苦丁茶黃酮提取物對D-半乳糖致小鼠衰老的改善作用

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(1.重慶第二師范學院，重慶市功能性食品協(xié)同創(chuàng)新中心,重慶 400067;2.重慶第二師范學院,重慶市功能性食品工程技術(shù)研究中心,重慶 400067;3.重慶第二師范學院,功能性食品研發(fā)重慶市工程實驗室,重慶 400067;4.重慶第二師范學院,生物與化學工程學院,重慶 400067;5.桂林醫(yī)學院公共衛(wèi)生學院食品衛(wèi)生與營養(yǎng)學教研室,廣西高校預防醫(yī)學重點實驗室,廣西桂林 541004)

苦丁茶黃酮提取物對D-半乳糖致小鼠衰老的改善作用

趙欣1,2,3,4,易若琨1,2,3,4,孫鵬1,2,3,4,宋家樂1,2,3,5,*

(1.重慶第二師范學院，重慶市功能性食品協(xié)同創(chuàng)新中心,重慶 400067;2.重慶第二師范學院,重慶市功能性食品工程技術(shù)研究中心,重慶 400067;3.重慶第二師范學院,功能性食品研發(fā)重慶市工程實驗室,重慶 400067;4.重慶第二師范學院,生物與化學工程學院,重慶 400067;5.桂林醫(yī)學院公共衛(wèi)生學院食品衛(wèi)生與營養(yǎng)學教研室,廣西高校預防醫(yī)學重點實驗室,廣西桂林 541004)

針對苦丁茶黃酮提取物對D-半乳糖致小鼠衰老的改善作用進行了研究。以注射D-半乳糖(120 mg/kg)致衰老模型小鼠為實驗對象,以其體質(zhì)量、臟器指數(shù)、血清和組織指標為評價指標,使用試劑盒和RT-PCR法檢測苦丁茶黃酮提取物(50和100 mg/kg)對衰老小鼠的血清和組織的影響,全面考察苦丁茶黃酮提取物的抗衰老作用。實驗結(jié)果表明,苦丁茶黃酮提取物能顯著(p<0.05)改善D-半乳糖造成的小鼠體質(zhì)量下降及胸腺和腦器官指數(shù)下降?？喽〔椟S酮提取物可以提高D-半乳糖致衰老小鼠血清和肝組織中的總抗氧化能力(T-AOC)和降低丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平;同時苦丁茶黃酮提取物也提高了衰老小鼠血清和肝組織中的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的酶活力?？喽〔椟S酮提取物還可以顯著(p<0.05)上調(diào)衰老小鼠肝組織中神經(jīng)型一氧化氮合酶(nNOS)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、錳超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、銅鋅超氧化物歧化酶(Gu/Zn-SOD)、過氧化氫酶(CAT)的mRNA表達和下調(diào)誘導型一氧化氮合酶(iNOS)表達,且高濃度苦丁茶黃酮提取物(100 mg/kg)的效果優(yōu)于同濃度的維生素C。

苦丁茶,黃酮,D-半乳糖,衰老,mRNA表達

衰老是一種生物體自發(fā)的必然過程,生物機體將逐漸表現(xiàn)機能衰退,適應性和抵抗力減退[1]。衰老與諸多疾病密切相關,包括高血壓、2型糖尿病、動脈粥樣硬化和老年癡呆等,可通過延緩衰老來減緩這些疾病的發(fā)生[2]。天然植物中包含黃酮在內(nèi)的多種抗氧化成分,已經(jīng)逐步被應用到抗氧化保健產(chǎn)品的開發(fā)中[3]。

