侵染苣荬菜的中國勝紅薊黃脈病毒及伴隨的衛(wèi)星基因組結(jié)構(gòu)特征

趙麗玲, 鐘 靜, 張曉云, 李婷婷, 丁 銘

(云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所,云南省農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點實驗室, 昆明 650223)

侵染苣荬菜的中國勝紅薊黃脈病毒及伴隨的衛(wèi)星基因組結(jié)構(gòu)特征

趙麗玲, 鐘 靜, 張曉云, 李婷婷, 丁 銘*

(云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所,云南省農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點實驗室, 昆明 650223)

雜草是菜豆金色花葉病毒屬病毒的重要中間寄主,常富集多種該屬病毒及其衛(wèi)星病毒。2014年,在云南紅河常見雜草苣荬菜Sonchusarvensis上出現(xiàn)了疑似菜豆金色花葉病毒屬病毒病癥狀。利用克隆、測序和生物信息學(xué)分析技術(shù)對其所含病毒進(jìn)行分離鑒定,結(jié)果從1株病樣中共獲得了兩條菜豆金色花葉病毒屬病毒全序列、兩條β衛(wèi)星全序列和一條α衛(wèi)星全序列。序列分析顯示,兩條菜豆金色花葉病毒屬病毒全序列與中國勝紅薊黃脈病毒相似性最高,分別為99%和96%,確定為中國勝紅薊黃脈病毒的分離物。兩條β衛(wèi)星全序列與賽葵黃脈β衛(wèi)星相似性最高,為97%,確定為賽葵黃脈β衛(wèi)星的一個分離物。α衛(wèi)星全序列與中國番茄黃化曲葉α衛(wèi)星相似性最高,為86.3%,是中國番茄黃化曲葉α衛(wèi)星的一個分離物。這是菜豆金色花葉病毒屬病毒病害復(fù)合體在中國侵染苣荬菜的首次報道。

菜豆金色花葉病毒屬病毒;α衛(wèi)星;β衛(wèi)星; 苣荬菜

菜豆金色花葉病毒屬Begomovirus是雙生病毒科Geminiviridae中包含種類最多,分布范圍最廣,造成經(jīng)濟損失最重的一個屬[1-3]。按地理分布,菜豆金色花葉病毒屬病毒可分為新世界和舊世界病毒。新世界菜豆金色花葉病毒屬病毒為雙組分病毒,即基因組包含DNA-A和DNA-B兩種組分;舊世界菜豆金色花葉病毒屬病毒既有雙組分病毒也有單組分病毒。單組分的菜豆金色花葉病毒屬病毒基因組僅包含DNA-A組分,有些單組分病毒與β衛(wèi)星(betasatellite)或既與β又與α衛(wèi)星(alphasatellite)相伴隨形成病害復(fù)合體[4-5]。β衛(wèi)星基因組大小約為輔助病毒的一半(約1.3 kb),需要依賴輔助病毒進(jìn)行復(fù)制、包裝、移動和介體傳播,其互補鏈編碼一個C1蛋白(即βC1),該蛋白能夠引起典型的病毒侵染癥狀,并能抑制寄主植物的RNA沉默反應(yīng)[6-7]。α衛(wèi)星基因組大小也約為輔助病毒的一半(約1.3 kb),其病毒鏈編碼一個Rep蛋白,該蛋白使其能自我復(fù)制,但需要輔助病毒進(jìn)行包裝、移動和介體傳播[4,8]。

中國勝紅薊黃脈病毒Ageratum yellow vein China virus(AYVCNV)屬于菜豆金色花葉病毒屬成員,其基因組僅含DNA-A組分,與中國勝紅薊黃脈β衛(wèi)星(Ageratum yellow vein China betasatellite,AYVCNB)相伴隨[9-10]。DNA-A組分大小為2.7～2.8 kb,含有6個ORF,分別編碼V1、V2、C1、C2、C3和C4基因。β衛(wèi)星大小約1.3 kb,含有1個ORF,編碼βCl蛋白,該衛(wèi)星是引起勝紅薊黃脈癥狀所必需的,并能增加輔助病毒AYVCNV的積累量。AYVCNV于2006年首次報道,該病毒與AYVCNB衛(wèi)星相伴隨,引起海南省?？诘貐^(qū)的勝紅薊黃脈病[9]。隨后,在廣西表現(xiàn)黃脈癥狀的勝紅薊中也發(fā)現(xiàn)存在大量的AYVCNV/AYVCNB[10]。近年的研究發(fā)現(xiàn),該病毒不僅侵染勝紅薊,也侵染番茄(GenBank登錄號:KC172826,KU975392,KU954377),威脅著番茄作物的生產(chǎn)。

