狼瘡性腎炎患兒血清總IgE水平變化及臨床意義

余 玲,毛建華

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院腎臟內(nèi)科，浙江 杭州 310003)

狼瘡性腎炎患兒血清總IgE水平變化及臨床意義

余 玲,毛建華

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院腎臟內(nèi)科，浙江 杭州 310003)

目的探討血清總IgE變化水平在兒童狼瘡性腎炎病情活動(dòng)中的臨床意義。方法采用ELISA法測(cè)定狼瘡性腎炎患兒和對(duì)照組患兒血清中總IgE含量，并檢測(cè)其24小時(shí)尿蛋白定量、尿蛋白/肌酐、血肌酐、血尿素氮，計(jì)算腎小球?yàn)V過(guò)率。結(jié)果狼瘡性腎炎組患兒血清總IgE水平較對(duì)照組顯著升高，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.889，P<0.01)，高IgE亞組患兒公斤體重24小時(shí)尿蛋白定量和尿蛋白/尿肌酐水平均明顯高于低IgE亞組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為2.233、2.125，均P<0.05)，但兩亞組的血肌酐、血尿素氮和腎小球?yàn)V過(guò)率均無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t值分別為0.808、1.194、0.522，均P>0.05)。結(jié)論血清IgE對(duì)判斷狼瘡性腎炎病情活動(dòng)有意義，調(diào)節(jié)IgE表達(dá)可能有助于改善狼瘡性腎炎患兒的病情。

狼瘡性腎炎；免疫球蛋白；兒童；酶聯(lián)免疫吸附法

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus, SLE)是一種自身免疫性疾病，由于機(jī)體缺乏對(duì)核酸的免疫耐受、激活自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞和產(chǎn)生大量誘導(dǎo)組織損傷的自身反應(yīng)性抗體而發(fā)病。狼瘡性腎炎(lupus nephritis, LN)是SLE嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，腎臟局部自身抗體的沉積以及淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)導(dǎo)致腎炎的發(fā)生，臨床出現(xiàn)腎臟受累者約高達(dá)60%。與成人相比，兒童更易發(fā)生腎損害。

免疫球蛋白E(immunoglobulin E, IgE)在抵御寄生蟲(chóng)感染和過(guò)敏反應(yīng)發(fā)病機(jī)制中重要作用已經(jīng)被認(rèn)可。既往有研究表明，SLE患者血清中自身反應(yīng)性IgE含量較正常人群偏高[1]，但是SLE患者不比一般人群更容易發(fā)生IgE驅(qū)動(dòng)的過(guò)敏反應(yīng)。因此，IgE在自身免疫反應(yīng)中的作用可能有所不同。本研究通過(guò)檢測(cè)LN兒童血清總IgE含量，探討IgE在LN病情活動(dòng)中的臨床意義。

1 對(duì)象和方法

1.1 研究對(duì)象

選取2011年3月至2016年12月在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院腎臟內(nèi)科治療的LN患兒50例為L(zhǎng)N組。所有患者均符合LN診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。SLE患兒有下列任一項(xiàng)腎受累表現(xiàn)者即可診斷為L(zhǎng)N：①尿蛋白檢查滿足以下任一項(xiàng)者：1周內(nèi)3次尿蛋白定性檢查陽(yáng)性，或24小時(shí)尿蛋白定量>150mg，或1周內(nèi)3次尿微量白蛋白高于正常值；②離心尿每高倍鏡視野(HPF)紅細(xì)胞(RBC)>5個(gè)；③腎功能異常(包括腎小球和/或腎小管功能)；④腎活檢異常。另隨機(jī)選取本院同時(shí)期收治的50例同年齡階段非LN(且非SLE等其他自身免疫性疾病)患兒納入對(duì)照組。入組患兒均簽署知情同意書(shū)。本研究通過(guò)浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理會(huì)同意。

