免疫試紙半定量法與放射免疫法檢測尿微量白蛋白的比較研究

施紹瑞 張林琳 劉英

論 著

免疫試紙半定量法與放射免疫法檢測尿微量白蛋白的比較研究

施紹瑞 張林琳 劉英

目的比較免疫試紙半定量法（Micral-Test）和放射免疫法（RIA）檢測隨機(jī)尿微量白蛋白（MA）結(jié)果的一致性，評價羅氏Micral-Test試紙檢測尿MA的臨床價值。方法征集29例健康志愿者作為健康對照組（NG組），其中男性13名，女性16名。以115例華西醫(yī)院門診和住院患者（包括62例糖尿病和53例高血壓患者），作為疾病組（DG組），其中男性59名，女性56名。所有受試者均留取隨機(jī)尿20 mL待檢，分別用兩種方法同時檢測標(biāo)本中尿中MA濃度。結(jié)果經(jīng)一致性檢驗，免疫試紙半定量法和放射免疫法檢測隨機(jī)尿中MA的一致性較好（Kappa＝0.902）；假陽性率和假陰性率都較理想。結(jié)論免疫試紙半定量法是患者自我監(jiān)測和大型流行病學(xué)調(diào)查人群中尿MA較可靠的指標(biāo)。

尿微量白蛋白； 免疫試紙半定量法； 放射免疫法

腎臟是機(jī)體重要的排泄器官，同時也參與某些物質(zhì)（碳水化合物、脂肪、氨基酸等）的代謝過程［1］。即使輕微的腎臟損傷也可能帶來不良臨床結(jié)局［2］。腎損傷的尿液生物學(xué)標(biāo)志物可以區(qū)分急性腎損傷屬于結(jié)構(gòu)性還是功能性［3］。糖尿病腎病早期表現(xiàn)為微量蛋白尿，最終發(fā)展至終末期糖尿病腎?。?］。微量白蛋白尿（microalbuminuria，MA）是1型、2型糖尿病早期腎損傷診斷及監(jiān)測的重要臨床指標(biāo)［5-8］，因此，本研究比較免疫試紙半定量法（Micral-Test strip）和放免法（RIA）檢測隨機(jī)尿MA結(jié)果的一致性，評價羅氏Micral-Test試紙檢測MA的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象

1.1.1 健康對照組（NG組） 征集29例健康志愿者。其中男性13名，女性16名；年齡20～49歲，平均年齡（35±9）歲。

1.1.2 疾病組（DG組） 115例華西醫(yī)院門診和住院患者（包括62例糖尿病和53例高血壓患者）。其中男性59名，女性56名；年齡19～85歲，平均年齡（58±14）歲。

1.2 檢測方法

1.2.1 儀器與試劑 免疫試紙半定量法采用羅氏Micral-Test試紙進(jìn)行MA半定量檢測（陰性：0；陽性：≥20 mg/L，根據(jù)比色法有20、50、100 mg/L 3個判讀界值）。放免法用北京北方生物技術(shù)研究所提供的放免試劑盒。放射免疫分析儀器為上海核所日環(huán)光電儀器有限公司生產(chǎn)的SN-659B型γ計數(shù)器。

表1 疾病組放免法和免疫試紙半定量法測定MA檢測結(jié)果

1.2.2 樣本收集及檢測 所有受試者均留取隨機(jī)尿20 mL待檢，檢測當(dāng)日以3 500 r/min離心5 min，取上清液，分別用兩種方法同日檢測。檢測方法參見說明書。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 11.5軟件包處理，兩種方法間的比較采用一致性檢驗，Kappa＞0.4認(rèn)為存在一致性，Kappa≥0.75認(rèn)為存在較好一致性。

2 結(jié)果

2.1 檢測結(jié)果

2.1.1 放免法與免疫試紙半定量法檢測MA比較健康對照組中，兩種方法符合率為100%，所有測值均＜20 mg/L。疾病組中，測值在0～20 mg/L組中有2例不相符，20～50 mg/L組中有4例不相符，50～100 mg/L組中有1例不相符，經(jīng)一致性檢驗Kappa值為0.888，說明兩種方法在疾病組中檢測MA的一致性較好。結(jié)果見表1。