苦丁茶是一種由冬青科冬青屬的苦丁茶種常綠喬木樹葉制成的特殊類茶飲品,在我國西南地區(qū)較為常見[4]?？喽〔璩Ｗ鳛楸＝★嬈泛退幵?傳統(tǒng)中醫(yī)學認為苦丁茶具有清熱消暑、生津止渴和潤喉止咳等功效[5]。最新的研究表明,苦丁茶及其含有的活性成分具有抗氧化、抗炎癥和抗癌等作用[6-7]。不同溶劑的苦丁茶提取物均表現(xiàn)出一定的抗氧化效果,其中乙酸乙酯組分提取物的抗氧化效果最好,其中的主要成分是多酚和黃酮類物質(zhì)[8],乙醇和ADS-17樹脂能夠進一步對植物黃酮進行提取及純化[9]。同時有研究表明,苦丁茶黃酮具有較好的DPPH自由基和ABTS自由基清除能力及三價鐵還原能力,表現(xiàn)出良好的體外抗氧化能力[10]。近年來對黃酮類物質(zhì)的抗氧化、抗衰老作用的研究表明,植物黃酮物質(zhì)的絕大部分生理活性作用都是以其抗氧化效果為基礎發(fā)揮的[11]?？喽〔韬械狞S酮化合物種類較多,含量也豐富,且不同地區(qū)產(chǎn)苦丁茶的黃酮種類和含量也存在差異[12]。但是由于苦丁茶的使用范圍有限,針對其生物活性作用的深入研究不夠,缺乏動物體內(nèi)研究、臨床研究和深入的分子層面的機制研究。本研究采用動物實驗對苦丁茶中提取的黃酮類物質(zhì)進行研究,對其抗衰老作用的分子機制進行較為深入的研究,將對進一步開發(fā)苦丁茶這種傳統(tǒng)資源提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料與儀器

實驗動物 雄性6周齡SPF級KM(昆明)小鼠50只(體質(zhì)量20～25 g)，購自于重慶醫(yī)科大學動物實驗中心,動物許可證號:SCXK(渝)2012-0001;苦丁茶 安國市祁珍養(yǎng)生食品有限公司出產(chǎn)野生苦丁茶;蘆丁標準品 上海源葉生物科技有限公司;T-AOC、NO、SOD、GSH-Px、MDA試劑盒 南京建成生物工程研究所;CycleTESTTM PLUS DNA染色試劑盒 德國Becton Dickinson公司;Trizol試劑、oligodT18、RNase、dNTP和MLV 美國Invitrogen公司;RT-PCR引物nNOS、eNOS、iNOS、Mn-SOD、Gu/Zn-SOD和CAT 天根生化科技有限公司;其余試劑 均為國產(chǎn)分析純。

Biomate3S型紫外可見光分光光度儀、A200PCR型儀、LUX型多功能性酶標儀 美國Thermo Fisher Scientific公司;Tancon2500PCR型凝膠成像儀 上海天能科技有限公司;ICEN-24R型高速冷凍離心機 杭州奧盛儀器有限公司。

1.2實驗方法

1.2.1 苦丁茶黃酮物質(zhì)的提取 稱取1 kg冷凍干燥后的苦丁茶樣品打粉,然后將苦丁茶粉末平均分為10份,每份中加入1 L濃度為70%(V/V)的乙醇溶液,在70 ℃水浴下浸提4 h后過濾,收集10份濾液并將濾液過硅藻土以除去脂溶性雜質(zhì),再次收集所有提取液;然后將提取液加入并通過裝ADS-17樹脂的層析柱,使苦丁茶黃酮類物質(zhì)被樹脂吸附。再用90%(V/V)的乙醇洗脫樹脂,使樹脂上吸附的黃酮物質(zhì)溶于乙醇,最后采用旋蒸法蒸干乙醇得到苦丁茶黃酮粗提取物[9]。

1.2.2 苦丁茶黃酮物質(zhì)含量的測定 稱取一定量的蘆丁標準品加入25 mL容量瓶中，加入10 mL的90%(V/V)的乙醇，依次再加入0.75 mL的5% NaNO2溶液、0.75 mL的10% Al(NO3)3溶液，10 mL的4% NaOH溶液，最后以90%的乙醇定容至刻度，配制成濃度分別為10、20、30、40和50 μg/mL的蘆丁標準液，在500 nm處測定不同濃度蘆丁標準液的吸光度，計算蘆丁的標準曲線。取0.01 g苦丁茶黃酮提取物溶于5 mL 90%的乙醇，再取2 mL苦丁茶黃酮提取物溶液于25 mL容量瓶中，重復蘆丁標準曲線測定方法測定苦丁茶黃酮提取物中黃酮的含量(蘆丁計)。

