乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR的表達(dá)及其臨床意義

章青波， 盧玫瑰， 徐寶福， 王 拴， 趙 麗， 周巧霞， 嚴(yán) 赫， 王超群， 黃飛駿

乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR的表達(dá)及其臨床意義

章青波1， 盧玫瑰1， 徐寶福1， 王 拴1， 趙 麗1， 周巧霞1， 嚴(yán) 赫1， 王超群2， 黃飛駿1

目的探討PI3K-AKT信號通路分子CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)及其臨床意義。方法應(yīng)用免疫組化EnVision兩步法檢測73例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR的表達(dá)，分析其與臨床病理特征的關(guān)系及表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR的表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性。CD44與TAGLN-2表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.311，P=0.007)；TRIM24與TAGLN-2表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.421，P=0.000)；CD44與ER表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.285，P=0.015)；ER與PR表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.598，P=0.000)。CD44陽性組患者術(shù)后5年累積生存率低于CD44陰性組(P=0.002)；ER陽性組患者術(shù)后5年累積生存率高于ER陰性組(P=0.026)。結(jié)論在乳腺癌中CD44、TRIM24可能通過激活PI3K-AKT信號通路上調(diào)TAGLN-2表達(dá)，CD44可能通過激活PI3K-AKT信號通路下調(diào)ER表達(dá)。CD44、ER有望成為預(yù)測乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者預(yù)后的輔助因子，聯(lián)合檢測CD44、ER、PR的表達(dá)有助于乳腺浸潤性導(dǎo)管癌治療策略的選擇及優(yōu)化。

乳腺腫瘤；浸潤性導(dǎo)管癌；CD44；TRIM24；TAGLN-2；ER；PR；臨床病理特征

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，其中70%以上為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌[1]。乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展與多種信號通路的異常激活相關(guān)，闡明這些信號通路在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用，對乳腺癌的防治有重要意義[2]。PI3K-AKT信號通路與腫瘤細(xì)胞的周期、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)，很多腫瘤中均檢測到PI3K編碼基因(PIK3)突變和AKT的活化[3]，其中Luminal B型乳腺癌 PIK3CA基因突變率達(dá)29%[4]。研究顯示PI3K-AKT信號通路與乳腺癌密切相關(guān)，但其作用機(jī)制尚待進(jìn)一步分析。本文采用免疫組化EnVision兩步法檢測PI3K-AKT通路上游分子CD44、三重基序蛋白24(tripartite motif-containing 24, TRIM24)及下游分子轉(zhuǎn)膠蛋白-2(transgelin-2, TAGLN-2)、ER、PR在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)，著重探討其與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系及意義，以期為乳腺癌的分子靶向治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1臨床資料收集2008年1月～10月徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院收治的73例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者，所有組織均經(jīng)HE染色觀察確診。73例患者均為女性，年齡27～87歲，平均52.3歲。

1.2方法將組織制作成病理組織芯片，4 μm厚切片，免疫組化采用EnVision兩步法，切片脫蠟、復(fù)水、高壓熱處理抗原修復(fù)、封閉等，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。兔抗人CD44單克隆抗體(1 ∶200)購自英國Abcam公司，兔抗人TRIM24單克隆抗體(1 ∶200)、兔抗人TAGLN-2單克隆抗體(1 ∶150)、兔抗人ER單克隆抗體(1 ∶200)、兔抗人PR單克隆抗體(1 ∶200)，均購自美國Proteintech公司；4 ℃孵育過夜，羊抗兔二抗(北京中杉金橋公司)37 ℃孵育1 h，經(jīng)DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水、透明、封固等。

