通體結(jié)香技術(shù)產(chǎn)沉香的提取物灌胃KM小鼠的急性毒性研究△

劉洋洋，田樹紅，馮劍，楊云，魏建和*

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所海南分所(海南省南藥資源保護(hù)與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國家中醫(yī)藥管理局沉香可持續(xù)利用重點(diǎn)研究室)，海南 海口 570311；2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所(中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，瀕危藥材繁育國家工程實(shí)驗(yàn)室)，北京 100193；3.海南省藥物安全性評價(jià)研究中心，海南 海口 571199)

·專題·

通體結(jié)香技術(shù)產(chǎn)沉香的提取物灌胃KM小鼠的急性毒性研究△

劉洋洋1，2，田樹紅3，馮劍1，楊云1，2，魏建和1，2*

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所海南分所(海南省南藥資源保護(hù)與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國家中醫(yī)藥管理局沉香可持續(xù)利用重點(diǎn)研究室)，海南 ?？?570311；2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所(中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，瀕危藥材繁育國家工程實(shí)驗(yàn)室)，北京 100193；3.海南省藥物安全性評價(jià)研究中心，海南 海口 571199)

目的：考察KM小鼠灌胃給藥接受過量通體結(jié)香技術(shù)產(chǎn)沉香的提取物后可能出現(xiàn)的急性毒性反應(yīng)。方法：采用“最大給藥量法”進(jìn)行試驗(yàn)灌胃給予小鼠通體結(jié)香技術(shù)產(chǎn)沉香的提取物，觀察記錄小鼠的中毒癥狀及死亡情況，并于14 d后剖檢小鼠觀察其主要臟器。結(jié)果：以40 g·kg-1劑量給藥后，小鼠均未產(chǎn)生明顯的毒性癥狀，其體重與陰性對照組小鼠體重比較無顯著差異(P>0.05)，且大體剖檢生命臟器未見異常。結(jié)論：通體結(jié)香技術(shù)產(chǎn)沉香的提取物對KM小鼠無明顯毒性?？烧J(rèn)為成人以臨床常用劑量服用通體結(jié)香技術(shù)產(chǎn)沉香藥材安全可行。

沉香，提取物，最大給藥量，急性毒性

沉香是來自常綠喬木瑞香科Thymelaeaceae沉香屬AquilariaLam植物含有樹脂的木材?！吨腥A人民共和國藥典》記載沉香藥材具有行氣止痛，溫中止嘔，納氣平喘之功效，可用于治療胸腹脹悶疼痛，胃寒嘔吐呃逆，腎虛氣逆喘急等癥[1]?！侗静莩搜虐胭省酚涊d：“沉香，氣味辛，微溫，無毒”[2]。

白木香Aquilariasinensis(Lour.) Gilg.是我國生產(chǎn)沉香藥材的唯一正品植物來源，野生資源主要分布于海南島。健康的白木香樹不能產(chǎn)生沉香，只有受到外界傷害后才能在樹體中積累樹脂，形成沉香。魏建和等提出白木香防御反應(yīng)誘導(dǎo)結(jié)香假說[3]并發(fā)明沉香“通體結(jié)香技術(shù)”[4]，實(shí)現(xiàn)了沉香藥材規(guī)?；N植生產(chǎn)。為充分了解通體結(jié)香技術(shù)產(chǎn)沉香藥材的安全性，確保臨床用藥安全，本文對通體結(jié)香技術(shù)產(chǎn)沉香藥材進(jìn)行急性毒性研究。

1 材料

1.1藥材和試劑

沉香藥材(樣品批號120927YF03)采自海南省?？谑醒葚S沉香種植基地，為采用通體結(jié)香技術(shù)在白木香Aquilariasinensis(Lour.) Gilg.上所產(chǎn)的沉香，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所魏建和研究員鑒定為白木香含有樹脂的木材，且按照《中華人民共和國藥典》2015年版進(jìn)行全檢符合規(guī)定[5]，憑證標(biāo)本保存于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所海南分所沉香鑒定中心標(biāo)本館。

95%乙醇(分析純，西隴化工股份有限公司)，吐溫80(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠)。

1.2動(dòng)物

KM小鼠，SPF級，18.2～20.7g，雌雄各半，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號：№43004700000035)。

1.3供試品的制備

為最大限度提取沉香中的成分，本實(shí)驗(yàn)前期比較了不同濃度乙醇溶液對沉香提取物的提取率，發(fā)現(xiàn)70%乙醇提取率較高，因此，選擇70%乙醇作為提取溶劑。

沉香提取物的制備：取2kg沉香藥材，粉碎，用70%乙醇加熱回流提取2次，每次1h，過濾、合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得沉香提取物350g，提取率為17.5%。

吐溫溶液的制備：取吐溫80加水配制成體積分?jǐn)?shù)為1%的吐溫80水溶液。

沉香提取物供試品的制備：稱取20g沉香提取物置于研缽中，加入40mL1%吐溫80水溶液，混勻，置于冰箱內(nèi)(2～8℃)冷藏30min，研碎呈均勻的糊狀，待用。

2 方法與結(jié)果

取60只KM小鼠，隨機(jī)分組，分為供試品組(給予沉香提取物供試品)、溶媒對照組(給予1%吐溫80水溶液)和空白對照組，每組20只，雌雄各半。以允許的最大劑量對小鼠灌胃給藥，即單次給藥量為20g·kg-1，間隔4h后重復(fù)給藥1次。給藥前禁食12h，第2次給藥結(jié)束后喂食，不禁水。

