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    QuEChERS- 超高效液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定草莓中2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯殘留量

    2017-09-28 08:58:49汪志威齊沛沛王新全徐霞紅王祥云金華市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量綜合監(jiān)督檢測中心浙江金華3000省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地浙江省植物有害生物防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥殘留檢測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所浙江杭州300
    浙江農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年9期
    關(guān)鍵詞:蕓苔內(nèi)酯草莓

    虞 冰,劉 莉,汪志威,齊沛沛,王新全,徐霞紅,王祥云(.金華市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量綜合監(jiān)督檢測中心,浙江 金華 3000; .省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地浙江省植物有害生物防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥殘留檢測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所,浙江 杭州 300)

    QuEChERS- 超高效液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定草莓中2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯殘留量

    虞 冰1,劉 莉1,汪志威2*,齊沛沛2,王新全2,徐霞紅2,王祥云2
    (1.金華市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量綜合監(jiān)督檢測中心,浙江 金華 321000; 2.省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地浙江省植物有害生物防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥殘留檢測重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所,浙江 杭州 310021)

    建立了超高效液相色譜- 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜測定草莓中2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯殘留量的方法?;赒uEChERS方法進(jìn)行了凈化材料及其配比的優(yōu)化,最終采用40 mg PSA 和40 mg C18的組合進(jìn)行凈化。試驗(yàn)結(jié)果表明,2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯在2.5~1 000 μg·L-1內(nèi)線性良好,相關(guān)系數(shù)為0.999,其最低檢出限為5 μg·kg-1,定量限為20 μg·kg-1。在20、50、100和200 μg·kg-1添加水平下,對草莓空白樣品添加2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯,方法回收率為98.1%~110%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.3%~5.4%,滿足農(nóng)藥殘留分析方法的要求。應(yīng)用本方法對市售的47個草莓樣品進(jìn)行檢測,均為未檢出2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯殘留。

    2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯; 超高效液相色譜- 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜; 草莓; 植物生長調(diào)節(jié)劑

    1970年,Mitchell[1]首先從油菜花粉中提取到可促進(jìn)植物生長的活性物質(zhì),命名為Brassins(蕓苔素內(nèi)酯),之后又有50余種天然蕓苔素內(nèi)酯類化合物(brassinolide)及其類似物激素從大量物種的花、種子、根莖和葉中被分離出來,被統(tǒng)稱為蕓苔素甾醇(brassinosteroids,BRs)。在蕓苔素甾醇植物激素中,蕓苔素內(nèi)酯類化合物因其活性最高而被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)[2]。目前我國已登記的蕓苔素內(nèi)酯主要有4種[3],分別為2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯、22,23,24- 表蕓苔素內(nèi)酯、28- 高蕓苔素內(nèi)酯和28- 表高蕓苔素內(nèi)酯。其中,2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯由于合成所需工業(yè)原料麥角甾醇易得,因此應(yīng)用更為廣泛[4]。

    草莓以其香味誘人、口感甜美、具有藥用價值以及高經(jīng)濟(jì)價值的特點(diǎn)而廣受青睞[5]。2,4- 蕓苔素內(nèi)酯的使用有助于提高草莓產(chǎn)量[6],現(xiàn)已有相關(guān)產(chǎn)品獲得登記[7]。目前對蕓苔素內(nèi)酯類化合物報道的檢測方法包括氣相色譜- 質(zhì)譜法[8- 9]、高效液相色譜- 電化學(xué)檢測器[10]/熒光[11]/質(zhì)譜法[12]。其中,氣相色譜- 質(zhì)譜法主要用于鑒定,其靈敏度較差;而高效液相色譜- 電化學(xué)檢測器/熒光/質(zhì)譜法主要采用苯硼酸、菲硼酸、萘硼酸、二茂鐵硼酸、9- 菲硼酸和2- 溴吡啶- 5- 硼酸等硼酸衍生試劑[11- 14]提高蕓苔素內(nèi)酯的儀器響應(yīng)值,確保靈敏度,但衍生過程前處理方法較為繁瑣,且衍生試劑通?;钚暂^高難以長期保存。本試驗(yàn)擬基于QuEChERs方法,結(jié)合超高效液相色譜- 三重四極桿質(zhì)譜建立草莓中2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯殘留量的快速檢測方法,并對實(shí)際樣品進(jìn)行檢測驗(yàn)證。

