán)耳病的繼發(fā)感染。

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2017-08-14）

省校合作計(jì)劃項(xiàng)目，黔科合 LH 字 [2014]7670 號(hào)

張愛瓊，女，在讀碩士，研究方向 ：動(dòng)物傳染病病原分子生物學(xué)。E-mail：1147415844@qq.com

曾智勇（1978-），男，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事動(dòng)物傳染病病原分子生物學(xué)研究