1.2.3 動物實驗 將適應環(huán)境喂養(yǎng)1周后的KM(昆明)小鼠隨機分為正常組、衰老對照組、維生素C灌胃組(陽性對照組)、苦丁茶黃酮低濃度灌胃組和苦丁茶黃酮高濃度灌胃組,每組10只。實驗開始后,正常組和衰老對照組小鼠每日灌胃0.2 mL蒸餾水;維生素C灌胃組、苦丁茶黃酮低濃度灌胃組和苦丁茶黃酮高濃度灌胃組小鼠每日分別灌胃維生素C(100 mg/kg)和苦丁茶黃酮(50和100 mg/kg)。2周后正常組小鼠每日繼續(xù)灌胃0.2 mL蒸餾水;衰老對照組小鼠每日除繼續(xù)灌胃0.2 mL蒸餾水外每日腹腔注射一次D-半乳糖(120 mg/kg);維生素C灌胃組和苦丁茶黃酮灌胃組小鼠除繼續(xù)分別灌胃維生素C和苦丁茶黃酮提取物外也每日腹腔注射一次D-半乳糖(120 mg/kg),持續(xù)6周,每周測量小鼠體質(zhì)量，然后對所有小鼠禁食24 h后斷頸處死小鼠[12],心臟取血及取肝臟進行后續(xù)實驗,同時測定胸腺和腦組織質(zhì)量，計算指數(shù)：胸腺和腦組織器官指數(shù)(g/kg)=臟器質(zhì)量(g)/小鼠體質(zhì)量(kg)。

表1 本研究中RT-PCR實驗的引物序列Table 1 Primer sequence of RT-PCR experiment in this study

1.2.4 血清和肝臟組織T-AOC、NO和MDA水平測定 將小鼠的血漿靜置1 h后離心分離(4 ℃,4000 r/min,15 min)后取上層血清,按試劑盒說明書測定小鼠血清中T-AOC、SOD和GSH-Px的活性。將小鼠肝臟制成10%的勻漿后離心分離(4 ℃,4000 r/min,15 min),取上清液按試劑盒說明書測定肝組織中T-AOC、NO和MDA的水平。

1.2.5 血清和肝臟組織SOD和GSH-Px活性測定 使用1.2.4的方法制備小鼠血清和肝臟勻漿,然后按試劑盒說明書測定血清和肝組織中SOD和GSH-Px的活性。

1.2.6 RT-PCR法測定肝組織的mRNA表達 取小鼠的肝組織勻漿用RNAzol提取肝組織的總RNA,然后將各組小鼠肝組織的總RNA濃度稀釋到1 μg/μL。取2 μL稀釋后的總RNA 提取液,在其中依次加入1 μL的OligodT18、RNase、dNTP、MLV酶和10 μL的5×Buffer,在37 ℃ 120 min,99 ℃ 4 min,4 ℃ 3 min條件下合成cDNA。然后以反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應法擴增nNOS、eNOS、iNOS、Mn-SOD、Gu/Zn-SOD和CAT的mRNA表達(表1),同時以持家基因(GAPDH)作為內(nèi)參照按同樣條件進行擴增。最后用含溴化乙錠瓊脂(1%濃度)電泳檢查PCR擴增產(chǎn)物,并用Image1.44軟件進行半定量分析[13]。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計

對每只小鼠的血清和組織測定實驗進行三次平行實驗后取平均值,然后使用SAS 9.1統(tǒng)計軟件采用one-way ANOVA方法分析各組數(shù)據(jù)在p<0.05 水平上相互是否具有顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1苦丁茶黃酮提取物的純度

通過不同濃度蘆丁標準液的OD值,繪制標準曲線為Y=0.0012X-0.001(R2=0.9936),然后計算得出苦丁茶提取物中黃酮物質(zhì)的純度為43.4%,有較多研究表明,黃酮提取液經(jīng)過大孔樹脂吸附后獲得的物質(zhì)中主要成分為黃酮類物質(zhì)[14-16],因此,本研究中粗提取物的主要成分是苦丁茶的黃酮類物質(zhì)。