給藥時(shí)觀察藥物對小鼠的毒性反應(yīng)情況、死亡數(shù)和死亡時(shí)間[6]。結(jié)果，各實(shí)驗(yàn)組小鼠給藥后均未產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)癥狀；分別于給藥前和給藥后1d、7d和14d稱量各實(shí)驗(yàn)組小鼠的體重(見表1)。結(jié)果表明：供試品組和溶媒對照組小鼠體重與陰性對照組動(dòng)物體重比較無顯著差異，p>0.05。說明沉香提取物以40g·kg-1(給藥濃度為500mg·mL-1)為給藥劑量對KM種小鼠進(jìn)行灌胃給藥急性毒性試驗(yàn)，不會(huì)抑制和減輕小鼠的體重增長；給藥14d后，頸椎脫臼處死小鼠，大體剖檢，檢查實(shí)驗(yàn)各組小鼠主要生命器官(心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腎上腺、胸腺、膀胱、睪丸、附睪、子宮、卵巢和腸道等)及給藥局部均未見異常。

表1 各實(shí)驗(yàn)組小鼠體重增長情況

注：P>0.05

3 結(jié)論與討論

急性毒性是指在24 h內(nèi)一次或多次給予動(dòng)物受試藥物后，所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，包括一般行為和外觀改變、大體形態(tài)變化以及死亡效應(yīng)，是預(yù)測藥物安全性的重要手段。通過急性毒性實(shí)驗(yàn)可了解藥物的毒性反應(yīng)和毒性程度[6-7]。

本研究以沉香提取物為受試藥物，以最大給藥量對KM小鼠進(jìn)行灌胃給藥，給藥劑量為40 g·kg-1(24 h內(nèi)2次給藥的累計(jì)劑量)，給藥濃度為500 mg·mL-1，給藥后對KM小鼠未產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)，且對小鼠體重亦未產(chǎn)生明顯影響。

KM小鼠灌胃40 g·kg-1的給藥劑量換算為成人(60 kg)的口服劑量約為3.24 g·kg-1[7]，以沉香藥材生藥量計(jì)算成人(60 kg)的口服劑量約為18.51 g·kg-1，即成人(60 kg)一日劑量高達(dá)1.11 kg沉香藥材。而《中華人民共和國藥典》規(guī)定成人服用沉香藥材的1日常用劑量為1～5 g[1]。因此，可認(rèn)為成人以臨床常用量服用通體結(jié)香技術(shù)產(chǎn)沉香藥材安全可行。

致謝：本實(shí)驗(yàn)由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所海南分所提供通體結(jié)香技術(shù)產(chǎn)沉香的提取物實(shí)驗(yàn)材料，并委托海南省藥物安全性評價(jià)研究中心在該中心GLP實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，在此對中心給予本研究提供幫助的所有老師一并致謝。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：172.

[2] 盧之頤.本草乘雅半偈[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1986：450.

[3] 張爭，楊云，魏建和，等.白木香結(jié)香機(jī)理研究進(jìn)展及防御反應(yīng)誘導(dǎo)結(jié)香假說[J].中草藥，2010，41(1)：19-21.

[4] Liu Y Y，Chen HQ，Yang Y，et al.Whole-tree agarwood-inducing technique：An efficient novel technique for producing high-quality agarwood in cultivatedAquilariasinensistrees[J].Molecules，2013，18，3086-3106.

[5] 劉洋洋，楊云，魏建和，等.不同產(chǎn)地通體香沉香藥材的質(zhì)量分析[J].中國現(xiàn)代中藥，2014，16(3)：183-186.

[6] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[Z].2005.

[7] 魏偉，吳希美，李元建.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)(第4版)[S].北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：71，383.

AcuteToxicityStudyofExtractsfromAgarwood

LIU Yangyang1，2，TIAN Shuhong3，F(xiàn)ENG Jian1，YANG Yun1，2，WEI Jianhe1，2*

(1.Hainan Provincial Key Laboratory of Resources Conservation and Development of Southern Medicine & Key Laboratory of State Administration of Traditional Chinese Medicine for Agarwood Sustainable Utilization，Hainan Branch of the Institute of Medicinal Plant Development，Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College，Haikou 570311，China；2.Key Laboratory of Bioactive Substances and Resources Utilization of Chinese Herbal Medicine，Ministry of Education & National Engineering Laboratory for Breeding of Endangered Medicinal Materials，Institute of Medicinal Plant Development，Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College，Beijing 100193，China；3.Research Center for Drug Evaluation of Hainan Province，Haikou 571199，China)

Objective：To study the acute toxicity of KM mice by gavage excess extracts of agarwood produced by Agar-Wit.Methods：The agarwood extracts were administered by intragastric administration (ig) to KM mice at the maximum daily dose，toxicity symptoms and mortality were observed and recorded.The main organs of mice，dissected after 14 days，were examined by the unaided eye.Results：The mice were all not observed obvious poisoned symptom and death with the acute toxicity test in 40 g·kg-1dose，and no obvious diversity (P>0.05) was found by comparing the negative control group in weight of the mice，also no abnormal condition for the pathologic examination of main organs.Conclusion：No apparent subchronic toxicity could be observed in mice afterigagarwood extracts.Agarwood produced by Agar-Wit oral dose commonly used in clinical treatment is safe.

Agarwood；extracts；maximum daily dose；acute toxicity

海南省重大科技計(jì)劃項(xiàng)目(ZDKJ2016004)；國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(8143055)；中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)與健康科技創(chuàng)新工程項(xiàng)目(2016-I2M-2-003)；中組部萬人計(jì)劃(99950534)

] 魏建和,研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向：藥用植物基因資源、分子育種及次生代謝產(chǎn)物調(diào)控研究；Tel：010-57833016；E-mail：wjianh@263.net

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.8.007

2017-05-30)

*[