2.1.2 兩種方法檢測MA比較 以參考值20 mg/L為界值，將＜20 mg/L定義為陰性（-），＞20 mg/L定義為陽性（+），比較兩種方法總的（健康對照組和疾病組）一致性，經(jīng)一致性檢驗，Kappa值為0.902，說明兩種方法檢測MA總的一致性較好。見表2。

表2 兩種方法檢測MA總的結(jié)果比較

2.2 免疫試紙半定量法檢測MA的臨床價值 如果以放射免疫法檢測MA為“標(biāo)準(zhǔn)”，以20 mg/L為界值，將＜20 mg/L定義為陰性（-），＞20 mg/L定義為陽性（+）。本實(shí)驗結(jié)果顯示，免疫試紙半定量法檢測健康對照組標(biāo)本的假陽性率和假陰性率均為0，因此說明，免疫試紙半定量法在正常人群的篩查中有較好的適用性，并且因其標(biāo)本留取方便，檢測方法簡單，可以實(shí)現(xiàn)在家中自行完成檢測，為使用者帶來了極大的方便。同時，免疫試紙半定量法檢測尿中MA也很適用于大型流行病學(xué)調(diào)查。免疫試紙半定量法在疾病組中檢測結(jié)果的假陽性率為2.9%，假陰性率為5.6%，說明這種方法也適用于糖尿病、高血壓患者用于自我監(jiān)測。

3 討論

MA是評估早期腎臟損傷最有價值的蛋白［9］，能判斷腎功能損傷的嚴(yán)重程度，在腎損傷可逆期發(fā)出警告［10］，也是糖尿病患者并發(fā)心血管疾病的危險因素［11-14］。目前各實(shí)驗室檢測MA主要采用放射免疫法（放免法）、免疫散射比濁法、免疫透射比濁法等，這些方法均需要特殊的儀器和設(shè)備以及專業(yè)的檢驗人員才能進(jìn)行［15-16］。上述方法無法用于自我監(jiān)測或大型流行病學(xué)調(diào)查，尋找驗證一種能實(shí)時檢測的方法顯得尤為重要。尿白蛋白檢測的標(biāo)本類型一般為晨尿和隨機(jī)尿兩種，晨尿的準(zhǔn)確性高于隨機(jī)尿，但晨尿檢測對標(biāo)本質(zhì)量要求較高，因此實(shí)驗室常用隨機(jī)尿代替。時段尿（夜尿或24 h尿）主要用于檢測尿MA排泄率，但時段尿的留取操作較復(fù)雜，患者依從性差，很容易漏留或多留，對于門診患者可操作性更差，在實(shí)際應(yīng)用中受到限制［17］。另外也有研究表明，隨機(jī)尿檢測的靈敏度優(yōu)于過夜尿［18］。因此，本研究選擇最容易收集的隨機(jī)尿作為分析對象。單次MA的檢測受尿量影響較大，為了排除此影響，目前臨床上常用尿MA/肌酐（SCr）比值（ACR）來校正，但是考慮到在患者用于自我監(jiān)測或大型流行病調(diào)查的實(shí)際應(yīng)用中，測量SCr實(shí)際可操作性差，這也是本研究直接檢測MA濃度的原因，目的是在盡量模擬常規(guī)應(yīng)用條件下來評價其運(yùn)用價值［19］。

MA與糖尿病腎病密切相關(guān)，通常預(yù)示糖尿病腎病已經(jīng)存在。MA也多見于原發(fā)性高血壓患者，表明MA涉及早期腎臟與血管病變，預(yù)示了腎臟病變的惡化與心血管病變的發(fā)展，MA檢測對于早期發(fā)現(xiàn)糖尿病、高血壓、心血管疾病等合并腎損傷有重要的意義［20-21］。荷蘭醫(yī)療衛(wèi)生調(diào)查中，腎臟和血管終末期疾病預(yù)防的干預(yù)研究對尿白蛋白檢測的成本-效益進(jìn)行了評估，研究組首先在普通人群中進(jìn)行尿白蛋白篩查，隨后對尿白蛋白陽性的調(diào)查對象使用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑進(jìn)行治療，結(jié)果表明，尿白蛋白篩查的人群疾病防治的成本-效益優(yōu)于未篩查人群。因此，臨床篩查尿中MA具有重要意義。