2.2苦丁茶黃酮提取物對小鼠體質(zhì)量變化的影響

本研究發(fā)現(xiàn),小鼠在注射D-半乳糖后逐漸出現(xiàn)體質(zhì)量增加緩慢,毛發(fā)失去光澤并開始脫落等情況,這與季文靜等[17]的研究結(jié)果相一致。如圖1所示,與正常組相比,衰老對照組小鼠體質(zhì)量顯著下降(p<0.05),表明腹腔注射D-半乳糖可使小鼠體質(zhì)量下降;與衰老對照組小鼠相比,苦丁茶黃酮提取物處理組和維生素C處理組小鼠體質(zhì)量顯著(p<0.05)升高,表明苦丁茶黃酮和微生物可以緩解D-半乳糖造成的小鼠體質(zhì)量下降。

圖1 實驗期間各組小鼠體質(zhì)量變化(n=10)Fig.1 Changes of body weight of mice in each group during the experiment(n=10)

2.3苦丁茶黃酮提取物對小鼠器官指數(shù)的影響

當機體出現(xiàn)衰老時,胸腺和腦部將出現(xiàn)較其他器官更為明顯的萎縮,胸腺衰老是免疫衰老的主導因素,大腦衰老則是機體衰老的特征性變化[17]。由表2可知,與正常組相比,衰老對照組小鼠胸腺指數(shù)和腦指數(shù)顯著下降(p<0.05),表明腹腔注射D-半乳糖造成胸腺和腦組織萎縮;與衰老對照組小鼠相比,苦丁茶黃酮提取物處理組和維生素C和處理組小鼠的胸腺指數(shù)和腦指數(shù)都顯著升高(p<0.05),表明這兩組小鼠的胸腺和腦組織萎縮程度低于衰老對照組?？梢?苦丁茶黃酮可以有效的抑制衰老造成的器官指數(shù)下降,緩解由D-半乳糖造成的胸腺和腦組織萎縮。

表2 各組小鼠器官指數(shù)(n=10)Table 2 Organ indexes of mice in each group(n=10)

注:同列不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05),表3～表8同。2.4苦丁茶黃酮提取物對小鼠血清和肝組織中T-AOC、NO、MDA水平的影響

T-AOC是評價總抗氧化能力的重要指標,氧化自由基是導致人體衰老的最主要原因之一,通過提高機體T-AOC水平可起到減緩衰老的作用[18]。一氧化氮在機體內(nèi)具有十分重要的作用,NO可以維持體內(nèi)氧化平衡,當機體發(fā)生氧化損傷時,NO將大量產(chǎn)生,使機體失衡[13,19]。MDA同樣是評價機體受氧化損傷的重要物質(zhì),高水平的MDA將導致機體脂質(zhì)過氧化[13,20]。由表3和表4可知,與對照組小鼠相比,衰老對照組小鼠血清和肝臟組織中總抗氧化能力(T-AOC)顯著降低(p<0.05),而NO和MDA含量顯著升高(p<0.05),表明腹腔注射D-半乳糖造成了小鼠機體氧化損傷。與衰老對照組小鼠相比,苦丁茶黃酮提取物處理組小鼠血清和肝臟組織中總抗氧化能力(T-AOC)顯著升高(p<0.05),而NO和MDA含量顯著降低(p<0.05),表明灌喂50和100 mg/kg苦丁茶黃酮提取物能夠顯著改善D-半乳糖造成的氧化損傷。

表3 小鼠血清中T-AOC、NO和MDA水平(n=10)Table 3 The levels of T-AOC,NO and MDA in serum of mice(n=10)

表4 小鼠肝臟中T-AOC、NO和MDA水平(n=10)Table 4 The levels of T-AOC,NO and MDA in liver of mice(n=10)

2.5苦丁茶黃酮提取物對小鼠血清和肝組織中SOD和GSH-Px酶活的影響

SOD和GSH-Px是機體重要的抗氧化酶,提高機體中的SOD和GSH-Px酶活力可以有效的抑制氧化防止衰老[21-22]。由表5和表6可知,與對照組小鼠相比,衰老對照組小鼠血清和肝臟組織中SOD和GSH-Px活力顯著降低(p<0.05),表明腹腔注射D-半乳糖能夠降低小鼠機體抗氧化能力。與衰老對照組小鼠相比,苦丁茶黃酮提取物處理組小鼠血清和肝臟組織中SOD及GSH-Px活力顯著升高(p<0.05),表明灌喂50和100 mg/kg苦丁茶黃酮提取物能夠顯著改善D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化能力。

表5 小鼠血清中SOD和GSH-Px酶活力(n=10)Table 5 The enzyme activities of SOD and GSH-Px in serum of mice(n=10)