苣荬菜Sonchusarvensis為菊科苦苣菜屬多年生草本植物,幾乎全世界均有分布,在我國常作為野菜被廣泛食用,臨床也常用于治療咽喉腫痛、急性痢疾、炎癥、產(chǎn)后出血、痔瘡腫痛等癥[11-13]。目前印度已有報道空心蓮子草黃脈病毒Alternantherayellowveinvirus(AlYVV)病害復(fù)合體侵染苣荬菜,引起苣荬菜黃脈癥狀[14];中國廣西有AYVCNV侵染該屬另一植物苦苣菜的報道[15],但國內(nèi)尚未有菜豆金色花葉病毒屬病毒侵染苣賣菜的報道。本研究采集了表現(xiàn)葉脈黃化和增厚的苣荬菜病株,從中首次分離到菜豆金色花葉病毒屬病毒,并對分離到的病毒核苷酸序列進(jìn)行了比對和進(jìn)化重組分析。

1 材料與方法

1.1 病害樣品采集

2014年10月在云南省紅河州河口縣采集了1株苣荬菜病株(YN4368)。該病株具有明顯葉脈黃化、增厚等疑似菜豆金色花葉病毒屬病毒侵染的癥狀。

1.2 植物總DNA提取及PCR檢測

采用CTAB法提取苣荬菜病株葉片總DNA[16]。利用菜豆金色花葉病毒屬病毒簡并引物PA/PB進(jìn)行PCR檢測,該引物擴增的目的條帶為該屬病毒基因共同區(qū)及外殼蛋白保守區(qū)約500 bp的基因片段[17]。與此同時,利用β衛(wèi)星通用引物β01/β02和α衛(wèi)星通用引物UNA101/UNA102對苣荬菜病株進(jìn)行PCR檢測,這兩對引物的目的條帶分別為其衛(wèi)星全長[18-19]。PCR反應(yīng)體系:10×PCR反應(yīng)緩沖液(含Mg2+)2.5 μL、2.5 μmol/L dNTPs 2 μL、20 μmol/L上、下游引物各0.5 μL、TaqPlus DNA聚合酶(5 U/μL,上海申能博彩生物科技有限公司)0.5 μL、植物總DNA 125 ng,加雙蒸水定容至25 μL。擴增條件:94℃預(yù)變性2 min;94℃變性45 s,50℃退火45 s,72℃延伸50 s(PA/PB引物)或90 s(β01/β02和UNA101/UNA102引物),30個循環(huán);72℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測。紫外燈下割取目的片段,利用Axygen DNA凝膠回收試劑盒分離純化,回收產(chǎn)物連接到pGEM-T Easy(Promega, Madison, WI)載體上,通過熱擊法將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH5α中,挑選陽性克隆,送上海立菲生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測序。

1.3 滾環(huán)擴增

為了獲得高純度的菜豆金色花葉病毒屬病毒及其衛(wèi)星基因組,對苣荬菜病樣進(jìn)行了滾環(huán)擴增(rolling circle amplification,RCA)。按照TempliphiTMKit(GE Healthcare)說明書上的步驟進(jìn)行環(huán)狀DNA的擴增。首先將1 μL植物總DNA樣品(約50 ng)加入到5 μL樣品緩沖液中,95℃變性3 min,立刻插入冰上放置10 min;然后加入5 μL反應(yīng)緩沖液和0.2 μL酶(phi29 DNA聚合酶),在30℃反應(yīng)18 h;最后在65℃下加熱10 min,終止反應(yīng)。

