高效液相色譜法測(cè)定小兒感冒顆粒中連翹苷含量

朱影影

(淮南職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院， 安徽 淮南 232001)

高效液相色譜法測(cè)定小兒感冒顆粒中連翹苷含量

朱影影

(淮南職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)院， 安徽 淮南 232001)

目的： 探索小兒感冒顆粒的其中一個(gè)成分連翹苷的含量測(cè)定的方法；方法：采用高效液相色譜法， KromasilC18柱(規(guī)格：250×4.6 mm，5 μm)，檢測(cè)波長(zhǎng)為202 nm，流動(dòng)相與乙腈-水的比例為23∶77,流速控制在1.0 ml/min，柱溫設(shè)定為30 ℃，進(jìn)樣量為10 μl；結(jié)果:連翹苷在0.02 104 μg-1.3 466 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均加樣回收率為99.0 %，RSD為1.1 %；結(jié)論:該測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于控制質(zhì)量。

高效液相色譜法； 小兒感冒顆粒； 連翹苷； 含量測(cè)定

小兒感冒顆粒臨床上用于小兒風(fēng)熱感冒，癥見(jiàn)發(fā)熱重、頭脹痛、咳嗽痰黏、咽喉腫痛；流感見(jiàn)上述證候者，是常用的中藥復(fù)方制劑，由連翹、大青葉、板藍(lán)根、廣藿香、菊花地黃、薄荷、地骨皮、白薇、石膏等10味藥物組成。其中連翹具有清熱解毒，消腫散結(jié)，疏散風(fēng)熱的作用，其主要成分有連翹苷等。目前2015年版《中國(guó)藥典》小兒感冒顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，尚沒(méi)有對(duì)連翹中有效成分的含量進(jìn)行控制。本文采用高效液相色譜法對(duì)該制劑中含有的連翹苷的含量進(jìn)行測(cè)定，從而為進(jìn)一步完善該藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供一定參考。

1 實(shí)驗(yàn)儀器、試藥

1.1實(shí)驗(yàn)儀器

Empower色譜工作站，型號(hào)為Waters2695高效液相色譜儀和Waters2996PDA檢測(cè)器；KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司，功率：350W，頻率：40kHz)；型號(hào)為FA1104電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；型號(hào)為SartoriusBP211D的十萬(wàn)分之一電子天平(北京賽多利斯公司)；型號(hào)為SartoriusBS210S的萬(wàn)分之一電子天平(北京賽多利斯公司)；PS-20T超聲波清洗機(jī)(深圳雷德邦)。

1.2試藥

2 方法、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1色譜條件

選用KromasilC18色譜柱 (規(guī)格：250×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相與乙腈-水的比例為23∶77；設(shè)定檢測(cè)波長(zhǎng)為：202 nm，設(shè)定流速為：1.0 ml/min，柱溫控制：30 ℃，按連翹苷峰計(jì)算理論塔板數(shù)應(yīng)大于或等于3000，進(jìn)樣量：10 μl。在上述條件下，連翹苷峰與雜質(zhì)峰的分離度是符合要求的。

2.2對(duì)照品制備

稱(chēng)量連翹苷的對(duì)照品10.52 mg，將其置入100 ml的容量瓶中，加入50 %的甲醇溶解，稀釋至刻度后，用移液管精密量取5 ml，置25 ml量瓶中，再加入50 %甲醇溶液稀釋至刻度，充分搖勻，即得。

2.3供試品制備

取本品，研缽研細(xì)，取粉末約10 g，精密稱(chēng)定后，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇溶液50 mL后密塞，稱(chēng)其重量，在超聲條件下提取30 min，自然冷卻，再稱(chēng)量其重量，然后用甲醇補(bǔ)充減失的重量，充分搖勻，過(guò)濾，用移液管精密量取續(xù)濾液10 mL，加熱蒸至近干時(shí)，加中性氧化鋁0.8 g拌勻，加在中性氧化鋁柱(100～200目，內(nèi)徑1.5 cm，6 g)上，用100 mL 70 %乙醇溶液進(jìn)行洗脫，把洗脫液收集后，濃縮至干，所得殘?jiān)?0 %甲醇溶液溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，再加50 %甲醇溶液稀釋至刻度，充分搖勻，用孔徑為0.45 μm微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾，取其續(xù)濾液即為供試品。另取不含連翹藥材成分的樣品，按供試品溶液同樣的制備方法制成陰性對(duì)照品。