    1 材料與方法

    1.1 儀器與試劑

    采用超高效液相色譜儀LC- 30A(日本Shimadzu公司)和三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀AB- SCIEX 4500(美國AB公司);Masslynx 4.1軟件用于儀器控制、數(shù)據(jù)采集和結(jié)果分析。色譜柱為Waters T3柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm);臺式離心機(jī)(美國Thermo公司);Filter Unit濾膜(0.22 μm,Agela Technologies公司)。

    甲醇、乙腈(色譜純,美國Merck公司);乙酸銨、甲酸(HPLC級,美國Tedia公司);氯化鈉、無水硫酸鎂等均為分析純,購自華東醫(yī)藥有限公司;PSA、C18、GCB凈化材料均購于Agela Technologies公司。

    1.2 樣品前處理方法

    萃取。稱取草莓樣品10.00 g(0.01 g)于50 mL離心管中,準(zhǔn)確加入10 mL乙腈,渦旋1 min。加入1 g氯化鈉和4 g無水硫酸鎂,渦旋1 min,在7 000 r·min-1條件下離心3 min,取上清液待凈化。

    凈化。移取上清液1.5 mL于2 mL離心管中,加入40 mg PSA+40 mg C18,劇烈震蕩1 min后,在7 000 r·min-1條件下離心3 min,準(zhǔn)確吸取上清液0.5 mL至裝有0.5 mL水的2 mL離心管中,混勻,以0.22 μm濾膜過濾,待超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC- MS/MS)測定。

    1.3 儀器分析方法

    采用UPLC- MS/MS進(jìn)行樣品中2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯的分析測定。色譜柱為Waters T3柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),流動相為水和甲醇(1∶9,V/V),其中水相含2 mmol·L-1乙酸銨和甲醇中含0.1%甲酸;流速為0.25 mL·min-1,柱溫35 ℃,進(jìn)樣量5 μL。

    質(zhì)譜條件。采用電噴霧離子源,多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM),加熱溫度500 ℃,噴霧電壓5 500 V。該化合物的特征離子對有4對,其母離子- 子離子對及相應(yīng)的碰撞能量和去簇電壓經(jīng)方法優(yōu)化后條件見表1,表中標(biāo)注*子離子為定量離子。

    表1 2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯的UPLC- MS/MS離子對及碰撞能量、去簇電壓

    2 結(jié)果與分析

    2.1 質(zhì)譜條件優(yōu)化

    本試驗(yàn)基于三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀確立2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯的質(zhì)譜條件,主要包括離子對選擇、碰撞能量和去簇電壓等參數(shù)優(yōu)化。配制1.0 mg·L-12,4- 表蕓苔素內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)溶液,通過蠕動泵以7 μL·min-1的流速直接進(jìn)入質(zhì)譜進(jìn)行分析。首先,在Q1 MS模式下,m/z為300~600的質(zhì)量范圍內(nèi)進(jìn)行全掃描,結(jié)果發(fā)現(xiàn),其母離子[M+H]+的質(zhì)核比m/z為481.4。然后,在Product模式下,以481.4為母離子篩選子離子,在0~40 eV內(nèi),改變碰撞電壓獲得響應(yīng)值較高的子離子依次為315.2,349.3,445.2和113.0。最后,在MRM模式下優(yōu)化每對離子對的碰撞能量和去簇電壓(表1)。圖1展示了50 μg·L-12,4- 表蕓苔素內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)色譜- 質(zhì)譜分析后得到的4對離子對的提取離子流色譜圖,響應(yīng)值較高的離子對依次為481.4>315.2和481.4>445.2。通過分析草莓基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液也驗(yàn)證這兩對離子對具有最高的響應(yīng)值和較低的干擾,確定以481.4>315.2為定量離子,481.4>445.2為定性離子。

    圖1 50 μg·L-1蕓苔素內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)溶液4組離子對的特征

    2.2 樣品凈化材料的選擇和優(yōu)化

    QuEChERS[15]方法是近年來發(fā)展十分迅速的一種前處理方法,該方法的重要環(huán)節(jié)在于除雜吸附劑的選擇。本試驗(yàn)首先開展了4種吸附劑組合,即PSA+C18、PSA+GCB、PSA+GCB+C18和GCB+C18,對草莓提取液凈化效果的比較。結(jié)果表明,當(dāng)吸附劑使用量各40 mg時,對樣品色素的去除效果依次為PSA+C18≈PSA+GCB>PSA+GCB+C18>GCB+C18。同時在空白草莓樣品中添加200 μg·kg-1蕓苔素內(nèi)酯后,比較4種吸附劑組合的回收率,結(jié)果表明,40 mg PSA+40 mg C18的填料組合凈化后蕓苔素內(nèi)酯的回收率最高為103.8%,其余填料組合凈化后對蕓苔素內(nèi)酯損失較大,其回收率僅為51.2%~63.7%,故選擇以PSA+C18的填料組合作為凈化材料。