1.4 病毒DNA-A全長基因組克隆

根據(jù)測序獲得的部分DNA-A序列,設(shè)計特異引物AYVCNV-F:5′-GACCCGCCGATATAGTCAT-3′和AYVCNV-R:5′-CGCTTCGACATAATTGCGA-3′擴增DNA-A全長。PCR反應(yīng)體系:2×PCR反應(yīng)緩沖液(含Mg2+)25 μL、2 μmol/L dNTPs 10 μL、20 μmol/L 上、下游引物各1 μL、KOD FX DNA聚合酶(1 U/μL,日本東洋紡)1 μL、250 ng 植物總DNA,加雙蒸水定容至50 μL。擴增條件:98℃預(yù)變性2 min;98℃變性45 s,46℃退火45 s,68℃延伸3 min,30個循環(huán);68℃延伸10 min。按1.2中的方法進(jìn)行克隆測序。

1.5 病毒DNA-A及其衛(wèi)星基因組結(jié)構(gòu)和進(jìn)化重組分析

通過DNASTAR Lasergene 7.1軟件完成核酸序列拼接,運用DNAMAN 5.22 (Lynnon Biosoft, Quebec, Canada)和EditSeq(DNASTAR Lasergene 7.1)共同完成開放閱讀框的尋找。序列相似性比對先通過BLAST(www.ncbi.nlm.nih.gov)進(jìn)行初步比對,再選用MegAlign中的Clustal W方法(DNASTAR Lasergene 7.1)進(jìn)行深入比對。進(jìn)化樹構(gòu)建采用MEGA 5中的鄰接法(neighbor-joining)完成,步差值設(shè)置為1 000[20]。重組分析通過RDP 4.46完成[21]。

2 結(jié)果與分析

2.1 病毒檢測

以PA/PB為引物從YN4368樣品中擴增到約500 bp的目的條帶;以β01/β02和UNA101/UNA102為引物從YN4368樣品中均擴增到約1 300 bp的目的條帶。將獲得的目的條帶進(jìn)行克隆測序,最終獲得5條序列(YN4368-32、YN4368-34、YN4368-28β、YN4368-32β和YN4368-69α)。經(jīng)BLAST比對后結(jié)果顯示:YN4368-32與中國勝紅薊黃脈病毒YN1995(AYVCNV-YN1995,KU663132)的CP基因序列相似性高達(dá)98%,而YN4368-34與一點紅黃脈病毒越南分離物Emiliayellowveinvirusisolate Vietnam(EmYVV-Vietnam,KC878472)相似性高達(dá)97%;YN4368-28β和YN4368-32β與賽葵黃脈β衛(wèi)星Y249分離物(MaYVB-Y249,AJ971703)相似性高達(dá)97%;YN4368-69β與中國番茄黃化曲葉α衛(wèi)星Y244分離物(TYLCCNA-Y244,AJ888449)相似性高達(dá)86.3%。以上結(jié)果表明,在苣荬菜病株YN4368中存在菜豆金色花葉病毒屬病毒以及β和α衛(wèi)星復(fù)合侵染。

2.2 病毒DNA-A全基因組結(jié)構(gòu)及相似性比較

利用全長引物AYVCNV-F/R,以YN4368樣品總DNA為模板未擴增到相應(yīng)條帶。改用RCA產(chǎn)物為模板,擴增到大小約為2 800 bp的條帶。將目的條帶進(jìn)行克隆、測序后共獲得2條DNA-A全長序列(YN4368-84和YN4368-88)。兩條DNA-A都具有舊世界單組分菜豆花葉病毒屬病毒典型的基因組結(jié)構(gòu)特征,編碼7個開放閱讀框(ORF)。YN4368-84(GenBank登錄號:KX759646)全基因組包含2 744個核苷酸(nucleotides, nt),其病毒鏈編碼AV1(293～1 066 nt)和AV2(133～483 nt),其互補鏈編碼AC1(1 515～2 603 nt)、AC2(1 208～1 615 nt)、AC3(1 063～1 467 nt)、AC4(2 153～2 575 nt)、AC5(271～543 nt),在AC1和AV2間含有一個273 nt的基因間隔區(qū)(intergenic region,IR)。YN4368-88(GenBank登錄號:KX759647)全基因組包含2 752 nt,其病毒鏈編碼AV1(294～1 067 nt)和AV2(134～484 nt),互補鏈編碼AC1(1 516～2 604 nt)、AC2(1 209～1 616 nt)、AC3(1 064～1 468 nt)、AC4(2 190～2 447 nt)、AC5(272～544 nt),在AC1和AV2間含有一個281 nt的IR。