1.3結(jié)果判斷免疫組化結(jié)果由兩名病理醫(yī)師共同觀察評估，每個標(biāo)本選擇5個在10×40倍隨機(jī)視野下進(jìn)行觀察。(1)CD44、TRIM24及TAGLN-2陽性判斷：按染色強(qiáng)度評分：0分為無著色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色；按癌細(xì)胞染色陽性率評分：無陽性細(xì)胞為0分、1%～10%為1分、11%～50%為2分、51%～75%為3分、76%～100%為4分；將兩項得分結(jié)果相乘：>3分者為陽性，≤3分者為陰性。(2)ER、PR陽性判斷：細(xì)胞核出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞率<10%為陰性，≥10%為陽性[5]。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析所有數(shù)據(jù)均通過IBM SPSS Statistics 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。采用χ2檢驗分析CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR蛋白表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者年齡、病理組織學(xué)分級、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。采用Pearson或Spearman相關(guān)性檢驗分析以上標(biāo)志物表達(dá)之間的相關(guān)性。采用Kaplan-Meier法分析CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR表達(dá)對患者術(shù)后5年生存率的影響。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR的表達(dá)及與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌臨床病理特征的關(guān)系73例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中蛋白表達(dá)：CD44主要表達(dá)于胞膜；TRIM24主要表達(dá)于胞核；TAGLN-2主要表達(dá)于胞質(zhì)，部分表達(dá)于胞核；ER及PR主要表達(dá)于胞核。CD44陽性者48例(65.8%)，TRIM24陽性者60例(82.2%)，TAGLN-2陽性者67例(91.8%)，ER陽性者58例(79.5%)，PR陽性者54例(74.0%)。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，以上5種蛋白表達(dá)在患者不同年齡、不同腫瘤大小、不同組織學(xué)分級及淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移分組之間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，表1)。

2.2CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者預(yù)后的關(guān)系Kaplan-Meier生存曲線顯示乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CD44陽性組患者術(shù)后5年累積生存率低于陰性組，兩組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002，圖1A)；ER陽性組患者術(shù)后5年累積生存率高于陰性組，兩組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.026，圖1B)；PR陽性組患者術(shù)后5年累積生存率高于陰性組(P=0.091，圖1C)；TRIM24、TAGLN-2表達(dá)對不同組患者術(shù)后5年累積生存率影響差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，圖1D、E)。

2.3CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR表達(dá)的相關(guān)性Pearson/Spearman相關(guān)性檢驗發(fā)現(xiàn)，CD44與TAGLN-2表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.311，P=0.007)，CD44與ER表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.285,P=0.015)；TRIM24表達(dá)與TAGLN-2表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.421，P=0.000)；ER表達(dá)與PR表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.598，P=0.000，表2)。

表2 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中CD44、TAGLN-2、TRIM24、ER、PR表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

PI3K-AKT信號通路與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，本實驗選取PI3K-AKT信號通路上游分子CD44、TRIM24及下游分子TAGLN-2、ER及PR，采用免疫組化EnVision兩步法檢測5種蛋白在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的表達(dá)，分析它們的相關(guān)性及臨床意義，為進(jìn)一步闡明PI3K-AKT在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用奠定理論基礎(chǔ)。

表1 CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR表達(dá)與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌臨床病理特征的關(guān)系

圖1乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中CD44(A)、ER(B)、PR(C)、TRIM24(D)及TAGLN-2(E)表達(dá)水平患者預(yù)后情況

CD44屬于膜表面糖蛋白，參與細(xì)胞黏附、遷移等過程，與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[6]。CD44處于PI3K/AKT信號通路上游，其對腫瘤細(xì)胞活動的調(diào)節(jié)可能通過PI3K/AKT通路實現(xiàn)[7-8]。TRIM24是含表皮生長因子反應(yīng)成分的反式激活因子，可與PI3K結(jié)合并激活PI3K/AKT通路[9]。TAGLN-2屬于骨架蛋白，PI3K-AKT激活后可增加其表達(dá)，從而提高腫瘤細(xì)胞的侵襲能力[10]。ER和(或)PR陽性乳腺癌患者對激素治療敏感性更高、預(yù)后更好，ER、PR陽性與PIK3CA基因突變相關(guān)，其中40%的ER陽性乳腺癌患者存在PIK3CA基因突變[3]。Bosch等[11]發(fā)現(xiàn)ER是PI3K/AKT下游分子，PI3K抑制劑可促進(jìn)激素受體陽性乳腺癌患者ER的表達(dá)。

本實驗發(fā)現(xiàn)CD44、TRIM24、TAGLN-2、ER、PR表達(dá)與患者年齡、腫瘤大小、癌組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無顯著相關(guān)性。其中CD44表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性結(jié)果和以往文獻(xiàn)報道不一致，可能與本實驗所選乳腺癌組織皆為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌有關(guān)，而以往報道包含不同組織病理類型乳腺癌，提示CD44在不同組織病理類型乳腺癌中的作用可能存在差異。本實驗還發(fā)現(xiàn)CD44陽性組患者術(shù)后5年累積生存率低于陰性組(P=0.002)，提示CD44高表達(dá)者預(yù)后差；ER陽性組患者術(shù)后5年累積生存率高于陰性組(P=0.026)，提示ER高表達(dá)者預(yù)后較好，該結(jié)果與Lin等[12]報道一致。