表6 小鼠肝臟中SOD和GSH-Px酶活力(n=10)Table 6 The enzyme activities of SOD and GSH-Px in liver of mice(n=10)

2.6苦丁茶黃酮提取物對小鼠肝臟中nNOS、eNOS和iNOS mRNA表達的影響

表7 各組小鼠肝組織中nNOS、eNOS和iNOS的mRNA表達強度的半定量分析(n=10)Table 7 Semi-quantitative analysis of mRNA expression of nNOS, eNOS and iNOS in liver tissue of mice in each group mice(n=10)

表8 各組小鼠肝組織中Mn-SOD、Gu/Zn-SOD和CAT的mRNA表達強度的半定量分析(n=10)Table 8 Semi-quantitative analysis of mRNA expressions levels of Mn-SOD, Gu/Zn-SOD,and CAT in liver tissue of mice in each group mice(n=10)

由圖2和表7可知,與對照組小鼠相比,衰老對照組肝臟組織中神經(jīng)型一氧化氮合酶(nNOS)和內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的mRNA表達水平顯著降低(p<0.05),而誘導型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA表達水平顯著升高(p<0.05),表明腹腔注射D-半乳糖能夠?qū)π∈蟾谓M織中的一氧化氮合酶產(chǎn)生影響。與衰老對照組小鼠相比,苦丁茶黃酮提取物處理組小鼠肝臟組織中nNOS和eNOS的mRNA表達水平顯著升高(p<0.05),iNOS mRNA表達水平顯著降低(p<0.05),表明灌喂50和100 mg/kg苦丁茶黃酮提取物能使肝組織中的 nNOS、eNOS和iNOS表達接近正常組小鼠。iNOS在被誘導后的短時間內(nèi)可釋放大量的NO,高濃度NO與氧自由基產(chǎn)生過氧亞硝酸根,誘導氧化應激,導致機體進一步氧化衰老;iNOS是與阿爾茨海默病發(fā)病相關應激酶之一,能通過釋放高濃度NO導致氧化損傷[23]。研究表明nNOS基因敲除小鼠顯示出由于加速衰老造成的記憶功能損傷[23-24],nNOS和eNOS均是基礎表達的組織構(gòu)成酶,參與學習記憶障礙的整個進程,通過延緩衰老改善學習記憶功能損傷后機體eNOS蛋白和表達均出現(xiàn)上升[23,25],而nNOS和eNOS在機體出現(xiàn)氧化受損后含量下降,提高機體內(nèi)的nNOS和eNOS 含量也將有效控制衰老[13,26]。本研究中苦丁茶黃酮也可以有效的控制小鼠肝組織中iNOS表達含量,提高nNOS、eNOS表達含量以達到減緩衰老的目的。

圖2 各組小鼠肝組織中nNOS、eNOS和iNOS的mRNA表達強度(n=10)Fig.2 mRNA expressions levels of nNOS,eNOS, and iNOS in liver tissue of mice in each group(n=10)

2.7苦丁茶黃酮提取物對小鼠肝臟中Mn-SOD、Gu/Zn-SOD和CAT的mRNA表達的影響

SOD存在三種異構(gòu)體,Mn-SOD、Gu/Zn-SOD和EC-SOD,機體內(nèi)的Mn-SOD和Gu/Zn-SOD能控制自由基保持在低水平,保持機體健康。CAT具有清除氧自由基和促進過氧化氫分解的功效,能避免氧化對體內(nèi)細胞的損傷[13,27]。由圖3和表8可以看出,與對照組小鼠相比,衰老對照組肝臟組織中Mn-SOD、Gu/Zn-SOD和CAT的mRNA表達水平顯著降低(p<0.05),表明腹腔注射D-半乳糖能夠?qū)е滦∈笏ダ?。與衰老對照組小鼠相比,苦丁茶黃酮提取物處理組小鼠肝臟組織中Mu-SOD、GU/Zn-SOD和CAT的mRNA表達水平顯著升高(p<0.05)。實驗結(jié)果顯示苦丁茶黃酮可通過提高機體內(nèi)Mn-SOD、Gu/Zn-SOD和CAT的含量抑制D-半乳糖對小鼠造成的氧化衰老。