將序列YN4368-84與YN4368-88進(jìn)行比對發(fā)現(xiàn),兩條序列相似性為90.8%。將這兩條序列與GenBank中的其他病毒序列進(jìn)行比對,發(fā)現(xiàn)序列YN4368-84與當(dāng)?shù)匕l(fā)現(xiàn)的中國勝紅薊黃脈病毒分離物Y4326(AYVCNV-Y4326,KU601622)和分離物YN4265(AYVCNV-YN4265,KU975392)相似性最高,為99%;序列YN4368-88與中國勝紅薊黃脈病毒分離物YN4356(AYVCNV-YN4356,KU975393)相似性最高,為96%。根據(jù)國際病毒分類委員會(ICTV)確定的菜豆金色花葉病毒屬病毒種的分類標(biāo)準(zhǔn),DNA-A的核苷酸相似性小于89%則認(rèn)為是病毒新種,大于89%則確定為同種不同分離物[3]。另外,根據(jù)Fauquet等對同種不同成員間的分類標(biāo)準(zhǔn),同種成員間的核苷酸相似性小于93%則表示這些成員屬于不同的株系[22]。因此,YN4368-84DNA-A和YN4368-88DNA-A都屬于中國勝紅薊黃脈病毒,但二者屬于不同的株系,分別為中國勝紅薊黃脈病毒分離物YN4368-84(AYVCNV-YN4368-84)和中國勝紅薊黃脈病毒分離物YN4368-88(AYVCNV-YN4368-88)。以上結(jié)果表明,苣荬菜病株YN4368中存在中國勝紅薊黃脈病毒兩種株系的共同侵染。

2.3 病毒DNA-A的進(jìn)化和重組分析

將分離物AYVCNV-YN4368-84和AYVCNV-YN4368-88與其他菜豆金色花葉病毒屬病毒構(gòu)建進(jìn)化樹。結(jié)果顯示,AYVCNV-YN4368-84與AYVCNV-Y4326聚于一個小分支,和其余AYVCNV等又共同聚于一個分支;AYVCNV-YN4368-88與AYVCNV-YN4356獨自在一個小的分支,和其余AYVCNV等又共同聚于一個分支(圖1)。該結(jié)果表明AYVCNV-YN4368-84和AYVCNV-Y4326親緣關(guān)系最近;AYVCNV-YN4368-88與AYVCNV-YN4356親緣關(guān)系最近;雖然AYVCNV-YN4368-84和AYVCNV-YN4368-88分離自同一寄主、屬于同一種病毒,但兩者在遺傳進(jìn)化中存在一定的距離。RDP重組分析顯示,分離物AYVCNV-YN4368-84和AYVCNV-YN4368-88中并無明顯的重組事件發(fā)生。

圖1 AYVCNV-YN4368-84和AYVCNV-YN4368-88與報道的其他菜豆金色花葉病毒屬病毒基于DNA-A的系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig.1 Phylogenetic dendrogram based upon DNA-A nucleotide sequence alignment of AYVCNV-YN4368-84 and AYVCNV-YN4368-88 with other selected begomoviruses from GenBank

2.4 病毒伴隨的β衛(wèi)星分子結(jié)構(gòu)及其相似性比較

序列YN4368-28β(KX759648)和YN4368-32β全長都為1 359 nt,序列同源性為99.9%,僅有2個核苷酸的差異,因此選擇YN4368-28β進(jìn)行基因注釋和分析。YN4368-28β互補鏈上編碼一個C1 基因(196～585 nt),在1 275～1 359 nt和1～14 nt區(qū)域有1個包含著莖環(huán)結(jié)構(gòu)在內(nèi)的衛(wèi)星保守區(qū)域(satellite conserved region,SCR),在766～970 nt 區(qū)域內(nèi)有一個富含A的區(qū)域(A含量為60.49%)。將YN4368-28β序列與GenBank中的其他β序列進(jìn)行比對發(fā)現(xiàn),該序列與MaYVB-Y249(AJ971703)相似性最高,為97%,與MaYVB其他分離物相似性為95%～96%,與其他β衛(wèi)星序列相似性≤83%。根據(jù)ICTVβ衛(wèi)星分類標(biāo)準(zhǔn),全序列核苷酸同源性小于78%則認(rèn)為是新的β衛(wèi)星,大于則確定該分離物屬于同一種β衛(wèi)星[3],因此YN4368-28β衛(wèi)星屬于MaYVB的一個分離物,即賽葵黃脈β衛(wèi)星分離物YN4368-28(MaYVB-YN4368-28)。將MaYVB-YN4368-28與分布在云南的其他β衛(wèi)星構(gòu)建進(jìn)化樹,結(jié)果顯示MaYVB-YN4368-28與MaYVB-Y47和MaYVB-Y249聚于一個小分支,又與其他MaYVB共同聚于一個分支(圖2)。該進(jìn)化分析結(jié)果表明,MaYVB-YN4368-28與MaYVB-Y47和MaYVB-Y249親緣關(guān)系較近。RDP重組分析結(jié)果顯示,MaYVB-YN4368-28衛(wèi)星序列中無明顯的重組現(xiàn)象。