本組中CD44、TRIM24均與TAGLN-2表達(dá)呈正相關(guān)，提示CD44、TRIM24可能通過激活PI3K-AKT信號通路上調(diào)TAGLN-2的表達(dá)。此外，CD44與ER表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.285，P=0.015)，且與PR表達(dá)呈負(fù)相關(guān)趨勢(r=-0.219，P=0.062)；ER、PR表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.598，P=0.000)，提示CD44可能通過激活PI3K-AKT信號通路下調(diào)ER、PR的表達(dá)，該結(jié)果從反面印證了Bosch等關(guān)于PI3K抑制劑促進(jìn)ER表達(dá)的觀點，ER、PR表達(dá)的相關(guān)性與譚敏華等[13]報道一致。

綜上所述，本實驗結(jié)果表明，CD44、TRIM24可能通過PI3K-AKT信號通路上調(diào)TAGLN-2的表達(dá)，且CD44可能通過PI3K-AKT信號通路下調(diào)ER、PR的表達(dá)，其具體機(jī)制值得進(jìn)一步分析。在乳腺癌治療中，可以將CD44、ER及ER作為判斷乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者預(yù)后的輔助因子，聯(lián)合檢測CD44、ER、PR對乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者的預(yù)后評估及優(yōu)化治療策略具有重要的臨床意義。

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ExpressionofCD44,TRIM24,TAGLN-2,ERandPRinbreastinvasiveductalcarcinomaandtheirclinicopathologicsignificance

ZHANG Qing-bo1, LU Mei-gui1, XU Bao-fu1, WANG Shuan1, ZHAO Li1, ZHOU Qiao-xia1, YAN He1, WANG Chao-qun2, HUANG Fei-jun1

(1DepartmentofForensicPathology,WestChinaSchoolofPreclinicalandForensicMedicine,SichuanUniversity,Chengdu610041,China;2DepartmentofPathology,AffiliatedHospitalofXuzhouMedicalCollege,Xuzhou221006,China)

PurposeTo study the expression of biomolecules of PI3K-AKT signaling pathway including CD44, TRIM24, TAGLN-2, ER and PR in breast invasive ductal carcinoma, and to explore their clinicopathologic significance.MethodsThe expression of CD44, TRIM24, TAGLN-2, ER and PR in 73 cases of breast invasive ductal carcinoma were detected by immunohistochemistry (IHC) technology. And the relationship between the expression of these biomarkers and the age of patients, tumor size, histological grade, lymph node metastasis was analyzed. Besides, the influence of these biomarkers on prognosis and the relationship between the expression of these biomarkers were also analyzed.ResultsThere was no significant relationship between the expression of these biomarkers and the age of patients, tumor size, histological grade, lymph node metastasis. CD44 expression was positively correlated with TAGLN-2 expression (r=0.311,P=0.007), TRIM24 expression was positively correlated with TAGLN-2 expression (r=0.421,P=0.000). CD44 expression was negatively correlated with ER expression (r=-0.285,P=0.015). ER expression was positively correlated with PR expression (r=0.598,P=0.000). The postoperative 5-year cumulative survival-rate of CD44 positive group was lower than those of CD44 negative group (P=0.002), in contrast, the postoperative 5-year survival rate of ER positive group was higher than those of ER negative group (P=0.026).ConclusionThrough PI3K-AKT signaling pathway, CD44 and TRIM24 may up- regulate TAGLN-2 expression, however, CD44 may down-regulate ER and PR expression. CD44 and ER may act an useful predictor for the prognosis of breast invasive ductal carcinoma. Combined detection of CD44, ER and PR may provide additional therapeutic information which may be useful in breast cancer treatment.

breast neoplasm; invasive ductal carcinoma； CD44； TRIM24； TAGLN-2； ER； PR； clinicopathology

時間：2017-7-18 11:51 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170718.1151.004.html

1四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院法醫(yī)病理教研室，成都 6100412徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，徐州 221006

章青波，男，碩士研究生。E-mail： zqb335101@163.com 黃飛駿，男，碩士，教授，通訊作者。E-mail： fjhuang60123@163.com

R 737.9

:A

:1001-7399(2017)07-0724-04

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.07.004

接受日期：2017-05-11