1.2 研究方法

采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法檢測(cè)血清總IgE水平。同時(shí)測(cè)量患兒體重、身高，檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白定量、尿蛋白/肌酐、血肌酐(serum creatinine, Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)。腎小球?yàn)V過(guò)率(estimated glomerular filtration rate, eGFR)計(jì)算采用Schwartz-Lyon公式[3]：eGFR[(mL/min·1.73m2)]=k×身高(cm)/ Scr(μmol/L)，當(dāng)k=36.5(當(dāng)患兒為≥13歲的男性),k=32.5(當(dāng)患兒為<13歲的男性和所有女性)。

1.3 標(biāo)本采集與檢測(cè)

囑患兒家屬入院后第2天收集患兒清晨的第1次尿，留取中段尿2～3mL于尿試管中立即送檢。待晨尿排盡后留取24小時(shí)尿標(biāo)本，同時(shí)將每次的尿標(biāo)本收集于清潔干燥的容器內(nèi)，并在收集第1次24小時(shí)尿標(biāo)本后加入10mL甲醛防腐，當(dāng)尿標(biāo)本收集完畢后，取其中的2mL使用檢驗(yàn)生化儀器檢測(cè)尿蛋白和尿肌酐。所有患兒于入院24小時(shí)內(nèi)抽取空腹8小時(shí)以上的肘靜脈血8mL置于干燥的非抗凝管中，使用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定Scr和BUN。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 一般資料

LN組中男性患兒14例，女性患兒36例，年齡6.2～15.8歲。對(duì)照組中男性患兒18例，女性患兒32例，年齡5.2～15.4歲。兩組的性別構(gòu)成比、發(fā)病年齡以及體重差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見(jiàn)表1。

表1 LN組及對(duì)照組患兒基本資料

2.2 兩組血清總IgE水平及腎功能相關(guān)臨床指標(biāo)比較

LN組患兒治療前血清總IgE水平為272.5±42.6 IU/mL，其中有31例高于100IU/mL，超出正常范圍。對(duì)照組患兒血清總IgE水平為85.9±22.1IU/mL，顯著低于LN組患兒(P<0.01)。對(duì)照組中有6例患兒的IgE表現(xiàn)異常，高于100IU/mL，其中3例診斷為胡桃?jiàn)A綜合征，2例泌尿道感染，1例多囊腎。

LN組患兒的BUN明顯高于非LN組，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，但前組的Scr不明顯高于后組。此外，LN組的BUN均值和Scr均值略高于正常值上限(7.9mmol/L和77.0umol/L)，而對(duì)照組均在正常范圍，見(jiàn)表2。

檢測(cè)項(xiàng)目LN組(n=50)對(duì)照組(n=50)tP24小時(shí)尿蛋白(mg)1827．6±260．1未檢測(cè)--尿蛋白/肌酐2．3±0．3未檢測(cè)--Scr(μmol/L)77．3±8．761．0±3．31．750．085BUN(mmol/L)8．2±0．85．5±0．43．0840．003血清總IgE(IU/mL)272．5±42．685．9±22．13．889<0．001

2.3 血清總IgE水平與狼瘡性腎炎病情程度相關(guān)性分析

為了分析LN患兒血清總IgE水平與病情程度的相關(guān)性，基于患兒血清總IgE水平均值，將LN患兒分為低IgE亞組(<272.5IU/mL)和高IgE亞組(≥272.5IU/mL)，其中低IgE亞組34例，高IgE亞組16例。

高IgE亞組患兒24小時(shí)尿蛋白定量顯著高于低IgE亞組(2 628.6±490.4mg vs 1 439.2±285.6mg，P=0.03)，公斤體重標(biāo)準(zhǔn)化后24小時(shí)尿蛋白定量仍顯示出類(lèi)似的差異(75.3±11.7mg/kg vs 42.1±8.7mg/kg，P=0.03)。同時(shí)，高IgE亞組患兒的尿蛋白/肌酐水平也明顯高于低IgE亞組(P=0.04)。

與此同時(shí)，高IgE亞組Scr和BUN有高于低IgE亞組的趨勢(shì)，eGFR則呈現(xiàn)相反趨勢(shì)，但這些趨勢(shì)尚無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),見(jiàn)表4。