圖2 基于MaYVB-YN4368-28與云南報道的其他β衛(wèi)星分子構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig.2 Phylogenetic dendrogram based upon alignment of MaYVB-YN4368-28 with other betasatellites identified in Yunnan Province

2.5 病毒伴隨的α衛(wèi)星分子結(jié)構(gòu)及其相似性比較

序列YN4368-69α(KX759649)全長為1 359 nt,病毒鏈上編碼一個Rep基因(79～1 026 nt),具有一個包含TAGTATTAC序列的莖環(huán)結(jié)構(gòu),在1 025～1 214 nt 區(qū)域內(nèi)有一個富含A的區(qū)域(A含量為48.95%)。將YN4368-69α與GenBank中的其他α序列進(jìn)行比對發(fā)現(xiàn),該序列與TYLCCNA-Y244相似性最高，為86.3%,與其他α衛(wèi)星序列相似性≤85%。根據(jù)ICTVα衛(wèi)星分類標(biāo)準(zhǔn),全序列核苷酸同源性小于83%則認(rèn)為是新的α衛(wèi)星,大于則確定該分離物屬于同一種α衛(wèi)星[3],因此YN4368-69α衛(wèi)星屬于TYLCCNA(TYLCCNA-YN4368-69)。將TYLCCNA-YN4368-69與GenBank中其他α衛(wèi)星構(gòu)建進(jìn)化樹,結(jié)果顯示TYLCCNA-YN4368-69獨自成一支,與其他TYLCCNA共同聚于一個分支(圖3)。該結(jié)果表明,TYLCCNA-YN4368-69與TYLCCNA的其他分離物親緣關(guān)系相對較近,但又存在一定的距離。RDP重組分析結(jié)果顯示,TYLCCNA-YN4368-69是由TYLCCNA-Y261和TbCSA-Y216重組而來,TYLCCNA-Y261是主要的母本,而TbCSA-Y216則是次要的母本(RDP,P=3.539×10-0.4;SiScan,1.107×10-0.6)。重組主要發(fā)生在TYLCCNA-YN4368-69的306～958 nt區(qū)段(Rep),該區(qū)段來自TbCSA-Y216。

圖3 基于TYLCCNA-YN4368-69與云南報道的其他α衛(wèi)星分子構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig.3 Phylogenetic dendrogram based upon alignment of TYLCCNA-YN4368-69 with other alphasatellites identified in Yunnan Province

3 結(jié)論與討論

本研究從表現(xiàn)黃脈癥狀的苣荬菜中分離到中國勝紅薊黃脈病毒,利用分子克隆手段和生物信息學(xué)技術(shù)對該病毒進(jìn)行分析,結(jié)果表明,該病毒與賽葵黃脈β衛(wèi)星和中國番茄黃化曲葉α衛(wèi)星相伴隨,這是菜豆金色花葉病毒屬病毒復(fù)合體侵染中國苣荬菜的首次報道。

雜草是菜豆金色花葉病毒屬病毒及其傳播介體煙粉虱的重要中間寄主,能同時被多種該屬病毒及其衛(wèi)星復(fù)合侵染。本研究從1株苣荬菜中分離到了兩種株系的中國勝紅薊黃脈病毒、一種β衛(wèi)星以及一種α衛(wèi)星,表明苣荬菜是菜豆金色花葉病毒屬病毒的寄主之一,能被該屬病害復(fù)合體侵染。已有研究表明,雜草如同收納菜豆金色花葉病毒屬病毒的容器,通常一株雜草中能同時被多種病毒及其衛(wèi)星復(fù)合侵染[14, 23-24]。菜豆金色花葉病毒屬病毒復(fù)合侵染增加了重組和組分互換發(fā)生的頻率,導(dǎo)致產(chǎn)生新分離物和新病毒[25-27]。因此需進(jìn)一步對紅河州河口縣雜草開展系統(tǒng)調(diào)查和檢測,加強對AYVCNV/MaYVB/TYLCCNA病害復(fù)合體發(fā)生率及病害嚴(yán)重度的調(diào)查研究,以防該類型的復(fù)合體造成病害的暴發(fā)流行。

