淺談YY0569—2011《Ⅱ級生物安全柜》

劉濱璐++薛璐

對于涉及標準菌株檢驗項目的微生物實驗室來說，生物安全柜是必不可少的設備之一。CNAS-CL09：2013中明確規(guī)定，實驗室應配備滿足要求的生物安全柜，否則，將會導致相關微生物檢驗項目的一票否決！生物安全柜的重要性由此可見一斑。

YY0569-2011《Ⅱ級生物安全柜》是由國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布、專門針對Ⅱ級生物安全柜所制定的一個標準，學習它將有助于提高對于生物安全柜的認識和應用。

定義

（1）生物安全柜（biological safety cabinet，BSC），即負壓過濾排風柜，分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三級。BSL-2實驗室一般配備Ⅱ級生物安全柜即可滿足檢驗要求。

操作者可通過Ⅱ級生物安全柜前窗操作口進行操作，前窗操作口向內(nèi)吸入的負壓氣流用于保護操作人員的安全，經(jīng)高效過濾器過濾的下降氣流用以保護安全柜內(nèi)實驗用品，氣流經(jīng)過濾后排出以保護環(huán)境。與Ⅱ級生物安全柜相比，超凈工作臺則只保護實驗用品，不保護操作人員。

（2）工作區(qū)（working area），安全柜內(nèi)進行操作的部分，即安全柜內(nèi)部從一側(cè)到另一側(cè)、從后側(cè)到前窗內(nèi)側(cè)，高于前窗玻璃下沿約5cm到工作臺面的區(qū)域。

（3）下降氣流（downflow air），來自安全柜上方經(jīng)高效過濾器過濾的垂直向下流向工作區(qū)的氣流。

（4）流入氣流（inflow air），從安全柜前窗操作口進入安全柜的氣流。

Ⅱ級生物安全柜的類型及特點

按照排放氣流占系統(tǒng)總流量的比例及內(nèi)部設計結(jié)構(gòu)，Ⅱ級生物安全柜分為A1、A2、B1、B2四種類型，見表1。

A1及A2型由于只有30%氣流外排，故不應用于操作揮發(fā)性物質(zhì)或有毒化學試劑。B1型可用于操作少量的揮發(fā)性化學試劑和放射性物質(zhì)，成為實驗室首選。B2型由于存在問題較多，尚需進一步完善。

要求

安裝檢測。生物安全柜購買到貨后，應檢查、核實以下內(nèi)容：

（1）外觀

柜體表面無明顯劃傷、銹斑、壓痕，表面光潔，外形平整規(guī)矩。說明功能的文字和圖形符號標志正確、清晰、牢固。焊接牢固，焊接表面光滑。

（2）報警和連鎖系統(tǒng)

①前窗操作口報警。安全柜前窗開啟高度超過或低于標稱高度時，聲音報警器應告警，聯(lián)鎖系統(tǒng)啟動。

②內(nèi)部供/排氣風機連鎖警報。當安全柜內(nèi)既有內(nèi)部下降氣流風機又有排氣風機時，應有聯(lián)鎖功能。一旦排氣風機停止工作，下降氣流供氣風機關閉，聲光報警器報警。一旦下降氣流供氣風機停止工作，排氣風機繼續(xù)運轉(zhuǎn)，聲光報警器報警。

③Ⅱ級B1和B2型安全柜排氣報警。Ⅱ級B1和B2型安全柜有室外排氣風機。一旦安全柜設定了氣流的安全范圍，在15s內(nèi)排氣體積損失20%時，則聲光報警器報警，聯(lián)鎖的安全柜內(nèi)部風機同時被關閉。

