miR—143在宮頸癌組織中的表達(dá)及意義探討

屈薇娜+++任新萍

摘要：本文選取了江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院治療的33例宮頸癌患者的數(shù)據(jù)，經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量的聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）對(duì)宮頸組織、宮頸癌的組織與內(nèi)瘤變組織中miR-143表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，并分析了miR-143表達(dá)宮頸癌病理特征。

關(guān)鍵詞：miR-143 宮頸癌組織 表達(dá)

在臨床上，宮頸癌屬于女性的一種常見(jiàn)惡性腫瘤，在女性所患的惡性腫瘤中占比較大，有著較高的致死率。miRNas是一種長(zhǎng)度19-25個(gè)核苷酸內(nèi)源性的非編碼小分子RNA，其經(jīng)和靶基因3'UTR不完全配對(duì)或是完全配對(duì)，對(duì)基因的mRNA翻譯進(jìn)行講解或是抑制，繼而對(duì)細(xì)胞凋亡或是發(fā)育等進(jìn)行調(diào)控。筆者探究了在宮頸癌的組織中miR-143的表達(dá)與意義，具體研究成果如下：

一、研究資料和方法

1.研究的資料

筆者選取了2016年7月份到2017年7月份江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院治療的33例宮頸癌患者的數(shù)據(jù)，經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量的聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）對(duì)宮頸組織與內(nèi)瘤變組織中miR-143表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。所選患者都沒(méi)有實(shí)施放療與化療，年齡最小和年齡最大患者分別為33歲與78歲，年齡的均值是（52±2.53）歲。經(jīng)病理分級(jí)得出，有24例患者為G2期，9例患者為G3期。

2.研究的方法

（1）總RNA提取

先選取零下80℃保存的相關(guān)宮頸組織，運(yùn)用RNAiso Plus的試劑提取組織中的RNA，進(jìn)行DEPC的水溶解，然后用1%甲醛變性瓊脂糖凝膠的電泳對(duì)RNA的完整性進(jìn)行檢測(cè)，最后用紫外分光的光度計(jì)對(duì)RNA純度與濃度進(jìn)行檢測(cè)。如果A260/A280在1.8～2之間，則需要實(shí)施后續(xù)的試驗(yàn)。

（2）2RT-PCR的檢測(cè)

miR-143通過(guò)microRNA的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒實(shí)施逆轉(zhuǎn)錄，具體反應(yīng)體系是20微升，主要包含1微升的兩倍Total RNA、RNase Free dH2O補(bǔ)足20微升、10 微升miRNA Reaction Buffer Mix、2微升miRNA Prime Script RT Enzyme Mix以及2微升0.1%BSA。反應(yīng)發(fā)熱條件為85℃、5秒；37℃、60分鐘，將產(chǎn)物儲(chǔ)存在零下20℃條件下，凍存?zhèn)溆?。通過(guò)SYBR Premix Ex TaqTMⅡ?qū)嵤㏄CR的擴(kuò)增反應(yīng)，其反應(yīng)體系是20微升，主要包含6微升dH2O、10微升 SYBR Premix ExTaqTMⅡ、0.4微升ROX參比資料Ⅱ（50×）、0.8微升 PCR正向引物（10μmol）、2微升 DNA 模板以及0.8微升 PCR反向引物（10μmol）。具體反應(yīng)條件為60℃、30秒；95℃、30秒以及95℃、3秒，一共進(jìn)行四十個(gè)循環(huán)。內(nèi)參照的基因和目的基因在擴(kuò)增效率一致情況下，需要把U6當(dāng)作內(nèi)參照，對(duì)循環(huán)的閾值（Ct值）進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)對(duì)ΔCt值進(jìn)行計(jì)算，公式為ΔCt等于miR-143Ct-U6Ct，通過(guò)2-ΔCt代表miR-143相對(duì)表達(dá)的水平。

3.數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

筆者把本次研究得到的數(shù)據(jù)全部記錄于一個(gè)表格之中，并構(gòu)建相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)，于SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)軟件中實(shí)施計(jì)數(shù)資料和計(jì)量資料的處理。應(yīng)用百分率來(lái)描述計(jì)數(shù)資料，經(jīng)卡方x2進(jìn)行檢驗(yàn)，如果所得數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比以后，有明顯的差異，可使用P<0.05來(lái)表示。

二、研究的結(jié)果

1.在不同的宮頸組織中，miR-143表達(dá)的水平

在正常的宮頸組織中，miR-143表達(dá)量為（1.01±0.24），在CIN的組織中，miR-143表達(dá)量為（0.94±0.28），在宮頸鱗狀的細(xì)胞癌組織中，miR-143表達(dá)量為（0.31±0.09）。在正常的宮頸組織以及CIN組織中，miR-143表達(dá)量相比以后，數(shù)值比較接近，對(duì)比顯示有明顯的差異，P>0.05；在正常的宮頸組織以及CIN組織中，miR-143表達(dá)量比較大，與宮頸鱗狀的細(xì)胞癌組織中的相比，有明顯的差異，P<0.05。

2.miR-143表達(dá)和臨床病理的特征相關(guān)性

在宮頸癌的組織中miR-143表達(dá)量和病理分級(jí)、腫瘤直徑、臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（如表1所示）。

三、研究討論

相關(guān)研究指出，在很多惡性腫瘤中，miRNas會(huì)表現(xiàn)出異常，而在宮頸癌的組織中，miRNA的表達(dá)變化可以輔助調(diào)控細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)通路，并且細(xì)胞通路激活后，可以抑制其他的靶基因，所以miRNA表達(dá)可以當(dāng)作宮頸癌潛在的標(biāo)志物。本次研究中顯示，在正常的宮頸組織以及CIN組織中，miR-143表達(dá)量相比以后，數(shù)值比較接近，對(duì)比顯示有明顯的差異，P>0.05；在正常的宮頸組織以及CIN組織中，miR-143表達(dá)量比較大，與宮頸鱗狀的細(xì)胞癌組織中的相比，有明顯的差異，P<0.05；在宮頸癌的組織中miR-143表達(dá)量和病理分級(jí)、腫瘤直徑、臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。

綜上可知，在宮頸癌的組織中，miR-143表達(dá)量與病理分級(jí)、腫瘤直徑、臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。因此，檢測(cè)miR-143表達(dá)量能夠?yàn)榕R床治療提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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（作者單位：屈薇娜 安徽省滁州城市職業(yè)學(xué)院；任新萍 江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院婦科）endprint