AYVCNV在海南省?？诤蛷V西勝紅薊中最先發(fā)現(xiàn)[9-10],2012年在越南勝紅薊中也發(fā)現(xiàn)該病毒(AYVCNV-Vietnam 16,KC878475)。云南河口處于元江-紅河流域向越南的出境處,是云南海拔最低的區(qū)域。本研究中發(fā)現(xiàn)來自云南紅河的分離物AYVCNV-YN4368-84、AYVCNV-Y4326、AYVCNV-YN4265與AYVCNV-Vietnam 16親緣關(guān)系最近。該結(jié)果表明,云南河口地區(qū)的AYVCNV-YN4368-84這一株系是AYVCNV-Vietnam 16的一個新的變種,且該株系很有可能是AYVCNV-Vietnam 16株系跨境傳播傳入該地。

假重組是導(dǎo)致菜豆花葉病毒屬病毒遺傳變異的一個重要原因之一,DNA-A和衛(wèi)星之間的交換也稱為假重組。已有研究表明,AYVCNV與AYVCNB形成AYVCNV/AYVCNB病害復(fù)合體或與AYVCNA形成AYVCNV/AYVCNA復(fù)合體[9-10,28]。本研究從黃脈癥狀的苣荬菜中分離到了AYVCNV/MaYVB/TYLCCNA病害復(fù)合體,這表明AYVCNV在自然條件下也能與其他異源β衛(wèi)星和α衛(wèi)星相伴隨,并且該復(fù)合體的形成很有可能是通過假重組實現(xiàn)的。MaYVB最早于2008年從具有黃脈癥狀的賽葵上分離到,與MaYVV相伴隨,參與植株典型癥狀反應(yīng),并能增加MaYVV在本氏煙中的積累[29]。本研究中,MaYVB是否是癥狀所必需,以及能否加強AYVCNV在苣荬菜中的積累還需進(jìn)一步的研究。

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(責(zé)任編輯： 田 喆)

MolecularcharacterizationofAgeratumyellowveinChinavirusinfectingSonchusarvensisinYunnan,Chinaandassociatedsatellites

Zhao Liling, Zhong Jing, Zhang Xiaoyun, Li Tingting, Ding Ming

(InstituteofBiotechnologyandGermplasmResources,YunnanAcademyofAgriculturalSciences;KeyLaboratoryofAgriculturalBiotechnologyofYunnanProvince,Kunming650223,China)

Weeds are crucial intermediate hosts of begomoviruses and frequently harbor multiple begomoviruses and associated satellites.Sonchusarvensis, a common weed in Honghe,Yunnan Province, showed symptoms typical of begomovirus infection in 2014. Begomoviruses associated withS.arvensiswas studied using cloning, sequencing and bioinformatic analysis. Two full-length begomoviruses, two betasatellites and one alphasatellite were isolated from one sample. Sequence analysis showed that these begomovirus sequences shared the highest identity (99% or 96%) with Ageratum yellow vein China virus (AYVCNV), confirming both of them as an isolate of AYVCNV. These two betasatellite sequences shared 97% identity with Malvastrum yellow vein betasatellite (MaYVB), confirming all of them as isolates of MaYVB. The alphasatellite sequence shared 86.3% identity with Tomato yellow leaf curl China alphasatellite (TYLCCNA), confirming it as an isolate of TYLCCNA. This is the first report of begomovirus disease complex associated withS.arvensisin China.

begomoviruses; alphasatellite; betasatellite;Sonchusarvensis

S 436.43

： ADOI： 10.3969/j.issn.0529-1542.2017.05.010

2016-10-13

： 2017-01-07

云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究青年項目(2014FD067)；國家自然科學(xué)基金(31260421)

* 通信作者 E-mail:mingd73@163.com