兩種方法檢測(cè)中國(guó)蘆薈不同部位多糖含量

林岸清，程廣強(qiáng)

(福建省測(cè)試技術(shù)研究所 350003)

兩種方法檢測(cè)中國(guó)蘆薈不同部位多糖含量

林岸清，程廣強(qiáng)

(福建省測(cè)試技術(shù)研究所 350003)

以苯酚-硫酸顯色反應(yīng)法和電化學(xué)差示脈沖伏安法，測(cè)定比較蘆薈的凝膠、整葉、葉皮和根莖的多糖含量，結(jié)果表明： 苯酚-硫酸顯色反應(yīng)法和電化學(xué)差示脈沖伏安法均取得良好的線性關(guān)系、精密度和回收率； 蘆薈的多糖含量以根莖最高，葉片的皮次之，凝膠最少。

中國(guó)蘆薈；多糖；苯酚-硫酸顯色法；電化學(xué)差示脈沖伏安法

Abstract: Polysaccharide contents in gel, whole leaf, leaf epidermis and rootstalk of Chinese Aloe were measured by phenol-sulfuric acid coloration method and electrochemical differential pulse voltammetry. The results showed that both the phenol-sulfuric acid coloration method and electrochemical differential pulse voltammetry had good linear relation, precision and recovery. The content of polysaccharide in the rootstalk of aloe was the highest, the leaf epidermis was inferior and the gel was the lowest.

Keywords: Chinese aloe; polysaccharide; phenol-sulfuric acid coloration method; electrochemical differential pulse voltammetry

蘆薈是百合科蘆薈屬植物，其品種至少有300種以上，品種間差別很大，形態(tài)萬(wàn)千，深得人們喜愛。中國(guó)蘆薈，又叫斑紋蘆薈，已載入中國(guó)藥典[1]，味苦性寒，歸肝經(jīng)、心經(jīng)、胃經(jīng)、大腸經(jīng)，可以治療肝火頭痛、目赤腫痛、熱解便秘、燙傷、咳嗽，也可美容，臨床上應(yīng)用于五官科、內(nèi)科、外科、婦科、對(duì)腫瘤的治療、X線損傷的治療等[2]。近年來(lái)蘆薈在醫(yī)藥、美容和日用品方面開拓了廣大的市場(chǎng)，但蘆薈深加工技術(shù)還比較薄弱。蘆薈多糖是蘆薈的主要活性成分之一，是蘆薈產(chǎn)品開發(fā)極其重要的部分[3-4]。本文通過(guò)采用苯酚-硫酸顯色反應(yīng)法和電化學(xué)差示脈沖伏安法測(cè)定比較蘆薈的不同部位的多糖含量，為蘆薈多糖的開發(fā)和研究提供參考。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所需儀器：CHI660B電化學(xué)分析儀(上海辰華儀器公司)、Ag/AgCl參比電極(上海辰華儀器公司)、AL204電子分析天平(Mettler-Toledo公司)、T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)、多功能粉碎機(jī)(北京兆易科技有限公司)。

試驗(yàn)所需試劑：葡萄糖為色譜純?cè)噭?，無(wú)水乙醇、苯酚、濃硫酸、碳酸鈉、碳酸鋇、鐵氰化鉀均為分析純?cè)噭?/p>

試驗(yàn)所用中國(guó)蘆薈取自福建省福州市晉安區(qū)一農(nóng)場(chǎng)。

1.2多糖提取方法

取成熟新鮮的中國(guó)蘆薈整株，洗凈，先掰下蘆薈葉，取得根莖，蘆薈葉剝皮，刮下葉內(nèi)膠體部分，分別將蘆薈凝膠、葉皮、整葉和根莖打漿混勻。分別稱取10.0 g樣品3份，加無(wú)水乙醇，靜置沉淀12 h，4000轉(zhuǎn)/min離心15 min，棄去上清液，再加80%乙醇溶液30 mL，攪拌清洗濾液，4000轉(zhuǎn)/min離心15 min，棄去上清液。濾渣加80℃左右的熱水100 mL，攪拌提取20 min，過(guò)濾得濾液，濾渣用熱水洗3次，合并濾液，定容至500 mL，得4種不同部位的蘆薈多糖提取液。

1.3測(cè)定方法

1.3.1苯酚—硫酸顯色反應(yīng)法 精確稱取葡萄糖100.0 mg，置100 mL容量瓶中，蒸餾水溶解定容至刻度，得1000 μg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，分別置于50 mL容量瓶中，加水至刻度。分別取上述溶液1.0 mL置10 mL具塞試管中，加1.0 mL 5%苯酚溶液(取3.2 mL 80%苯酚，用水定容至50 mL容量瓶中，必須現(xiàn)配現(xiàn)用)。加入5.0 mL濃硫酸，注意移液管必須垂直于液面上10 cm左右的距離，不碰壁，勻速加入試管中。搖勻，室溫靜置30 min，以試劑空白為參比，在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度A對(duì)濃度C(μg/mL)作回歸方程。