    在選定以PSA和C18組合作為凈化材料后,本試驗(yàn)又比較了20、40、60和80 mg等4種不同用量對草莓提取液的凈化效果(表2),20 mg添加水平草莓萃取樣品的顏色較紅,40、60和80 mg添加量凈化效果明顯優(yōu)于20 mg;添加比例為40 mg時,繼續(xù)增加凈化材料比例對樣品去色效果不明顯。

    同時,評價了4檔凈化材料添加后草莓中2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯在200 μg·kg-1的添加回收率,結(jié)果顯示,回收率在95.3%~111.0%,能滿足檢測要求。本方法最終以40 mg PSA+40 mg C18作為草莓樣品提取液的凈化材料。

    表2 2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯各前處理方法的回收率

    2.3 線性、靈敏度、基質(zhì)效應(yīng)和方法回收率

    配置2.5、5、10、25、50、100、250、500和1 000 μg·L-12,4- 表蕓苔素內(nèi)酯的溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液和草莓基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液,以定量離子對481.4>315.2響應(yīng)值對標(biāo)樣濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試驗(yàn)結(jié)果表明,在2.5~1 000 μg·L-1,溶劑標(biāo)線性擬合方程為Y=2423.8X+10 250,相關(guān)系數(shù)r為0.999,其中Y為峰面積,X為標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度;在2.5~1 000 μg·L-1,基質(zhì)標(biāo)線性擬合方程Y=1 866.1X+16 545,相關(guān)系數(shù)r為0.999。以兩組標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合方法的斜率比值作為基質(zhì)效應(yīng)判定的依據(jù),結(jié)果表明,草莓萃取樣品經(jīng)本方法凈化后的基質(zhì)效應(yīng)為0.77,基質(zhì)效應(yīng)表現(xiàn)為抑制,因此采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液外標(biāo)法進(jìn)行定量。

    該方法對2,4表蕓苔素內(nèi)酯在草莓樣品中的最低檢出限以3倍信噪比計(jì)為5 μg·kg-1,最低定量限以10倍信噪比為20 μg·kg-1。在草莓空白樣品中添加適當(dāng)體積的2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)溶液,使樣品中添加濃度分別為20、50、100和200 μg·kg-1,靜置30 min,使藥液被草莓樣品充分吸附,隨后按照1.2節(jié)的前處理方法和1.3節(jié)的儀器條件進(jìn)行方法驗(yàn)證,回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見表3。結(jié)果表明,本方法對草莓中蕓苔素內(nèi)酯在定量限濃度(20 μg·kg-1),中等濃度(50和100 μg·kg-1)和高濃度(200 μg·kg-1)的加標(biāo)回收率在98%~110%,完全滿足方法檢測需要。

    表3 不同添加水平下草莓中2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯的回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

    2.4 實(shí)際樣品驗(yàn)證

    以本方法對47個市售草莓樣品進(jìn)行檢測,均未檢出2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯殘留。

    3 小結(jié)

    本研究建立了草莓樣品中2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯殘留量的QuEChERs- 超高效液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜的快速檢測方法。對PSA、C18和GCB等凈化材料組合和用量進(jìn)行了比較優(yōu)化,最終采用40 mg PSA和40 mg C18作為凈化材料組合。本方法前處理簡單、靈敏度高,線性范圍、準(zhǔn)確度和精密度均可滿足農(nóng)藥殘留檢測的要求。

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    (責(zé)任編輯:張瑞麟)

    S668.4

    :B

    :0528- 9017(2017)09- 1538- 03

    2017- 06- 18

    國家自然科學(xué)基金(21607133);浙江省公益技術(shù)應(yīng)用研究(2016C32G4010122)

    虞 冰(1986—),女,浙江金華人,助理工程師,本科,從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測研究工作,E- mail:563640286@qq.com。

    汪志威,助理研究員,博士,從事農(nóng)藥環(huán)境行為和殘留分析工作,E- mail:wangzhiwei1106@126.com。

    文獻(xiàn)著錄格式:虞冰,劉莉,汪志威,等. QuEChERS- 超高效液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定草莓中2,4- 表蕓苔素內(nèi)酯殘留量[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué),2017,58(9):1538- 1540,1545.

    10.16178/j.issn.0528- 9017.20170912

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