此外，兩亞組患兒性別構(gòu)成比、發(fā)病年齡、體重均無(wú)顯著差異(P>0.05),見(jiàn)表3。

表3 兩亞組基本情況比較

表4 兩亞組后相關(guān)臨床檢測(cè)指標(biāo)比較

3 討論

3.1 SLE/LN與自身免疫反應(yīng)

SLE的發(fā)病與效應(yīng)T淋巴細(xì)胞的異?；罨约搬槍?duì)核抗原，特別是雙鏈DNA(double-stranded DNA, dsDNA)自身抗體的出現(xiàn)有關(guān)。由自身抗體和核抗原形成的免疫復(fù)合物(immunocomplexes, ICs)沉積和炎癥細(xì)胞在腎臟的浸潤(rùn)引起LN。如今較為研究成熟的SLE發(fā)病機(jī)制之一是Toll樣受體9(toll-like receptor 9, TLR9)感應(yīng)dsDNA-IgG ICs，激活漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞(plasmacytoid dendritic cells, pDCs)，導(dǎo)致干擾素-α(interferon-α, IFN-α)反應(yīng)[4]。然后，IFN-α和pDCs支持B細(xì)胞活化、增殖和漿細(xì)胞分化而產(chǎn)生自身抗體。

3.2 SLE/LN與自身IgE抗體

IgE是免疫球蛋白的亞型之一，因其在輔助性T細(xì)胞2(type 2 helper T lymphocyte, Th2)應(yīng)答和過(guò)敏發(fā)生機(jī)制中的作用而被熟知。不斷有證據(jù)表明IgE抗體的致病作用不僅僅限于過(guò)敏，它們可能在其它炎癥和自身免疫疾病中發(fā)揮作用[5-6]。以往檢測(cè)的SLE/LN的相關(guān)抗dsDNA、Smith抗體等都是IgG抗體，這方面的研究很多，也廣為人知，但是，最近有研究證明，針對(duì)dsDNA的自身IgE抗體在LN的發(fā)病機(jī)制中可能也發(fā)揮著重要作用，它們能加劇pDCs的干擾素反應(yīng)。之前已經(jīng)在一些SLE患者的研究中報(bào)道了針對(duì)dsDNA的IgE自身抗體存在[7]。

在本次研究中，LN組患兒血清總IgE水平顯著高于對(duì)照組，也提示IgE與LN的發(fā)病有一定關(guān)系。進(jìn)一步將LN組分為低IgE亞組與高IgE亞組后發(fā)現(xiàn)，后者24小時(shí)尿蛋白定量和尿蛋白/尿肌酐水平較前者明顯升高，說(shuō)明IgE與LN患兒的腎臟損傷程度有關(guān)。雖然經(jīng)統(tǒng)計(jì)兩亞組Scr、BUN和eGFR均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但高IgE亞組的前兩項(xiàng)反映腎小球功能的指標(biāo)有高于低IgE亞組的趨向，eGFR低于低IgE亞組，考慮與納入研究的樣本量偏少有關(guān)，今后加大樣本量可進(jìn)一步分析。