1.3.2電化學(xué)差示脈沖伏安法 精確移取上述1.3.1的1000 μg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 mL分別置于50 mL的容量瓶中，加水定容，搖勻。分別取上述溶液各2.0 mL置于10 mL具塞試管中,各管再加入5 mmol/L K3Fe(CN)6溶液2.0 mL(準(zhǔn)確稱取K3Fe(CN)60.0825 g與Na2CO30.53 g，用二次蒸餾水溶解轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中稀釋至刻度)，混勻，置沸水浴中反應(yīng)15 min，冷卻至室溫。將試管中反應(yīng)液分別移入10 mL容量瓶中，加入蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，轉(zhuǎn)入電解池中。每次測(cè)量前通高純度N25 min以除去溶液中的O2, 將預(yù)處理的電極浸入電解液中開路攪拌富集2 min，靜置10 s，記錄從-0.2 ～ +0.8 V電位測(cè)定葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的差示脈沖伏安曲線，以空白溶液測(cè)定所得曲線進(jìn)行背景校正，測(cè)量其氧化峰電流，以氧化峰電流Ip對(duì)濃度C(μg/mL)作直線回歸。

1.4精密度試驗(yàn)

分別平行取10份等體積的蘆薈整葉的多糖提取液，5份用于苯酚-硫酸法顯色后測(cè)定吸光度，5份用于電化學(xué)法測(cè)定氧化峰電流。

1.5回收率試驗(yàn)

精密量取蘆薈凝膠的多糖提取液10 mL于25 mL容量瓶中，同樣的提取液做4份，再分別加入1000 μg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5、0.8、1.0、1.5 mL于容量瓶中，加水至刻度。分別取這4種溶液按上述的苯酚—硫酸法和電化學(xué)法做回收試驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1線性回歸方程

苯酚—硫酸顯色法以吸光度A對(duì)濃度C作回歸方程，得A=0.0093C+0.0158，r=0.9992。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液在20～200 μg/mL范圍內(nèi)，吸光度對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度呈良好的線性關(guān)系。

電化學(xué)差示脈沖伏安法以氧化峰電流Ip對(duì)濃度C作回歸方程，得Ip=0.2247C-4.789，r=0.9905。標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度在30～90 μg/mL范圍內(nèi)，氧化峰電流對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.2精密度試驗(yàn)

分別通過(guò)5次平行試驗(yàn)(表1)，苯酚—硫酸顯色法的RSD為2.03%，電化學(xué)差示脈沖伏安法的RSD為2.98%，兩種方法精密度試驗(yàn)結(jié)果均良好。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.3回收率試驗(yàn)

對(duì)4種不同含量的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液做加標(biāo)回收試驗(yàn)，測(cè)定結(jié)果見表2和表3。苯酚—硫酸顯色法的回收率96.64%～101.30%，平均為99.06%；電化學(xué)差示脈沖伏安法的回收率100.70%～110.30%，平均為104.50%，兩者均滿足蘆薈多糖含量的測(cè)定要求。

表2 苯酚-硫酸法回收率測(cè)定結(jié)果

表3 電化學(xué)法回收率測(cè)定結(jié)果

2.4兩種方法測(cè)定蘆薈不同部位多糖含量

精密量取1.2項(xiàng)中4種制備好的蘆薈多糖提取液，按1.3和1.4項(xiàng)中的方法操作，根據(jù)各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，如超出線性范圍稀釋后再檢測(cè)，通過(guò)稀釋倍數(shù)計(jì)算含量，測(cè)定結(jié)果見表4。兩種方法測(cè)定蘆薈不同部位的多糖含量比較接近，且呈現(xiàn)相同的趨勢(shì)：根莖的含量最高，葉片的皮次之，凝膠最少。

表4 不同測(cè)定方法測(cè)定蘆薈不同部位的多糖含量 (單位：mg/g)

3 小結(jié)與討論

關(guān)于苯酚—硫酸顯色法測(cè)定多糖含量的報(bào)道[4-5]比較多，技術(shù)也比較成熟。本試驗(yàn)所采用的電化學(xué)差示脈沖伏安法檢測(cè)蘆薈不同部位多糖，該方法比較少見報(bào)道。試驗(yàn)結(jié)果表明，兩種方法的線性、精密度和回收率都符合要求，樣品的檢測(cè)結(jié)果沒有顯著差異，均適用于蘆薈多糖的檢測(cè)。但是二者相比較，苯酚—硫酸法的操作更簡(jiǎn)便，成本更低，線性范圍更大一些。

本試驗(yàn)對(duì)中國(guó)蘆薈不同部位多糖的提取和測(cè)定表明，蘆薈中根莖的多糖濃度最高，葉皮次之，其次是整葉，凝膠最少。由于凝膠的含水量高，多糖的濃度相對(duì)低，但凝膠是蘆薈整株中的精華和比重最大的部分，它所含的多糖也是最優(yōu)質(zhì)的。蘆薈的葉皮和根莖的多糖含量較高，說(shuō)明蘆薈的葉皮和根莖也是生產(chǎn)和儲(chǔ)藏多糖的重要器官。為了提高多糖的得率，可以考慮整葉提取多糖。

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(責(zé)任編輯：劉新永)

DeterminationofpolysaccharidesindifferentpartsofChineseAloebytwomethods

LIN An-qing, CHENG Guang-qiang

(FujianTestingTechnologyInstitute,FujianProvince350003)

2017-04-25

林岸清，女，1978年生，工程師。

福建省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2011R1007-2)。

10.13651/j.cnki.fjnykj.2017.06.004