④氣流波動報警。當下降氣流流速和流入氣流流速波動超過其標稱值的±20%時，用聲光報警器來提示下降氣流和流入氣流流速的波動。

（3）高效過濾器完整性

可掃描檢測過濾器在任何點的漏過濾應不超過0.01%；不可掃描檢測過濾器在任何點的漏過濾應不超過0.005%。

（4）下降氣流

安全柜下降氣流平均流速應在0.25～0.50m/s之間（±0.015m/s）。

（5）流入氣流

安全柜的流入氣流平均流速應在流入氣流標稱值±0.015m/s之間。Ⅱ級A2、B1、B2型安全柜流入氣流平均流速應不低于0.50m/s，工作區(qū)每米寬度的流量應不低于0.1m3/s。

（6）氣流模式

安全柜工作區(qū)內(nèi)的氣流應向下，應不產(chǎn)生漩渦和向上氣流且無死點；氣流應不從安全柜中逸出；安全柜前窗操作口整個周邊氣流應向內(nèi)，無向外逸出的氣流，安全柜前窗操作口流入氣流應不進入工作區(qū)。

維護檢測。定期對生物安全柜進行維護檢測，主要包括外觀、高效過濾器完整性、下降氣流、流入氣流及氣流模式等。

人員保護（1×108～8×108/mL枯草菌芽孢）

6個AGI-30取樣器5min取得的枯草芽孢樣品培養(yǎng)所得的菌落總數(shù)不能超過10CFU，而2個狹縫式采樣器30min取得的枯草芽孢樣品培養(yǎng)所得的菌落總數(shù)不能超過5CFU。對照培養(yǎng)皿應呈陽性（當培養(yǎng)皿菌落數(shù)計數(shù)大于300CFU時，為陽性）。重復三次合格。

產(chǎn)品保護（1×106～8×106/mL枯草菌芽孢，5min）

狹縫式采樣器30min取得的枯草芽孢樣品培養(yǎng)所得的菌落總數(shù)不能超過5CFU。對照培養(yǎng)皿應呈陽性（當培養(yǎng)皿菌落數(shù)計數(shù)大于300CFU時，為陽性）。重復三次合格。

交叉污染保護（1×104～8×104/mL枯草菌芽孢）

距被檢測側(cè)壁360mm外的培養(yǎng)皿的菌落數(shù)不能多于對照2個。

紫外燈。Ⅱ級生物安全柜安裝紫外燈，波長254nm紫外線輻射在工作區(qū)表面，輻射強度不低于400mW/m2。

操作規(guī)范。在日常的使用過程中，應根據(jù)相關國家標準及供貨廠商所提供的使用說明，制作出適合本部門人員進行試驗的生物安全柜操作手冊，其中應關注以下細節(jié)：

（1）安全柜內(nèi)不能使用酒精燈，否則燃燒產(chǎn)生的熱量會干擾氣流并可能損壞過濾器。可以使用微型電加熱器或一次性無菌接種環(huán)。

（2）安全柜內(nèi)應盡量少放置器材或樣品，否則會阻礙后部氣流循環(huán)。

（3）操作者不應反復移出和伸進手臂以免干擾氣流，同時盡量減少操作者身后的人員流動。

（4）所有工作必須在工作臺面的中后部進行，能夠通過觀察擋板看到。使用時不能打開觀察擋板。

（5）工作開始前和結(jié)束后，風機應至少運行5min。

（6）工作完成后及內(nèi)天下班前，應使用適當?shù)南緞ι锇踩竦谋砻孢M行擦拭。

生物安全柜作為一級防護屏障，能夠?qū)Σ僮髡?、試驗用品及環(huán)境提供有力的保護，是有效開展微生物相關檢驗項目的重要設備。通過對YY0569-2011《Ⅱ級生物安全柜》相關條款的學習，有助于提高對于生物安全柜的理解，在選擇購買、日常應用、維護等方面提供理論依據(jù)與指導，為進一步加強實驗室建設、更好地開展檢測業(yè)務奠定了基礎。

作者簡介：

劉濱璐（1982-），微生物學理學碩士，國家生態(tài)紡織品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心副主任，工程師，主要從事紡織品生態(tài)相關指標的檢測。