Henault等[8]研究報(bào)告，>50%的SLE患者存在dsDNA-IgE，在活動(dòng)性SLE中dsDNA-IgE濃度升高。當(dāng)IgE阻斷抗體與來(lái)自dsDNA-IgE陽(yáng)性患者的血清一起溫育時(shí)，外周血單核細(xì)胞的IFN-α分泌顯著減少，表明IgE自身抗體推動(dòng)來(lái)自pDCs的IFN-α應(yīng)答。事實(shí)上，通過(guò)使用針對(duì)dsDNA的特異性IgE單克隆抗體，他們證實(shí)了dsDNA-IgE ICs誘導(dǎo)pDCs產(chǎn)生大量IFN-α，從而揭示了之前未知的促成SLE發(fā)生的分子機(jī)制。那么，dsDNA-IgE如何介導(dǎo)pDCs激活和加劇自身免疫反應(yīng)？有研究表明，pDCs表達(dá)高親和性受體FcεRⅠ，IgE自身抗體與dsDNA形成ICs(即dsDNA-IgE ICs)，結(jié)合pDCs上的FcεRⅠ，將dsDNA-IgE ICs遞送至吞噬溶酶體，繼而使TLR9感應(yīng)、干擾素調(diào)節(jié)因子7(interferon regulatory factor 7, IRF7)和NF-κB核易位，激活pDCs，并觸發(fā)炎癥細(xì)胞因子(包括IFN-α、IL-6、IL-8和TNF)產(chǎn)生[8]，活化的pDCs促進(jìn)共同培養(yǎng)的B細(xì)胞增殖，漿細(xì)胞分化，IFN-α和IL-6刺激其產(chǎn)生免疫球蛋白[7]。最近又有小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示dsDNA-IgE在狼瘡樣疾病進(jìn)展中有重要意義[9]。FcγRIIB -/ -小鼠有IgE缺陷，延遲了狼瘡樣疾病的發(fā)展和降低了其嚴(yán)重性。此外，從LN患者的腎活檢標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)IgE在腎小球和球外區(qū)域沉積，這些區(qū)域與pDCs和B細(xì)胞接近，因此推測(cè)上述體外現(xiàn)象在患者體內(nèi)也可出現(xiàn)。這些證據(jù)均與本次研究分析保持一致，考慮IgE參與了疾病過(guò)程。此外，有研究報(bào)道SLE患者IgE水平相比特應(yīng)性皮炎患者和正常人都升高，而且與疾病的是否活動(dòng)以及嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[8]。

綜上所述，以往自身免疫性疾病及感染性疾病，包括SLE/LN等，認(rèn)識(shí)較深的多為IgG或IgM抗體，特異性IgE自身抗體的研究甚少。本研究發(fā)現(xiàn)，血清IgE抗體與LN患者的疾病活動(dòng)度有關(guān)，而IgE濃度較高的LN患者尿蛋白定量也明顯高于IgE濃度較低的LN患者，提示IgE可能與LN的發(fā)生與發(fā)展有關(guān)，血清IgE濃度可作為一個(gè)評(píng)定LN病情的相應(yīng)指標(biāo)，對(duì)IgE相關(guān)機(jī)制的進(jìn)一步研究可能為L(zhǎng)N提供新的治療策略。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：吳紅艷]

ClinicalsignificanceofchangesintotalserumIgElevelinchildrenwithlupusnephritis

YU Ling, MAO Jian-hua

(DepartmentofNephrology,Children’sHospital,ZhejiangUniversitySchoolofMedicine,ZhejiangHangzhou310003,China)

ObjectiveTo investigate the clinical significance of total serum IgE level change in children with lupus nephritis (LN).MethodsThe total IgE levels in serum of children with LN and that in control group were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The 24-hour urinary protein, urine protein/creatinine, serum creatinine and blood urea nitrogen were detected, and glomerular filtration rate was then estimated.ResultsThe level of total serum IgE in LN group was significantly higher than that in the control group (t=3.889,P<0.01). The urine protein/creatinine and 24-hour urinary protein levels were significantly lower in children with low IgE level than those with high IgE level (tvalue was 2.125 and 2.233, respectively, bothP<0.05). But there was no significant difference in serum creatinine, blood urea nitrogen and glomerular filtration rate between two subgroups (tvalue was 0.808, 1.194 and 0.522, respectively, allP>0.05).ConclusionSerum IgE level may be meaningful to predicting disease activity of LN. Furthermore, regulation of IgE expression may relieve the condition of LN in the future.

lupus nephritis (LN); immunoglobulin E (IgE); children; enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

R725.7

A

1673-5293(2017)10-1208-03

2017-05-16

余 玲(1988—)，女，住院醫(yī)師，碩士研究生，主要從事兒童常見(jiàn)腎臟疾病的研究。

毛建華，教授 。

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.10.015