反相高效液相色譜法測(cè)定注射用頭孢美唑鈉的含量

王雷

摘 要：本文采用高校液相測(cè)定了注射用頭孢美唑鈉中頭孢美唑鈉的含量，固定相為：奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-四氫呋喃-磷酸二氫銨水溶液-10%四丁基氫氧化銨（20∶255∶25∶700∶12.8）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為272nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃。本文對(duì)注射用頭孢美唑鈉中的頭孢美唑鈉進(jìn)行含量測(cè)定的試驗(yàn)方法，結(jié)果表明該法不受其它成分的干擾，分離度好，精密度、重現(xiàn)性佳，可用于注射用頭孢美唑鈉中頭孢美唑鈉的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：注射用頭孢美唑鈉；反相高效液相色譜法；含量

注射用頭孢美唑鈉，適應(yīng)癥為本品適用于治療由對(duì)頭孢美唑鈉敏感的金黃色葡萄球菌、變形桿菌、摩氏摩根菌、大腸桿菌、肺炎桿菌、普羅維登斯菌屬、擬桿菌屬所引起的呼吸系統(tǒng)感染、膽道感染、腹膜炎、尿路感染、婦產(chǎn)科、口腔外科等感染[1-2]。反相高效液相色譜是由非極性固定相和極性流動(dòng)相所組成的液相色譜體系，它正好與由極性固定相和弱極性流動(dòng)相所組成的液相色譜體系（正相色譜）相反。RP-HPLC是當(dāng)今液相色譜的最主要的分離模式，幾乎可用于所有能溶于極性或弱極性溶劑中的有機(jī)物的分離。本文采用高校液相測(cè)定了注射用頭孢美唑鈉中頭孢美唑鈉的含量。

1 儀器與試藥

屹譜儀器U-1810準(zhǔn)雙光束紫外可見分光光度計(jì)（屹譜儀器制造（上海）有限公司）；Aurora-F1實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)洗瓶機(jī)（杭州喜瓶者生物技術(shù)有限公司）；1810-B石英自動(dòng)雙重蒸餾水器（上?？德穬x器設(shè)備有限公司）；LC-5520高效液相色譜儀（北京東西分析儀器有限公司）；FR224CN奧豪斯電子天平（上海書培實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；HYYTH-10小型實(shí)驗(yàn)室污水處理設(shè)備（濰坊浩宇環(huán)保有限公司）；HH-601超級(jí)恒溫水浴（江蘇金壇市億通電子有限公司）；SCQ-7201E雙頻加熱型超聲波清洗機(jī)（上海聲彥超聲波儀器有限公司）；UV2800雙光束紫外可見分光光度計(jì)（四川匯巨儀器設(shè)備有限公司）。頭孢美唑鈉對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[3-5]。色譜柱為奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）；乙腈-甲醇-四氫呋喃-磷酸二氫銨水溶液-10%四丁基氫氧化銨（20∶255∶25∶700∶12.8）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為272nm。理論板數(shù)按頭孢美唑鈉峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取注射用頭孢美唑鈉，精密稱定，置10毫升容量瓶?jī)?nèi)中，加入適量流動(dòng)相超聲溶解，在用流動(dòng)相定容，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取頭孢美唑鈉對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并稀釋成每1ml中含10μg的溶液，作為對(duì)照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

取頭孢美唑鈉合成過程中原輔料，按照供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在頭孢美唑鈉出峰處陰性液無色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5 準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取頭孢美唑鈉對(duì)照品100.0mg，置25ml容量瓶中，加入水溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.2、0.4、0.6、1.2、1.6、2.0mL，置于10mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，頭孢美唑鈉在80～800μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取頭孢美唑鈉對(duì)照品溶液20μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.72%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱取同批注射用頭孢美唑鈉樣品6份，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.78%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時(shí)精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，供試品頭孢美唑鈉峰面積積分值的RSD為0.78%。結(jié)果表明頭孢美唑鈉至少在4小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取對(duì)照品適量，精密稱取已知含量的樣品9份，置量瓶中，分別精密加入頭孢美唑鈉對(duì)照品，按項(xiàng)下方法制備成100%、120%、140%。取模擬樣品照“含量測(cè)定”項(xiàng)下方法試驗(yàn)，計(jì)算回收率為99.3%，RSD為0.55%。

2.10 樣品含量測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液10μl，20μl，供試品溶液20μl，注人液相色譜儀，測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算，即得，結(jié)果三批樣品的含量分別為為標(biāo)示量的99.1%、99.1%、100.9%。

3 討論

分別考察含1%醋酸0.025mol.L-1醋酸銨溶液-乙腈（75∶25），甲醇-水（35：65），乙腈-甲醇-四氫呋喃-磷酸二氫銨水溶液-10%四丁基氫氧化銨（20∶255∶25∶700∶12.8），乙腈-甲醇-四氫呋喃-磷酸二氫銨水溶液-10%四丁基氫氧化銨（20∶200∶125∶600∶12.8），乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液（含三乙胺0.5%，磷酸調(diào)pH至3.0）（40：60），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈-冰醋酸（70：30：1），水-乙腈-三乙胺（80∶20：0.01）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-甲醇-四氫呋喃-磷酸二氫銨水溶液-10%四丁基氫氧化銨（20∶255∶25∶700∶12.8）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-甲醇-四氫呋喃-磷酸二氫銨水溶液-10%四丁基氫氧化銨（20∶255∶25∶700∶12.8）為流動(dòng)相。此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于注射用頭孢美唑鈉中頭孢美唑鈉的含量測(cè)定。注射用頭孢美唑鈉中頭孢美唑鈉的含量為標(biāo)示量的105%-95%。

參考文獻(xiàn)

[1]彭鳳英，卓超，黃文祥，李崇智.頭孢美唑鈉治療呼吸系統(tǒng)急性細(xì)菌性感染療效觀察[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007（02）.

[2]彭鳳英，卓超，黃文祥，李崇智，江南，吳佳玉，熊瑛，王宋平，王榮麗，范賢明，湛曉勤，李多.頭孢美唑鈉注射劑治療呼吸系統(tǒng)感染的隨機(jī)、雙盲、多中心臨床試驗(yàn)[J].中國(guó)抗生素雜志，2006（06）.

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