2.4陰性干擾

從表1可以看出，由不同位置的實(shí)測(cè)粒子速度給出的fmax隨波傳播距離的增加而逐漸降低，這反映了波傳播過(guò)程中高頻成分的耗散。κ和λ在不同頻段內(nèi)的擬合值不同，這表明α(ω)和k(ω)在不同頻段內(nèi)變化的快慢不同，反映了球形應(yīng)力波在花崗巖中傳播的復(fù)雜性。

分別取對(duì)照品、陰性對(duì)照品、供試品三種溶液各10μL，按照上述的色譜條件進(jìn)樣,如圖1所示，結(jié)果顯示陰性對(duì)照無(wú)干擾。

連翹苷對(duì)照品

供試品

陰性對(duì)照

2.5線性關(guān)系的考察

精密吸取連翹苷對(duì)照品溶液(21.04 μg/ml)1、2、4、8、16、32、64μl依次注入液相色譜儀中，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄成分連翹苷的峰面積，以測(cè)得連翹苷的峰面積A與連翹苷的濃度C作回歸曲線，得到線性回歸方程為：A=12 236C-5.969 8；r=0.999 9。通過(guò)結(jié)果顯示：連翹苷濃度在0.021 04～1.346 6μg/ml之間與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.6穩(wěn)定性考察

取已配制的供試品，在室溫條件下，對(duì)放置不同時(shí)間(0、2、4、8、12、24h)的狀態(tài)測(cè)定，最終測(cè)得峰面積的RSD為1.2 %。通過(guò)試驗(yàn)，表明連翹苷在供試品溶液中24小時(shí)內(nèi)是基本穩(wěn)定的。

2.7精密度考察

取已配制的對(duì)照品，重復(fù)進(jìn)樣5次，分別記錄其峰面積，結(jié)果顯示連翹苷的峰面積RSD為0.7 %(n=5)，表明此種方法的進(jìn)樣精密度良好。

2.8重現(xiàn)性考察

取樣品6份，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定連翹苷的含量，其含量的RSD為0.7 %。結(jié)果表明：本方法重現(xiàn)性良好。

2.9加樣回收率試驗(yàn)

回收率試驗(yàn) 取本品(已測(cè)定連翹苷含量為 0. 040 5 mg/g)3 g，共 6 份，精密稱(chēng)定，分別精密加入連翹苷對(duì)照品溶液(21.04 μg/ml) 5 mL，按含量測(cè)定項(xiàng)下的方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果平均回收率99.0 %，RSD=1.1 %，結(jié)果表明本法準(zhǔn)確度良好，計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.10樣品測(cè)定

取3批樣品(批號(hào)分別為1411008,1502012,1502014)，按照上述制備對(duì)照品的方法制備供試品溶液，采用上述色譜條件測(cè)定峰面積，按照外標(biāo)法計(jì)算其含量，測(cè)得連翹苷的含量分別為0.039 8 mg/g、0.040 5 mg/g、0.0403 mg/g。

3.討論

3.1波長(zhǎng)選擇

有文獻(xiàn)在202 nm、230 nm、277 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)摸索，結(jié)果顯示在202 nm波長(zhǎng)處有較好的圖譜，故選202 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2流動(dòng)相選擇

參考相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)不同流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)比較，結(jié)果以乙腈-水(23∶77)為流動(dòng)相效果能使連翹苷得到較好的分離。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S]．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:500-501．

[2] 田雅琴．HPLC法測(cè)定小兒感冒顆粒中綠原酸及連翹苷含量[J]．中成藥，2009，31(12):484-485．

[3] 小兒感冒顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].世界中醫(yī)藥,2015(3):427-430.

[4] 范磊.小兒感冒顆粒的質(zhì)量控制方法研究[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2013，11(35)：355-366.

[5] 鄭小平，楊望.反相高效液相色譜法測(cè)定小兒感冒顆粒中連翹苷含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2011,20(7)：26-27.

[6] 田雅琴.HPLC測(cè)定小兒感冒顆粒中綠原酸及連翹苷含量[J].中成藥，2009，31(12)：1965-1967.

2017-06-25

淮南職業(yè)技術(shù)學(xué)院自然科學(xué)基金項(xiàng)目“小兒感冒顆粒的質(zhì)量控制研究”(項(xiàng)目編號(hào)：HKJ13-6 )

朱影影(1983-)，安徽淮北人，講師，研究方向?yàn)樗幬锓治觥?/p>

R286

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1671-4733(2017)05-0014-02