圖3 各組小鼠肝組織中Mn-SOD、Gu/Zn-SOD和CAT的mRNA表達強度(n=10)Fig.3 mRNA expressions levels of Mn-SOD,Gu/Zn-SOD,and CAT in liver tissue of mice in each group(n=10)

3 結(jié)論

本研究通過D-半乳糖建立小鼠衰老模型來檢測苦丁茶黃酮的衰老預防作用。實驗結(jié)果顯示，苦丁茶黃酮可以有效的抑制衰老造成的小鼠體質(zhì)量下降,同時可以抑制衰老造成的胸腺和腦器官指數(shù)下降。通過對小鼠血清和肝組織的檢測進一步發(fā)現(xiàn)苦丁茶黃酮能夠提高D-半乳糖導致衰老小鼠的T-AOC水平和降低MDA、NO水平,同時也能提高SOD和GSH-Px酶活力。通過RT-PCR實驗證明,苦丁茶黃酮可上調(diào)衰老小鼠肝組織中nNOS、eNOS、Mn-SOD、Gu/Zn-SOD、CAT的mRNA表達和下調(diào)iNOS表達。以上的實驗結(jié)果充分證實了苦丁茶黃酮具有很好的衰老預防作用,且效果優(yōu)于同濃度的維生素C。通過本研究的結(jié)果將為進一步對苦丁茶黃酮的純化和抗衰老作用的臨床研究提供支持。

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ImprovementeffectsofKudingteaflavonoidsextractsonD-galactoseinducedmiceaging

ZHAOXin1,2,3,4,YIRuo-kun1,2,3,4,SUNPeng1,2,3,4,SONGJia-le1,2,3,5,*

(1.Chongqing Collaborative Innovation Center for Functional Food, Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China;2.Chongqing Engineering Research Center of Functional Food,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China; 3.Chongqing Engineering Laboratory for Research and Development of Functional Food, Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China; 4.College of Biological and Chemical Engineering,Chongqing University of Education,Chongqing 400067,China; 5.Department of Food Hygiene and Nutrition,School of Public Health,Guilin Medical University,Guilin 541004,China)

The improvement effects of Kuding tea flavonoids extracts(KFE)on D-galactose induced aging in mice were studied in this study. Aging moded mice induced by the D-galactose injection(120 mg/kg)were experimental subjects whose body weight,organ index,serum and tissue index were evaluating indicators. Experiment kit and RT-PCR detection methods were used for determination the effects of KFE(50 and 100 mg/kg)on serum and tissue of aging mice,the anti-aging effects of KFE were comprehensive investigated. The experiment results showed that KFE could significantly(p<0.05)improve the weight loss,thymus and brain organ index decreasing of mice by D-galactose treatment. KFE could raise total antioxidative capability(T-AOC)level and reduce malondialdehyde(MDA)and nitric oxide(NO)levels,meanwhile KFE also increased enzyme activity of superoxide dismutase(SOD)and glutathione peroxidase(GSH-Px)in serum and hepatic tissue of aging mice. KFE also increased significantly(p<0.05)raise neuronal nitric oxide synthase(nNOS),endothelial nitric oxide synthase(eNOS),manganese superoxide dismutase(Mn-SOD),copper zinc superoxide dismutase(Gu/Zn-SOD),catalase(CAT)mRNA expressions and reduce inducible nitric oxide synthase(iNOS)expression,and high concentration of KFE(100 mg/kg)showed the better effects than the same concentration of vitamin C.

Kuding tea;flavonoid;D-galactose;aging;mRNA expression levels

2017-02-07

趙欣(1981-)，男，博士，教授，研究方向：食品營養(yǎng)和功能性食品，E-mail:zhaoxin@cque.edu.cn。

*通訊作者:宋家樂(1983-)，男，博士，副教授，研究方向：食品營養(yǎng)和功能性食品，E-mail:songjiale@glmc.edu.cn。

重慶高校創(chuàng)新團隊建設計劃資助項目(CXTD201601040)；重慶第二師范學院引進高層次人才項目(2013BSRC001)；重慶市工程技術(shù)研究中心建設項目(cstc2015yfpt_gcjsyjzx0027)。

TS201.4

:A

:1002-0306(2017)16-0303-06

10.13386/j.issn1002-0306.2017.16.057