隨著即時檢驗（point of care testing，POCT）技術(shù)的發(fā)展，人們了解到POCT有簡單快速、操作容易、判讀方便的特點(diǎn)，因而廣泛被患者接受［22-24］。免疫試紙半定量法測定MA也是一種POCT，其原理為黃金標(biāo)記抗體的免疫檢測法。試紙分為紗布層、絨層和捕獲層，尿液標(biāo)本通過紗布層（紗布層可以起到濾過雜質(zhì)的作用）滲入絨層，尿液中的白蛋白與絨層中能與白蛋白特異性結(jié)合的可溶性黃金標(biāo)記抗體特異性結(jié)合，剩余抗體與捕獲層里錨定的白蛋白（不同于人類尿液的白蛋白）結(jié)合而被留住，只有與尿中白蛋白結(jié)合的抗體才可以通過捕獲層到達(dá)檢測墊并出現(xiàn)呈色反應(yīng)，產(chǎn)生的顏色反應(yīng)與尿液中白蛋白含量呈相關(guān)性。但POCT也存在一些弊端，比如結(jié)果穩(wěn)定性差、干擾因素較多、易出現(xiàn)假陽性和假陰性等。因此，評價免疫試紙半定量法的臨床應(yīng)用價值就顯得尤為重要。

本研究顯示，放免法和免疫試紙半定量法檢測MA總的一致性較好，特別是健康對照組符合率達(dá)到100%。疾病組中測值在0～20 mg/L組符合率為97.1%，20～50 mg/L組為78.9%，50～100 mg/L組為96.2%。雖然健康對照組（符合率100%）的樣本數(shù)較少，只有29例，但疾病組中測值在0～20 mg/L組的病例有70例，可見MA的測值越低，兩者的符合率越好，表明在大型人群篩查中免疫試紙半定量法更有價值。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，放免法和免疫試紙半定量法在檢測健康對照組和疾病組標(biāo)本時的一致性均較好，同時免疫試紙半定量法的假陽性率和假陰性率都較理想。因此，作為POCT的免疫試紙半定量法在患者自我監(jiān)測和大型流行病學(xué)調(diào)查中表現(xiàn)出較好的可靠性。

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The comparison between Micral-Test strip and radioimmunoassay for detection of microalbuminuria

Shi Shaorui, Zhang Linlin, Liu Ying. Department of Laboratory Medicine, the Second People's Hospital of Yibin,Yibin 644000, Sichuang, China (Shi SR, Zhang LL);
Department of Laboratory Medicine, West China Hospital,Sichuan University, Chengdu 610041, Sichuang, China (Liu Y)

ObjectiveTo compare the consistency of the random urine microalbumin (MA) tested by Micral-Test and radioimmunoassay (RIA). And to evaluate the clinical value of Roche Micral-Test in the detection of microalbuminuria.MethodsA total of 29 normal subjects (13 males and 16 females) were served as normal control group (NG), 115 patients (59 males and 56 females) with the diagnosis of hypertension (53 patients) and diabetes (62 patients) were served as disease group (DG). Random urine (20 mL) of all subjects was collected.The microalbuminurias of all samples were detected by Micral-Test strip and radioimmunoassay on the same day.ResultsThe consistency between Micral-Test strip and radioimmunoassay is very well (Kappa = 0.902).ConclusionMicral-Test strip is dependable for self-monitoring and large-scale epidemiological investigation.

Microalbuminuria; Micral-Test strip; Radioimmunoassay

2017-06-16）

（本文編輯：楊程伍 李銀平）

四川省宜賓市科技計劃項目（2014SF016）

644000 四川宜賓，宜賓市第二人民醫(yī)院檢驗科（施紹瑞、張林琳）610041 四川成都，華西醫(yī)院實(shí)驗醫(yī)學(xué)科放射免疫室（劉英）

施紹瑞，Email：774516315@qq.com

10.3969/j.issn.1674-7151.2017.03.007

Corresponding author: Shi Shaorui, Email: 774516315@qq.com